中药薄荷的33种农残测定分析

气相色谱-串联质谱法（岛津 GC-MS -TQ8040 NX）色谱条件色谱柱：NanoChrom BP-50+MS气相柱，30m×0.25mm，0.25μm;进样口温度：250℃；升温程序：初始温度为60℃，保持1min；以10℃/min升温至160℃；再以2℃/min升温至230℃，最后以15℃/min升温至300℃，保持6min；载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；进样方式：不分流进样；恒压模式：146kPa；进样量：1μL。质谱条件电离方式：电子轰击电离源（EI）；电离能量：70Ev；接口温度：250℃；离子源温度：250℃；监测方式：多反应检测模式（MRM）；溶剂延迟：10.0min。   高效液相色谱-串联质谱法（岛津 LC-MS 8045）色谱条件色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm，2.6 μm)流动相：A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）B：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）=95:5流速: 0.3 mL/min柱温: 40 ℃进样量: 2 µLTime 9.165 Scan# 29.258 inten. 中药薄荷的33种农残测定分析 背景 薄荷为唇形科植物薄荷的干燥地上部分，含有挥发油和色素类成分，这些成分易污染 GC-MS/MS 色谱柱、衬管等问题，从而导致实验结果不准确，另外常规固相萃取处理后的溶液易造成 LC-MS/MS 分析中目标物响应变低。纳谱分析推出的 GCB/NH2-A 固相萃取柱和 Q-15A06 净化管都可以对含挥发油和色素中药处理较为干净。今天，我们来看看薄荷项目的前处理效果吧。 薄荷 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的 QuEChERS 法和固相萃取法三，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。 实验步骤 1 对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL， 置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每 1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含 0.1pg的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约 0.6mL， 分别加入混合对照品溶液 10pL、20 pL、50uL、100uL、150pL、200uL，加乙腈稀释至1mL， 涡旋混匀，即得。 2 供试品溶液的制备 2.1 GC-MS/MS 样品提取(直接提取法) 精密称取 5g 样品(3号筛)，加氯化钠1g， 加入50mL乙腈， 匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加 50mL 乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL，加乙腈定容 至10mL，摇匀，待净化。 2.2 LC-MS/MS 样品提取 (QuEChERS法) 取供试品粉末(过三号筛)3g，精密称定，置50mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液 15mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈 15mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡(500 次/分)5分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末(4： 1)7.5g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡(500次/分)3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心(每分钟4000转)5分钟，待净化。 3 净化 GC/MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱； 净化：取 SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱用乙腈：甲苯(3：1)10mL活化，量取上述 GC-MS/MS样品提取项下的薄荷提取液2mL，置已活化的 SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱中，用乙腈：甲苯(3：1)20mL洗脱，收集全部样品液与洗脱液，40℃水浴减压回收至2mL， 即得。 GC/MS/MS测定： 基质加标配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1mL，氮吹至约0.6mL 加入混合对照溶液，，乙腈定容至1mL， 再加入 0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22um尼龙针式过滤器，上机分析。 样品溶液配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液 1mL 加入0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22um尼龙针式过滤器，上机分析。 LC/MS/MS 样品净化： Q法净化管： SelectCore QuEChERS Q-15A06 SelectCore QuEChERS 净化管 15mL， Pesticide Residue A06 (含色素挥发油中药农残Q法) 净化：量取上述LC-MS/MS样品提取项下的薄荷取上述提取液上清液9mL 置： Q-15A06 净化管中涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/分)5分钟使净化完全，离心(每分钟4000 转)5分钟，即得。 LC/MS/MS 测定： 基质加标配制：精密吸取上清液2.5mL，置氮吹仪上于 40°C水浴浓缩至约 0.6mL，加入混合对照品液再加乙腈稀释至1.0mL，涡旋混匀，再加入0.3mL水，混匀，过 0.22um针式尼龙滤头，上机分析。 样品溶液配制：精密吸取上清液 2.5mL，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至1.0mL，加入 0.3 mL水，混匀，过 0.22um针式尼龙滤头，上机分析。 4 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS -TQ8040 NX) 色谱条件 色谱柱： NanoChrom BP-50+MS 气相柱， 30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃，保持1min； 以10℃/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230℃，最后以15℃/min 升温至300℃，保持6min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：不分流进样； 恒压模式：146kPa： 进样量：1luL。 质谱条件 电离方式：：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：70Ev； 接口温度：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：10.0min。 5 高效液相色谱-串联质谱法(岛津 LC-MS 8045) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1×100mm， 2.6 um) 流动相： A： 0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵) B： 乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有 5mmol/L 甲酸铵)=95：5 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：2uL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源(Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：多反应监测(Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：氮气3.0L/min 加热气： 干燥空气 10.0L/min DL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 干燥气： N2 10 L/min 6 注意事项 GC-MS/MS：久效磷参考 LC-MS/MS分析结果。 LC-MS/MS： 由于样品中挥发油类成分和色素类成分较多，这些成分容易造成目标物响应变低，故对样品浓度进行减半处理，减半后的样品与基质液浓度为 0.5g/mL(与直接提取法样品浓度一致)；甲拌磷参考GC-MS/MS 分析结果； 甲拌磷砜参考GC-MS/MS分析结果(检测条件见下表)由于使用33种农残混标定位甲拌磷砜在 GC-MS/MS 上出峰时间时使用以下4组离子对在甲拌磷砜相邻时间段内有多个化合物均有响应，为避免定位不准确务必使用甲拌磷砜单标对照品来定位；水胺硫磷参考 GC-MS/MS 分析结果；杀虫脒参考 GC-MS/MS 结果。 目标物 监测离子对 电压(CE) 甲拌磷砜(GC-MS/MS) 153.00>97.0 10 124.9>96.9 5 199.00>143.00 10 199.00>96.90 15 备注：离子对条件参照2341 第四法中的离子对信息 备注：离子对条件参照2341 第四法中的离子对信息 7实验结果 ①：为薄荷提取液原液(直接提取法) ②：为 SelectCore QuEChERS Q-15A06 净化后的薄荷提取液(QuEChERS 法) ③：为 SelectCore GCB/NH2-A 500mg/500mg/6mL 净化后的薄荷提取液 薄荷基质加标 GC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 固相萃取法三处理薄荷基质 LOQ浓度点加标谱图 (GC-MS/MS方法) 薄荷基质加标LC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 QuEChERS 法处理薄荷基质 LOQ浓度点加标谱图 (LC-MS/MS方法) 表1 薄荷中33种农药残留的测定添加回收结果(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 69.8% 苯线磷亚砜 86.1% 3-羟基克百威 71.3% 甲基对硫磷 82.8% 地虫硫磷 91.2% 涕灭威 80.7% 对硫磷 80.2% 硫线磷 101.2% 涕灭威砜 89.0% 久效磷 83.5% 蝇毒磷 94.3% 涕灭威亚砜 90.1% 磷胺 83.3% 治螟磷 88.7% 灭线磷 75.1% α-六六六 79.1% 特丁硫磷 94.1% 氯唑磷 88.3% β-六六六 82.3% 特丁硫磷砜 84.3% 水胺硫磷 88.4% y-六六六 82.2% 特丁硫磷亚砜 82.6% α-硫丹 78.0% 8-六六六 79.9% 甲基硫环磷 76.4% B-硫丹 81.4% 2，4'-滴滴涕 82.6% 甲磺隆 72.6% 硫丹硫酸酯 76.9% 4，4'-滴滴滴 80.2% 氯磺隆 69.8% 氟虫腈 66.5% 4，4'-滴滴涕 82.6% 胺苯磺隆 85.0% 氟虫腈砜 80.1% 4，4'-滴滴伊 79.3% 甲拌磷 89.6% 氟虫腈亚砜 86.1% 杀虫脒 74.5% 甲拌磷砜 82.9% 氟甲腈 78.7% 除草醚 85.4% 甲拌磷亚砜 85.2% o，p'-三氯杀螨醇 79.2% 艾氏剂 77.7% 甲基异柳磷 95.9% p，p'-三氯杀螨醇 79.3% 狄氏剂 73.8% 内吸磷-O 79.2% 硫环磷 77.2% 苯线磷 74.8% 内吸磷-S 81.8% 苯线磷砜 120.8% 克百威 83.8% 8实验讨论 通过以上实验数据可以看出，薄荷使用 SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱处理对其色素类和挥发油类成分吸附良好，有效地减轻了样品中色素成分对 GC-MS/MS柱前端的污染，基质加标中各目标物保留时间稳定；使用 SelectCore QuEChERS Q-15A06 净化管处理的薄荷 LC-MS/MS 基质加标液中化合物出峰良好，有效地减轻了由于样品中挥发油导致的目标物响应低的问题；搭配上述解决办法有效地解决了薄荷农残检测中存在的问题，提高了实验效率，为薄荷的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。 纳谱分析纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com NanoChrom