中药厚朴中33种农残检测方案

中药厚朴的33种农残测定分析 背景 自2020版中国药典四部2341农药残留量测定法中新增第五法，药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法，部分中药检测企业反馈厚朴药材由于含有酚类、挥发油类、生物碱类等，基质效应较为严重，药典规定的4种前处理方法都难以解决。纳谱分析根据挥发油成分特点，调整亲水亲脂聚乙烯吡咯烷酮填料技术参数，特别推出 SelectCore HLB-A 中药农专专用固相萃取柱(200mg/6mL)产品。相比市面上常规 HLB产品， HLB-A可以吸附更多挥发油类成分，并且在除色效果上也较好，从而降低了基质效应。今天，我们来看看厚朴项目的前处理效果吧。 厚朴 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的固相萃取法方式二，适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。 实验步骤 1 对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL， 置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每 1 mL 含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL 含0.1 ug的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液 1.0 mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浴缩至约0.6mL，分别加人混合对照品溶液10 uL、20uL、50 uL、100 uL、150 uL、200 uL， 加乙腈稀释至1mL，涡旋混匀，即得。 2供试品溶液的制备 2.1提取 称取 5g厚朴样品，加氯化钠1g，加入50 mL乙腈，，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50mL 乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL， 加乙腈定容至10 mL，摇匀，待净化。 3 净化 SPE柱： SelectCore HLB-A 中药农专专用固相萃取柱(200mg/6mL) 净化1：量取直接提取法制备的供试品溶液3 mL， 过 SelectCore HLB-A 中药农残专用固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。如净化1方式磺隆类成分回收率较低，可以再结合下面的的化②的回收率数据； 净化2：量取直接提取法制备的供试品溶液5mL， 过 SelectCore HLB 固相萃取柱，收集全部净化液，混匀； GC/MS/MS 测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3 mL 内标溶液，混匀，过 PTFE 膜，上机分析。 LC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL， 加入0.3mL水，混匀，过 PTFE 膜，上机分析。 4 高效液相色谱-串联质谱法(岛津 LC-MS8050) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1×100 mm， 2.6 um)流动相： A： 0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L 甲酸铵) B：乙乙/0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L 甲酸铵)=95/5 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：1uL 梯度： 时间 (min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源(Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描监测方式：多反应监测 (Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：：氮气3.0 L/min 加热气： 干燥空气 10.0 L/min DL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300°C 干燥气： N210L/min 图1： ChromCore C18-MS Pesticides 分析30种农药标准品(以甲胺磷计0.025 pg/mL) 的典型谱图 图2：厚朴空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB 净净) 图3：厚朴空白基质加标的典型谱图(SelectCore HLB-A净化) 从以上厚朴基质加标LC/MS/MS图对比来看， HLB-A 处理后的加标样品中大部分农残成分的响应值更大，让分析检测结果更为准确。 5 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS 8030) 色谱条件 色谱柱： DB-17MS，30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃， 保持1 min； 以 10 ℃/min 升温至160℃；再以2C/min 升温至230℃，最后以15℃/min 升温至300℃，保持6min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：不分流进样； 恒压模式：146kPa； 进样量：1uL。 质谱条件 电离方式：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：70Ev； 传输线温度：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：10.0 min。 表1厚朴中33种农药残留的的测定添加回收结果(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 98.1% 地虫硫磷 98.7% 涕灭威砜 92.2% 甲基对硫磷 80.2% 硫线磷 96.4% 涕灭威亚砜 111.1% 对硫磷 101.8% 蝇毒磷 96.9% 灭线磷 79.1% 久效磷 101.5% 治螟磷 112.4% 氯唑磷 101.1% 磷胺 99.2% 特丁硫磷 84.5% 水胺硫磷 87.2% α-六六六 86.7% 特丁硫磷砜 98.0% α-硫丹 93.2% β-六六六 90.9% 特丁硫磷亚砜 96.5% β-硫丹 66.2% y-六六六 89.5% 甲基硫环磷 97.6% 硫丹硫酸酯 98.0% 8-六六六 78.0% 甲磺隆 96.1% 氟虫腈 96.8% 2，4'-滴滴涕 105.3% 氯磺隆 90.3% 氟虫腈砜 106.6% 4，4'-滴滴滴 87.4% 胺苯磺隆 98.9% 氟虫腈亚砜 99.8% 4，4'-滴滴涕 68.1% 甲拌磷 87.9% 氟甲腈 104.4% 4，4'-滴滴伊 62.3% 甲拌磷砜 86.9% o，p'-三氯杀螨醇 95.8% 杀虫脒 85.2% 甲拌磷亚砜 97.8% p，p'-三氯杀螨醇 65.3% 除草醚 68.2% 甲基异柳磷 93.1% 硫环磷 97.4% 艾氏剂 72.8% 内吸磷-O 94.5 注：磺隆类、三氯杀螨醇农残用 3 mL 供试品溶液净化时，回收率 偏低，可以另取5 mL 供试品溶液净化，回收率可以满足药典要 求(回收率红色字体代表的是5mL样品过柱)。 狄氏剂 79.3% 内吸磷-S 100.6% 苯线磷 97.0% 克百威 101.2% 苯线磷砜 109.3% 3-羟基克百威 104.5% 苯线磷亚砜 93.1% 涕灭威 80.5% 6处理后溶液的颜色比对 厚 朴 提 取 液 过 H L B - A 柱 厚朴提取液过 HLB 柱 由上图可以看出，厚朴提取液经过 SelectCore HLB-A 中药农残专用柱净化后样品颜色澄清透明，而常规 HLB柱净化后样品颜色较深。 7 厚朴过 HLB与 HLB-A SPE 柱的部分农残基质响应的区别(左边为HLB， 右边为HLB-A) 8实验讨论 通过以上实验数据比对，可以看出 SelectCore HLB-A 中药农残专用固相萃取柱对厚朴溶液颜色有很好的净化效果，容易干扰检测的挥发油类物质和酚类物质都得到了较好的净化，不仅保护了分析柱和离子源，还极大的消除了由于基质效应带来的检测灵敏度下降等问题。该方法不需要固相萃取柱活化步骤，提取液直接过柱就可以测定，过柱时间花费不到5分钟，不仅操作便捷，对于33种农残成分的峰形均有明显改善。 纳谱分析NanoChrom纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com 表1 厚朴中33种农药残留的的测定添加回收结果（%）农残成分回收率农残成分回收率农残成分回收率甲胺磷98.1%地虫硫磷98.7%涕灭威砜92.2%甲基对硫磷80.2%硫线磷96.4%涕灭威亚砜111.1%对硫磷101.8%蝇毒磷96.9%灭线磷79.1%久效磷101.5%治螟磷112.4%氯唑磷101.1%磷胺99.2%特丁硫磷84.5%水胺硫磷87.2%α-六六六86.7%特丁硫磷砜98.0%α-硫丹93.2%β-六六六90.9%特丁硫磷亚砜96.5%β-硫丹66.2%γ-六六六89.5%甲基硫环磷97.6%硫丹硫酸酯98.0%δ-六六六78.0%甲磺隆96.1%氟虫腈96.8%2,4'-滴滴涕105.3%氯磺隆90.3%氟虫腈砜106.6%4,4'-滴滴滴87.4%胺苯磺隆98.9%氟虫腈亚砜99.8%4,4'-滴滴涕68.1%甲拌磷87.9%氟甲腈104.4%4,4'-滴滴伊62.3%甲拌磷砜86.9%o,p'-三氯杀螨醇95.8%杀虫脒85.2%甲拌磷亚砜97.8%p,p'-三氯杀螨醇65.3%除草醚68.2%甲基异柳磷93.1%硫环磷97.4%艾氏剂72.8%内吸磷-O94.5注：磺隆类、三氯杀螨醇农残用3mL供试品溶液净化时，回收率偏低，可以另取5mL供试品溶液净化，回收率可以满足药典要求（回收率红色字体代表的是5mL样品过柱）。狄氏剂79.3%内吸磷-S100.6%苯线磷97.0%克百威101.2%苯线磷砜109.3%3-羟基克百威104.5%苯线磷亚砜93.1%涕灭威80.5%