维生素是人体生长发育所必需的营养元素,其中维生素A、维生素D和维生素E是机体维持正常代谢和机能的所必需的脂溶性维生素[1]。除了维生素A、维生素D2和D3,以及α-维生素E(α-生育酚)外,相关研究发现维生素E的其它生育酚异构体对人体也有一定生理作用,其中以β、γ、δ-生育酚形式较为常见[2]
thermoscientific 实验结果和讨论 热线800 8105118电话4006505118www.thermofisher.com仅用于研究目的。不可用于诊断目的。◎2020 Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利。所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的资产,除非另有指明。 采用在线中心切割二维液相色谱法快速分析特医食品中维生素A、维生素D和维生素E四种异构体的含量 熊亮冉良骥金燕 赛默飞世尔科技(中国)有限公司色谱质谱部 关键词 特医食品,维生素A,维生素D,α-生育酚,β-生育酚,y-生育酚,6-生育酚,二维液相色谱,中心切割 维生素是人体生长发育所必需的营养元素,其中维生素A、维生素D和维生素E是机体维持正常代谢和机能的所必需的脂溶性维生素。除了维生素A、维生素D2和D3,以及α-维生素E(α-生育酚)外,相关研究发现维生素E的其它生育酚异构体对人体也有一定生理作用,其中以β、y、i8-生育酚形式较为常见?。 特医食品(即特殊医学用途配方食品),是为了满足进食受限、消化吸收屏障、代谢紊乱或特定疾病状态人群对营养素或膳食需求,专门加工配制而成的配方食品。该类产品必须在医生或临床营养师指导下,单独食用或与其他食品配合食用B。根据食品安全国家标准特殊医学用途配方食品通则GB29922-2013的规定,特医食品中维生素A、D、E的分析遵循食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定规定4。食品中维生素D由于本身含量低、基质干扰严重,国家标准方法采用液质联用或半制备正相净化、反相分析的方式对其进行分离检测。但液质联用方法复杂,维护成本相对较高;而正相净化方法易受流动相等条件影响,极大影响样品的分析效率和方法重复性。 本文在前期已经建立的同时测定食品中维生素A、D和4种维生素E异构体含量在线二维液相色谱法基础上[5-6],进一步优化色谱分析条件,建立了特医食品中VA、四种VE异构体及微量VD的中心切割快速分析方法,缩短了样品分宁时间,进一步提高了方法分析效率,可以用于特医食品等多种食品基质中维生素A、D和E的常规快速检测。 1、仪器与试剂 1.1仪器 Thermofisher UltiMate3000 双三元液相色谱系统:双三元梯度泵(包含两个独立的三元梯度泵);自动进样器;带两个2位6通阀的柱温箱;二极管阵列检测器(配13uL流通池);500uL样品收集环; Chromeleon 7.2.10变色龙色谱数据软件。 1.2试剂 甲醇(色谱级, Fisher公司),乙腈(色谱级, Fisher公司),去离子水(18.2MQ, Millipore纯水机); 1.3标准品 维生素A(all-trans retinol, ≥95%, Sigma-Aldrich), 维生素D2(98.1%,Dr.Ehrenstorfer GmbH), 维生素D3(99.6%,Dr.Ehrenstorfer GmbH),α-生育酚(98.0%, Sigma-Aldrich)β、丫、8-生育酚(≥96%, Sigma-Aldrich)。 2、标准品溶液制备 分别精密称量维生素A、D2、D3,,(α、β、y和8-生育酚标准品适量,至10mL棕色容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,配制成浓度分别为0.5mg/mL的维生素A溶液, 0.25mg/mL的维生素D2和D3溶液, 2.0mg/mL的α、β、y-8- 生育酚溶液。分别精密量取维生素A、D2、D3,α、β、和8-生育酚标准品溶液适量,至10mL棕色容量瓶中,甲醇稀释定容成系列标准混合溶液,各标准品溶液浓度见表1。 表1各维生素混合标准品工作溶液浓度 Vitamins Retention Concentration Level ug/mL Time, min 1 2 3 4 5 6 7 VA 3.770 0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0 10.0 α-VE 7.177 2.0 5.0 10.020.040.060.01100.0 B-VE 7.627 2.0 5.0 10.020.040.060.0100.0 y-VE 7.790 2.0 5.0 10.020.040.060.0100.0 8 -VE 8.140 2.0 5.0 10.020.040.060.0100.0 VD2 12.760 0.020.05 0.1 0.2 0.4 0.6 1.0 VD3 13.007 0.020.05 0.1 0.2 0.4 0.6 1.0 3、样品溶液制备 参考GB 5009.82-2016的方法,精密称取固体特医食品样品约5g(精确到0.01g)于150mL平底烧瓶中,固体试样需用约20mL45℃~50℃温水使其溶解,混匀。 于上述处理的试样溶液中加入1.0g抗坏血酸和0.1gBHT, 混匀,加入30mL无水乙醇,充分混匀后加入约20mL 0.5g/g的氢氧化钾水溶液混匀,在80℃恒温水浴条件下,磁力搅拌皂化约30min后,取出立刻用冷水冷去到室温。 3.2液液萃取 将上述皂化液转移入250mL分液漏斗中,加入50mL石油醚-乙醚混合液(1:1,V:V),振荡萃取5min,将下层溶液转移至另一个250mL分液漏斗,加入50mL石油醚-乙醚混合液再次萃取,合并醚液,用约100mL水洗涤醚液,重复3次,至醚液洗至中性。醚液通过无水硫酸钠脱水过滤,滤液收入250mL圆底烧瓶中,于旋转蒸发仪上在40℃左右水浴旋蒸至约2mL, 立即氮气吹干,准确加入1mL甲醇复溶后,上机分析。 4、色谱条件 色谱条件见表2,一维和二维梯度程序以及阀切换时间见表3,仪器连接图见图1。 表2色谱条件 维色谱柱 二维色谱柱 Accucore PFP 4.6x100 mm, 2.6 um; P/N: 17426-104630FOODKIT1& 2 ADE 4.6×100 mm, 2.6 um; P/N: VITADE-004K1 柱温 25℃ 进样量 表3一维和二维梯度程序及阀切换时间 = -维分析泵时间(分钟) A% B% C%0 20 80 0 二维分析泵时间(分钟) A% B% C% 阀切换时间时间(分钟) 左阀 右阀 0 0 40 60 0 6_1 12 9 0 100 0 1 0 40 60 5.9 61 61 10 0 100 0 2 60 0 40 6.2 61 12 11 20 80 0 6.5 60 0 40 9 1_2 61 15 20 80 0 7 0 40 60 40 60 图1仪器连接图 1、色谱条件优化 本文在前期已经建立的同时测定食品中维生素A、D和4种维生素E异构体含量在线二维液相色谱法基础上,进一步优化色谱分析条件,建立了特医食品中VA、四种VE异构体及微量VD的中心切割快速分析方法。整个分析方法从原来的24min缩短至15min,大大缩短了样品分析时间,进一步提高了方法分析效率。混合标准品溶液分析谱图及典型特医食品样品分析谱图分别见图2和图3。从图中可见,在缩短了分析时间的同时,依然可以保证一维色谱柱对维生素A、四种维生素E异构体以及杂质的良好分离,二维色谱柱对两种维生素D异构体和杂质的良好分离。 500. B 图2维生素A、D和E混合标准溶液分析谱图 (A,其中0~9min 为一维谱图,9~15min 为二维谱图;B,二维放大图谱) 5三 150 1500 图3典型特医食品样品分析谱图 (A,其中0~9min为一维谱图,9~15min 为二维谱图;B,二维放大图谱) 2、方法线性、灵敏度及精密度结果 本文按照食品国标要求,考察了维生素A、维生素D2和D3以及维生素E的4个异构体的线性及检测限。结果如表4所示,不同维生素在不同的线性范围内均保持良好线性关系,相关系数R?大于0.9996。方法灵敏度较高,维生素D3的检测限可达3.0 ng/mL。 取0.1pg/mL混合标准品溶液,连续进样6次,结果维生素A、维生素D2和D3以及维生素E的4个异构体的保留时间RSD均小于0.5%,峰面积RSD均小于1%,表明方法精密度较好。 表4方法线性及检测限结果 Vitamins Detection wavelength, nm Range, ug/mL Linearity equation R2 LOD, ng/mL A 325 0.2-10 Y=1.3997X+0.0013 0.9999 5.3 D2 264 0.02-1 Y=0.6316X+0.0004 0.9998 3.4 D3 264 0.02-1 Y=0.7011X+0.0004 0.9999 3.0 α-VE 294 2-100 Y=0.0530X-0.0339 0.9999 74 B-VE 294 2-100 Y=0.0620X-0.0069 0.9996 Y-VE 294 2-100 Y=0.0746X-0.0072 0.9998 8 -VE 294 2-100 Y=0.0663X-0.0023 0.9998 本文基于二维液相色谱技术,利用赛默飞双三元液相色谱系统,在前期已经建立的同时测定食品中维生素A、D和4种维生素E异构体含量在线二维液相色谱法基础上,进一步优化了色谱分析条件,实现了特医食品中VA、四种VE异构体及微量VD的快速分析。本方法简便快速,自动化程度高,可以用于特医食品等多种食品基质中维生素A、D和E的常规快速检测。 ( 参考文献 ) ( Stillwell W, An introduction to biological membranes (secondedition) M. Amsterdam: Elsevier Science, 2 016. ) ( 2Kamal-Eldin A., Gorgen S, Lampi A, Normal ph a se high per-formance liquid c hromatography of tecopherols and tocotri-enols. Comparison of different chromatographic columns . Journal of Chromatography A, 2000, 881:217-227. ) ( ③GB 29922-2013,食品安全国家标准特殊医学用途配方食品通则 ) ( [4] GB 5009.82-2016,食品安全国家标准食品维维生素 A、D、E的测定 ) ( Zhang Y H, Z hang D W , Cao Y, Simultaneous determinationof vitamins A, D in vitamin A and D p harmaceutical by o n -line two - dimensional reversephase liquid chromatographyl . Journal of Instrumental Analysis, 2016, 35(1): 2 8 -34. ) ( 16 Guobin Shen, Y an Jin, Giorgia Greco, D ennis Koehler, Sab-rina Patzelt, Simultaneous determination of vitamin A, D andfour vitamin E isomers in infant formula by offline solid phaseextraction and o nline two-dimensional l i quid c hromatogra-phy, Application note 73351. ) 本文基于二维液相色谱技术,利用赛默飞双三元液相色谱系统,在前期已经建立的同时测定食品中维生素A、D和4种维生素E异构体含量在线二维液相色谱法基础上,进一步优化了色谱分析条件,实现了特医食品中VA、四种VE异构体及微量VD的快速分析。本方法简便快速,自动化程度高,可以用于特医食品等多种食品基质中维生素A、D和E的常规快速检测。
还剩2页未读,是否继续阅读?
赛默飞色谱与质谱为您提供《采用在线中心切割二维液相色谱法快速分析特医食品中维生素A、维生素D和维生素E四种异构体的含量》,该方案主要用于特医食品中营养成分检测,参考标准--,《采用在线中心切割二维液相色谱法快速分析特医食品中维生素A、维生素D和维生素E四种异构体的含量》用到的仪器有赛默飞UltiMate3000制备液相色谱