茶叶中嘧霉胺检测方案(液相色谱仪)

重现性、线性和检出限 QuEChERS 前处理 UHPLC 基于嘧霉胺在茶叶中的残留及其欧盟对嘧霉胺在茶叶中残留限量的提高，本文拟通过优化实验条件，建立一种高效液相色谱法快速、准确测定茶叶中嘧霉胺的方法。 引言 嘧霉胺， [N-(4，6-二甲基嘧啶-2-基)苯胺)，是近年来开发的一种结构新颖、作用机制独特的嘧啶胺类内吸性杀菌剂，主要用于灰霉病的防治，其结构式见图1。 图1.嘧霉胺的结构式 目前嘧霉胺的常见测定方法有： 气相色谱法、气相质谱法、高效液相色谱法和高效液相质谱法。样品的前处理是茶叶中嘧霉胺测定的关键步骤之一。QuEChERS 是近年来测定农残的有效前处理方法。QuEChERS (Quick、 EasyCheap、Effective、Rugged、Safety 的缩写)，是“快速、简易、廉价、有效、稳定、安全"的萃取方法。该方法是 Anastassiades 等于2002年首先在 EPRW 会议提出， 并于2003年正式发表的一个用于农产品中多农药残留分析的前处理方法。该方法利用乙腈萃取样品中的农药残留，氯化钠和无水硫酸镁盐析分层，萃取液经无水硫酸镁和PSA(N-丙基乙二胺)分散固相萃取净化后，用GC、GC/MS等进行多残留分析。 基于 QuEChERS 方法的优势、嘧霉胺的特点以及样品基质的考虑，本文拟采用高效液相色谱法，结合QuEChERS 前 处理技术，对茶叶中嘧霉胺进行快速、准确、灵敏的测定，以满足欧盟对茶叶中嘧霉胺的最新限量要求 (0.05mg/L)。仪器Thermo Scientific M DionexM UltiMate M 3000RS 四元梯度系统， 包括： -LGP-3400RS 四元分析泵(具备溶剂脱气功能)-WPS-3000TRS RS 自动进样器(配置100uL定量环)-TCC-3000RS柱温箱(具备控温功能)-DAD-3000RS二极管列列检测器(检测池体积2.5 uL)Thermo Scientific Dionex Chromeleon色谱系统控制软件，版本6.80或以上 ( 试剂 ) ( 去离子水，18.2 M Q- c m (Thermo Scientific G e nPure Pro UV-TOC，P/N 50131948) ) ( 乙腈(CH，CN)， HP L C 级 (Fisher Chemical， P/ N AC610010040) ) 标准品 色谱条件 嘧霉胺标准品购买于上海安谱科学仪器有限公司。 色谱柱： Acclaim 120，C18，2.2 pm， 2.1x 100 mm (P/N 068982)流动相：乙腈/水(v：v，60：40，等度) 标准溶液的制备 进样体积：1pL 标准储备液1 流速：0.3 mL/min 分别称取0.01g嘧霉胺标准品，用甲醇定容至10mL，得到浓度均为1000mg/L的标准储备液。将标准储备液按照标线要求逐级稀释成所需的浓度。 柱温：30℃ 检测：紫外吸收， 入270 nm 结果与讨论 样品前处理 实验条件的优化 样品 分别称取1g四种不同的茶叶于离心管中，加入5 mL 含1%乙酸的乙腈溶液，浸泡30min 后，以4500 r/min 速率离心5 min， 取 2 mL 上清液于放有 0.5 g QuEChERS 粉末的离心管中，涡旋2 min， 并以12000 r/min 离心2 min， 过滤后进样。 为获得目标化合物的最大吸收波长，本文对嘧霉胺标准溶液进行了光谱扫描，结果见图2。由图2可以看出，嘧霉胺在191 nm 和270nm 处的紫外吸收较大且相当，但是191 nm 为紫外末端，噪音较大，为此选用270nm 作为检测波长。 样品加标 称取其中的一份茶叶1g， 加入 0.5 mL 浓度为 0.5 mg/L 嘧霉胺标准溶液和 4.5mL 含1%乙酸的乙腈溶液，与样品进行同步前处理，得到的理论加标浓度为 0.05 mg/L。 另外，由于嘧霉胺偏碱性，因此本文对 QuEChERS 方法进行改进，采用含1%乙酸的乙腈溶液作为萃取溶剂。 图2.嘧霉胺的分离和紫外吸收光谱图 为考察方法的重现性，本文采用七次连续进样浓度为5 mg/L的嘧霉胺标准溶液，得到的保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)分别小于0.11%和0.37%，说明该方法具有良好的重现性；并在0.02-500 mg/L 内都具有良好的线性，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得到的标准方程为 Y=0.4009X+0.411 (r=0.9993)；通过三倍信噪比可得出嘧霉胺的检出限为 0.005 mg/L . 样品的测定 为考察市场上茶叶中嘧霉胺的残留情况，本文选择了四种不同的茶叶进行测试，结果均无检出，表明嘧霉胺在茶叶中并无明显的残留。为验证方法的可靠性，本文进行了加标实验，加标的理论浓度为 0.05 mg/L， 得到的回收率为75%，说明本方法适用于茶叶中嘧霉胺的测定，见图3. 图3.1-空白，2-嘧霉霉标准品(0.05mg/L)，3-样品，4-样品加标(加标浓度为0.05 mg/L) 的叠加色谱图 结论 本方法结合简便的 QuEChERS 前处理技术和高效液相色谱 法，在简单的实验条件下 5 min 内即能完成茶叶中嘧霉胺 快速、准确、简便的测定。 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 免费服务热线：8008105118400 6505118(支持手机用户) ThermoFisherSCIENTIFIC AN_C_LC- 高效液相色谱法快速测定茶叶中的嘧霉胺黄雄风 刘绿叶 金燕赛默飞世尔科技（中国）有限公司关键词QuEChERS 前处理 UHPLC目标基于嘧霉胺在茶叶中的残留及其欧盟对嘧霉胺在茶叶中残留限量的提高, 本文拟通过优化实验条件, 建立一种高效液相色谱法快速、准确测定茶叶中嘧霉胺的方法。