中药木香中33种农残检测方案

中药木香的33种农残测定分析 背景 自2020版中国药典四部 2341农药残留量测定法中新增第五法，药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法，木香药材由于富含挥发油成分较多，基质效应较为严重，药典规定的4种前处理方法都难以解决。纳谱分析根据挥发油成分特点，调整亲水亲脂聚乙烯吡咯烷酮填料技术参数，特别推出 SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱(200mg/6mL)产品。相比市面上常规 HLB 产品， HLB-A可以吸附更多挥发油类成分，并且在除色效果上也较好，从而降低了基质效应。今天，我们来看看木香项目前处理效果吧。 木香 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法方式二，适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。 实验步骤 对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每 1 mL含1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.1 ug 的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4 基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约 0.6mL，分别加人混合对照品溶液10 pL、20pL、50uL、100pL、150 pL、200pL，加乙腈稀释至1mL，涡旋混匀，即得。 2供试品溶液的制备 2.1提取 称取5g木香样品，加氯化钠1g，加入50 mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50mL 乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL， 加乙腈定容至 10 mL，摇匀，待净化。 3 净化 SPE 柱： SelectCore HLB-A 中药农残专用固相萃取柱(200mg/6mL) / SelectCore HLB 固相萃取柱(200mg/6mL) 净化：量取直接提取法制备的供试品溶液 3mL， 过 SelectCore HLB-A 中药农残专用固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得； (同法用SelectCore HLB 固相萃取柱进行平行试验) GC/MS/MS 测定：取过固相萃取柱后溶液1 mL，加入0.3 mL 内标溶液，混匀，过 PTFE 膜，上机分析。 LC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1mL，加入0.3mL水，混匀，过 PTFE膜，上机分析。 4 高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS8050) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1×100 mm， 2.6 um) 流动相： A：0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L甲酸铵) B：乙乙—0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L 甲酸铵)=95：5 流速：0.3 mL/min 柱温：40℃ 进样量：1uL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源 (Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：多反应监测(Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：氮气3.0L/min 加热气： 干燥空气 10.0 L/min DL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300C 干燥气： N210 L/min 图1：ChromCore C18-MS Pesticides 分析30种农药标准品(以甲胺磷计 0.025ug/mL)的典型谱图 图2：木香空白基质加标的典型谱图 (SelectCore HLB-A净化) 图3：木香空白基质加标的典型谱图 (SelectCore HLB 净化) 从以上木香基质加标 LC/MS/MS 图对比来看， HLB-A处理后的加标样品中部分农残成分的响应值更大，让分析检测结果更为准确。 5 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS 8030) 色谱条件 色谱柱： DB-17MS， 30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃，保持1 min；以10℃/min升温至160℃；再以2℃/min升温至230℃，最后以 15℃/min 升温至300℃， 保持6 min； 载气：：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：不分流进样； 恒压模式：：146 kPa： 进样量：11uL. 质谱条件 电离方式：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：70Ev： 传输线温度：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：：10.0min。 表1木香中33种农药残留的的测定添加回收结果(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 87.9% 地虫硫磷 66.4% 涕灭威砜 96.0% 甲基对硫磷 75.1% 硫线磷 76.4% 涕灭威亚砜 104.0% 对硫磷 63.4% 蝇毒磷 93.8% 灭线磷 85.2% 久效磷 99.8% 治螟磷 81.5% 氯唑磷 80.0% 磷胺 100.2% 特丁硫磷 80.3% 水胺硫磷 70.5% α-六六六 92.4% 特丁硫磷砜 88.9% α-硫丹 94.5% β-六六六 110.2% 特丁硫磷亚砜 102.8% β-硫丹 76.2% y-六六六 90.5% 甲基硫环磷 98.7% 硫丹硫酸酯 89.3% 8-六六六 63.4% 甲磺隆 96.1% 氟虫腈 97.9% 2，4'-滴滴涕 64.1% 氯磺隆 102.3% 氟虫腈砜 101.0% 4，4'-滴滴滴 69.8% 胺苯磺隆 95.5% 氟虫腈亚砜 103.2% 4，4'-滴滴涕 63.5% 甲拌磷 101.1% 氟甲腈 97.9% 4，4'-滴滴伊 66.1% 甲拌磷砜 95.8% o，p'-三氯杀螨醇 90.7% 杀虫脒 84.7% 甲拌磷亚砜 98.9% p，p'-三氯杀螨醇 71.3% 除草醚 83.3% 甲基异柳磷 88.2% 硫环磷 96.6% 艾氏剂 80.5% 内吸磷-O 94.3% 注：磺隆类、三氯杀螨醇农残用 3mL 供品品溶液净化时，回收率 偏低，可以另取 5mL 供试品溶液 狄氏剂 76.7% 内吸磷-S 89.4% 苯线磷 79.8% 克百威 96.8% 苯线磷砜 89.2% 3-羟基克百威 104.9% 净化，回收率可以满足药典要求 (回收率红色字体代表的是5mL 样品过柱)。 苯线磷亚砜 90.8% 涕灭威 90.3% 6处理后溶液的颜色比对 木香提取液过 HLB-A柱 木香提取液过 HLB柱 由上图可以看出，木香提取液经过 SelectCore HLB-A 中药农残专用柱净化后样品颜色澄清透明，而常规 HLB 柱净化后样品颜色较深。 7 木香过 HLB与 HLB-A SPE 柱的部分农残基质响应的区别(左边为HLB， 右边为 HLB-A) 甲拌磷砜 15：293.00>142.90(+) 3：293.883115.08 9000-51 11000- 8000- 10000- 9000- 7000- 6000- 500 4000- 3000 2000- 地虫硫磷 8实验讨论 木香主要含挥发油类、内酯类等成分，尤其是挥发油类成分，对于实验干扰较大。通过以上实验数据比对，可以看出， SelectCore HLB-A 中药农残专用固相萃取柱，针对木香的挥发性成分去除效果良好，极大的消除了由于基质效应带来的检测灵敏度下降、峰形不佳等问题，尤其对有机磷类农残成份的检测准确性提升较明显，其指标均能满足药典要求。并且该方法操作方便，不需要固相萃取柱活化步骤，提取液直接过柱就可以测定。 纳谱分析NanoChrom纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com 色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm，2.6 μm)流动相：A：0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）B：乙腈—0.1%甲酸水溶液（含有5 mmol/L甲酸铵）=95:5流速: 0.3 mL/min柱温: 40 ℃进样量: 1 µL