中药花椒中33种农残检测方案

7 花椒过 HLB 与 HLB-A SPE 柱的部分农残基质响应的区别 蝇毒磷 中药花椒的33种农残测定分析 背景 自2020版中国药典四部 2341农药残留量测定法中新增第五法，药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法，很多中药检测企业反馈含有挥发油成分较多品种基质效应较为严重，药典规定的四种前处理方法都难以解决。纳谱分析根据挥发油成分特点，调整亲水亲脂聚乙烯吡咯烷酮填料技术参数，特别推出SelectCore HLB-A 中药农残专用固相萃取柱(200mg/6mL)产品。相比市面上常规 HLB 产品， HLB-A可以吸附更多挥发油类成分，并且在除色效果上也较好，从而降低了基质效应。 花椒 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法方式二，适用于含挥发油和色素较多的中药材农残检测。 实验步骤 对照品溶液的制备 1.1 混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL， 置20ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成制1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL 含0.1 ug的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4 基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约0.6mL，分别加入混合对照品溶液10 uL、20 uL、50uL、100uL、150pL、200pL，加乙腈稀释至1mL，涡旋混匀，即得。 2 供试品溶液的制备 2.1提取 称取5g花椒样品，加氯化钠1g，加入50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加 50 mL 乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL，加乙腈定容至 10 mL，摇匀，待净化。 3 净化 SPE柱： SelectCore HLB-A 中药农专专用固相萃取柱(200mg/6mL)/SelectCore HLB 固相萃取柱(200mg/6mL) 净化：量取直接提取法制备的供试品溶液3 mL， 过 SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得； (同法用 SelectCore HLB 固相萃取柱进行平行试验) GC/MS/MS 测定：取过固相萃取柱后溶液1mL， 加入0.3 mL内标溶液，混匀，过 PTFE 膜，上机分析。 LC/MS/MS测定：取过固相萃取柱后溶液1 mL， 加入0.3mL水，混匀，过 PTFE 膜，，上机分析。 4 高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS 8050) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1×100 mm， 2.6 um)Agilent InfintyLab Poroshell 120 SB-C18(2.1×100 mm， 2.7 um) 流动相： A：0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L 甲酸铵) B：乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L 甲酸铵)=95：5梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进抹量：1pL 质谱条件 离子源：电喷雾离子源 (Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：多反应监测 (Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：氮气3.0L/min 加热气： 干燥空气 10.0 L/min DL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 干燥气： N2 10 L/min 图1： ChromCore C18-MS Pesticides 分析30种农药标准品(以甲胺磷计0.025 ug/mL)的典型谱图 图2： Agilent InfintyLab Poroshell 120 SB-C18 分析30种农药标准品(以甲胺磷计0.025 ug/mL)的典型谱图 图3：花椒空白基质加标的典型谱图 (SelectCore HLB 净化) 图4：花椒空白基质加标的典型谱图 (SelectCore HLB-A净化) 从以上花椒空白基质加标 LC/MS/MS 图对比来看， HLB-A 可以有效减弱花椒样品的基质干扰，提高农残成分的灵敏度，让分析检测更为准确。 5 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS 8030) 色谱条件 色谱柱： DB-17MS， 30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃，保持1 min； 以10℃/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230℃，最后以15C/min 升温至300℃，保持6min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：不分流进样； 恒压模式：146kPa； 进样量：1uL。 质谱条件 电离方式：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：70 Ev； 传输线温度：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：10.0 min。 图5：花椒空白基质加标的典型谱图 (SelectCore HLB 净化和 SelectCore HLB-A 净化对比) 从以上花椒基质加标 GC/MS/MS 图对比来看， HLB-A 可以有效减弱花椒样品的基质干扰，提高农残成分的灵敏度，让分析检测更为准确。 表1花椒中33种农药残留的的测定添加回收结果(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 90.6% 地虫硫磷 90.3% 涕灭威砜 97.3% 甲基对硫磷 77.3% 硫线磷 91.5% 涕灭威亚砜 98.5% 对硫磷 101.8% 蝇毒磷 90.5% 灭线磷 90.3% 久效磷 96.4% 治螟磷 97.4% 氯唑磷 88.2% 磷胺 92.0% 特丁硫磷 92.8% 水胺硫磷 77.3% α-六六六 88.4% 特丁硫磷砜 102.9% α-硫丹 69.8% β-六六六 90.1% 特丁硫磷亚砜 106.7% β-硫丹 86.4% y-六六六 87.1% 甲基硫环磷 91.3% 硫丹硫酸酯 84.6% 8-六六六 72.6% 甲磺隆 88.0% 氟虫腈 92.6% 2，4'-滴滴涕 61.8% 氯磺隆 81.8% 氟虫腈砜 89.0% 4，4'-滴滴滴 69.6% 胺苯磺隆 85.0% 氟虫腈亚砜 86.0% 4，4'-滴滴涕 61.1% 甲拌磷 95.2% 氟甲腈 104.8% 4，4'-滴滴伊 77.2% 甲拌磷砜 118.9% o，p'-三氯杀螨醇 72.7% 杀虫脒 88.0% 甲拌磷亚砜 103.1% p，p'-三氯杀螨醇 65.4% 除草醚 84.2% 甲基异柳磷 95.9% 硫环磷 94.3% 艾氏剂 72.8% 内吸磷-O 84.5% 注：磺隆类、三氯杀螨醇农残用3mL 供试品溶液净化时，回收率 偏低，可以另取 5mL 供试品溶液 净化，回收率可以满足药典要求。 狄氏剂 66.2% 内吸磷-S 92.1% 苯线磷 100.0% 克百威 98.3% 苯线磷砜 77.4% 3-羟基克百威 104.8% 苯线磷亚砜 96.3% 涕灭威 76.7% 6 处理后溶液的颜色比对 花椒提取液过 HLB-A柱 花椒提取液过 HLB柱 由上图可以看出，花椒提取液经过 SelectCore HLB-A 中药农残专用柱净化后样品颜色澄清透明，而常规HLB柱净化后样品颜色较深。 涕灭威 1.0 2.0 3.0 1.0 2.0 3.0 甲基对硫磷 对硫磷 硫丹硫酸酯 8实验讨论 通过以上实验数据比对，可以看出， SelectCore HLB-A 中药农固专用固相萃取柱，针对花椒的挥发性成分和色素成分去除效果良好，这样，不仅保护了分析柱和离子源，还极大的消除了由于基质效应带来的检测灵敏度下降等问题。该方法不需要固相萃取柱活化步骤，提取液直接过柱就可以测定，其中普遍反映存在较大基质抑制效应的甲基对硫磷、对硫磷、硫丹硫酸酯、蝇毒磷等农残，回收率都得以保证，而针对磺隆类、三氯杀螨醇类农残用 3 mL 花椒供试品溶液净化时，回收率偏低，，可以另取 5 mL 供试品溶液净化，回收率可以满足药典要求。并且， ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1x100 mm， 2.6 um)针对中药农残各组分的峰型对称，灵敏度、柱效与其他知名品牌分析柱一样，保证了检测结果的准确性。 纳谱分析纳谱分析技术(苏洲)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com NanoChrom SelectCore HLB-A中药农残专用固相萃取柱，针对花椒的挥发性成分和色素成分去除效果良好，这样，不仅保护了分析柱和离子源，还极大的消除了由于基质效应带来的检测灵敏度下降等问题。该方法不需要固相萃取柱活化步骤，提取液直接过柱就可以测定，其中普遍反映存在较大基质抑制效应的甲基对硫磷、对硫磷、硫丹硫酸酯、蝇毒磷等农残，回收率都得以保证，而针对磺隆类、三氯杀螨醇类农残用3mL花椒供试品溶液净化时，回收率偏低，可以另取5mL供试品溶液净化，回收率可以满足药典要求。并且，ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm，2.6 μm)针对中药农残各组分的峰型对称，灵敏度、柱效与其他知名品牌分析柱一样，保证了检测结果的准确性。