中药连翘的33种农残测定分析

通过以上实验数据可以看出，连翘使用SelectCore HLB-C固相萃取柱对其色素类成分、挥发油吸附良好，有效地减轻了样品中色素和挥发油成分对GC-MS/MS柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响；使用SelectCore HLB 500 mg/6mL固相萃取柱处理的连翘LC-MS/MS基质加标液中目标物出峰良好，搭配上述解决办法有效地解决了连翘中农残分析中存在的问题，提高了实验效率，为连翘的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。中药连翘的33种农残测定分析 背景 连 翘为 木犀科植 物连翘的干 燥 果 实 ，含有大量挥发油 和 色素类 成 分 ，这些 成 分 极 易 造成 GC-MS/MS 分 析 中 目 标物 干 扰 大 、保 留 时 间漂移等 问题 ，其中甲基对硫磷、、甲基 硫 环 磷 、水 胺硫磷、狄氏 剂干 扰 较 为 明 显；造成 LC -MS/MS 分析中 目 标 物 响 应变 低、干 扰 大 、丢 峰 、无法 准确 定 性等问题 ，其中 地 虫硫磷、水胺 硫磷、甲 拌 磷 砜 干扰较为 明 显。纳谱 分 析 推出的 HLB-C 中药农 残 专用柱 ，特别适 用 于 重色素和重 油脂 的中药 材农 残 测定 。今天，我们来看看连翘项目的前处理效果吧。 连翘 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的固相萃取法 二 ，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的 农残检测。 实验步骤 1.对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL，置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用。 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每 1 mL 含 1.0 mg的溶液，即得。精密量取 适量，加乙腈制成每1mL含 0.1 ug 的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约0.6mL， 分别加入混合 对照品溶液 10 pL、20 pL、50pL、100 pL、150uL、200pL， 加乙腈稀释至1mL，涡旋混匀，即得。 2.供试品溶液的制备 2.1提取(直接提取法) 精密称取5g样品(过3号筛)，加氯化钠1g，加入 50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清 液，残渣再加50mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL左右，加 乙腈定容至 10 mL，摇匀，置冰箱冷藏2小时，取出离心1分钟，取上清液至新的离心管内，放置至室温待 净化。 3.净化 GC/MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore HLB-C 固相萃取柱 500mg/6mL 净化：取SelectCore HLB-C 固相萃取柱，加乙腈5mL活化，再取连翘提取液2 mL 置已活化的 SelectCore HLB-C 固相萃取柱中，收集样品液，待所有样品液进入柱体填料后，取5 mL 乙腈洗脱，合并样品液与洗脱 液，置40℃水浴氮吹至2mL，即得。 GC/MS/MS 测定： 基质加标配制：精密量取上述氮吹后的样品溶液1mL，氮吹至 0.6mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1mL ，再加入 0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22 um 尼龙针式过滤器，，上机分析。 样品溶液配制：精密量取上述氮吹后的样品溶液1 mL 加入 0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22 um 尼龙 针式过滤器，上机分析。 LC/MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore HLB 固相萃取柱500mg/6mL 净化：量取上述连翘提取液4mL，过 Se l ectCore HLB 固相萃取柱 500 mg/6mL， 收集全部净化液，混匀，即 得。 LC/MS/MS 测定： 基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液 1mL氨吹至0.6 mL 加入混合对照品液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL水，混匀，过 0.22 um 尼龙针式过滤器，上机分析。 样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1mL加入0.3 mL水，混匀，过 0.22 um 尼龙针式过滤器，上机分析。 4.气相色谱-串联质谱法(岛津GC-MS-TQ8040 NX) 色谱条件 色谱柱： NanoChrom BP-50+MS 气 相柱， 30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃，保持1 min； 以 10℃/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230°℃，最后 以 15℃/min 升温至300°℃，保持6min； 载 气 ：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：不分流进样： 恒压模式：146kPa； 进样量：1luL。 质谱条件 电离方式：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：：70 Ev： 接口温度：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：10.0 min 。 5.高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS 8045) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1×100 mm， 2.6 um)流动相： A： 0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L 甲酸铵) B： 乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有 5 mmol/L 甲酸铵)=95：5 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：2uL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源： 电喷雾离子源 (ESI) 正离子扫描； 监测方式：：多反应监测(MRM)； 离子源接口电压：4.5kV； 雾化气：：氮气3.0L/min； 加热 气： 干燥空 气 10.0 L/min； DL 温度：250℃； 加热模块温度：400℃； 接口温度：300℃； 干燥气：氮气10L/min。 6.注意事项 GC-MS/MS：久效磷参考 LC-MS/MS分析结果；内吸磷参考 LC-MS/MS 分析结果；甲基对硫磷定量离子为：125.0>47.0， CE： 10(来源于2341第四法)。 LC-MS/MS：水胺硫磷参考 GC-MS/MS 分析结果；甲胺磷定量离子为：142.05>94.0；如遇个别目标物回收 率低于60%可将上柱净化量增加为5mL；由于基质中含有挥发油成分，自动进样器温度不宜设置过低，避 免出现样品分层导致分析结果不准确。 7.实验结果 1、为连翘提取液原液 2、为 SelectCore HLB 500mg/6mL 净化后的连翘提取液 3、为 SelectCore HLB-C 500mg/6mL 净化后的连翘提取液 连翘基质加标 GC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 固相萃取法二处理连翘基质 LOQ浓度点加标谱图 (GC-MS/MS 方法) 狄氏剂 甲基对硫磷 甲基硫环磷 水胺硫磷 连翘基质加标 LC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 固相萃取法二处理连翘基质 LOQ 浓度点加标谱图 (LC-MS/MS 方法) 苯线磷砜 地虫硫磷 甲拌磷砜 特丁硫磷砜 表1连翘中33种农药残留的测定添加回收结果(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 95.1% 苯线磷亚砜 92.4% 涕灭威 81.5% 甲基对硫磷 69.6% 地虫硫磷 65.4% 涕灭威砜 81.2% 对硫磷 102.7% 硫线磷 70.9% 涕灭威亚砜 85.8% 久效磷 80.5% 蝇毒磷 75.6% 灭线磷 71.9% 磷胺 93.2% 治螟磷 78.7% 氯唑磷 84.5% α-六六六 72.0% 特丁硫磷 72.4% 水胺硫磷 71.4% β-六六六 72.7% 特丁硫磷砜 91.0% α-硫丹 70.1% Y-六六六 71.7% 特丁硫磷亚砜 91.5% β-硫丹 78.1% 8-六六六 71.3% 甲基硫环磷 80.2% 硫丹硫酸酯 80.1% 2，4'-滴滴涕 68.7% 甲磺隆 92.7% 氟虫腈 71.2% 4，4'-滴滴滴 77.4% 氯磺隆 79.7% 氟虫腈砜 81.3% 4，4'-滴滴涕 72.3% 胺苯磺隆 77.0% 氟虫腈亚砜 77.9% 4，4'-滴滴伊 67.8% 甲拌磷 77.1% 氟甲腈 74.3% 杀虫脒 67.3% 甲拌磷砜 80.1% o，p'-三氯杀螨醇 94.8% 除草醚 73.9% 甲拌磷亚砜 89.7% p，p'-三氯杀螨醇 85.6% 艾氏剂 64.2% 甲基异柳磷 78.0% 硫环磷 60.5% 狄氏剂 79.5% 内吸磷 65.1% 苯线磷 76.2% 克百威 80.3% 苯线磷砜 101.5% 3-羟基克百威 94.5% 8实验讨论 通过以上实验数据可以看出，连翘使用 SelectCore HLB-C 固相萃取柱对其色素类成分、挥发油吸附良好，有 效地减轻了样品中色素和挥发油成分对 GC-MS/MS 柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响；使用 SelectCore HLB 500 mg/6mL 固相萃取柱处理的连翘 LC-MS/MS 基质加标液中目标物出峰良好，搭配上述解 决办法有效地解决了连翘中农残分析中存在的问题，提高了实验效率，为连翘的农药残留实验数据的稳定 性和可靠性提供了良好的帮助。