中药红花的33种农残测定分析

气相色谱-串联质谱法（岛津 GC-MS -TQ8040 NX）色谱条件色谱柱：NanoChrom BP-50+MS气相柱，30m×0.25mm，0.25μm;进样口温度：250℃；升温程序：初始温度为60℃，保持1min；以10℃/min升温至160℃；再以2℃/min升温至230℃，最后以15℃/min升温至300℃，保持6min；载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；进样方式：不分流进样；恒压模式：146kPa；进样量：1μL。质谱条件电离方式：电子轰击电离源（EI）；电离能量：70Ev；接口温度：250℃；离子源温度：250℃；监测方式：多反应检测模式（MRM）；溶剂延迟：10.0min。 5   高效液相色谱-串联质谱法（岛津 LC-MS 8045）色谱条件色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm，2.6 μm)流动相：A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）B：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）=95:5流速: 0.3 mL/min柱温: 40 ℃进样量: 2 µL中药红花的33种农残测定分析 背景 红花别名红蓝花、刺红花，为菊科植物红花的干燥花，含有较多色素和挥发油类成分，这些成分极易污染 GC-MS/MS 色谱柱与衬管，从而导致分析时农残目标物峰拖尾、回收率变差、丢峰、保留时间漂移等问题。纳谱分析推出的 HLB-C中药农残专用柱，特别适用于重色素和重油脂的中药材农残测定。今天，我们来看看红花项目的前处理效果吧。 红花 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的固相萃取法二，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。 实验步骤 对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL， 置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每 1mL含 1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL 含0.1ug的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约 0.6mL， 分别加入混合对照品溶液 10pL、20pL、50uL、100pL、150pL、200pL，加乙腈稀释至 1mL， 涡旋混匀，即得。 2 供试品溶液的制备 2.1提取(直接提取法) 精密称取 5g样品(3号筛)，加氯化钠1g， 加入50mL乙腈， 匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加 50mL 乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至 3~5mL左右，加乙腈 定容至10mL，摇匀，待净化。 3 净化 GC/MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore HLB-C 中药农残专用柱 500mg/6mL 净化：取 SelectCore HLB-C 固相萃取柱 500mg/6mL，加乙腈5mL活化，再取红花提取液 2mL 置已活化的 SelectCore HLB-C 固相萃取柱中，收集样品液，待所有样品液进入柱体填料后，取5mL乙腈洗脱，合并样品液与洗脱液，氮吹至2mL 即得。 GC/MS/MS 测定： 基质加标配制：精密量取上述氮吹后的样品溶液1mL，氮吹至 0.6mL 加入混合对照溶液，乙腈定容至1mL， 再加入0.3mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22um尼龙针式过滤器，上机分析。 样品溶液配制：精密量取上述氮吹后的样品溶液1mL 加入 0.3mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22um尼龙针式过滤器，上机分析。 LC/MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore HLB 固相萃取柱 200mg/6mL 净化：量取上述红花提取液 3mL， 过 SelectCore HLB 固相萃取柱 200mg/6mL， 收集全部净化液，混匀，即得。 LC/MS/MS 测定： 基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液 1mL 氮吹至 0.6mL加入混合对照品液，乙腈定容至1mL， 再加入0.3mL水，混匀，过 0.22pm 尼龙针式过滤器，上机分析 样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液 1mL 加入0.3mL水，混匀，过 0.22um 尼龙针式过滤器，小上机分析。 4 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS -TQ8040 NX) 色谱条件 色谱柱： NanoChrom BP-50+MS 气相柱， 30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃，保持 1min； 以10℃/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230℃，最后以15℃/min 升温至300℃， 保持6min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：：不分流进样； 恒压模式：146kPa； 进样量：11uL。 质谱条件 电离方式：：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：70Ev： 接口温度：250°℃： 离子源温度：250℃； 监测方式：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：10.0min。 5 高效液相色谱-串联质谱法(岛津 LC-MS 8045) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1x100 mm， 2.6 pm)流动相： A： 0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵) B： 乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵)=95：5 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：2uL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源 (Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：多反应监测(Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：氮气3.0L/min 加热气：干燥空气 10.0L/min DL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 干燥气： N2 10 L/min 6 注意事项 GC-MS/MS：久效磷参考 LC-MS/MS分析结果，内吸磷参考 LC-MS/MS 分析结果，水胺硫磷参考 LC-MS/MS分析结果。 7实验结果 1：为红花提取液原液 2： 为SelectCore HLB 200mg/6mL 净化后的红花提取液3： 为 SelectCore HLB-C 500mg/6mL净化后的红花提取液 红花基质加标 GC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 固相萃取法二处理红花基质 LOQ浓度点加标谱图 (GC-MS/MS 方法) α-硫丹 除草醚 对硫磷 杀虫脒 红花基质加标 LC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 Time 3.906 Scan# 12，709 Inten. 固相萃取法二处理红花基质 LOQ浓度点加标谱图(LC-MS/MS方法) 地虫硫磷 甲拌磷砜 久效磷 水胺硫磷 表1 红花中33种农药残留的测定添加回收结果(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 78.4% 苯线磷亚砜 92.0% 3-羟基克百威 80.9% 甲基对硫磷 91.5% 地虫硫磷 76.1% 涕灭威 91.0% 对硫磷 86.1% 硫线磷 88.0% 涕灭威砜 91.7% 久效磷 87.7% 蝇毒磷 98.4% 涕灭威亚砜 85.9% 磷胺 92.3% 治螟磷 90.0% 灭线磷 90.1% α-六六六 92.7% 特丁硫磷 90.4% 氯唑磷 92.0% β-六六六 91.6% 特丁硫磷砜 91.4% 水胺硫磷 83.4% y-六六六 91.3% 特丁硫磷亚砜 99.6% α-硫丹 90.1% 8-六六六 90.4% 甲基硫环磷 94.7% β-硫丹 93.2% 2，4'-滴滴涕 87.9% 甲磺隆 87.6% 硫丹硫酸酯 96.7% 4，4'-滴滴滴 89.8% 氯磺隆 81.7% 氟虫腈 85.7% 4，4'-滴滴涕 87.8% 胺苯磺隆 76.6% 氟虫腈砜 79.9% 4，4'-滴滴伊 86.3% 甲拌磷 90.3% 氟虫腈亚砜 83.4% 杀虫脒 87.8% 甲拌磷砜 90.3% 氟甲腈 87.7% 除草醚 91.4% 甲拌磷亚砜 91.4% o，p'-三氯杀螨醇 85.1% 艾氏剂 88.6% 甲基异柳磷 91.2% p，p'-三氯杀螨醇 89.3% 狄氏剂 89.0% 内吸磷 83.5% 硫环磷 89.3% 苯线磷 84.3% 苯线磷砜 91.9% 克百威 91.9% 8实验讨论 通过以上实验数据可以看出，红花使用 SelectCore HLB-C 固相萃取柱处理对其色素类成分、挥发油吸附良好，有效地减轻了样品中色素和挥发油成分对 GC-MS/MS柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响；使用SelectCore HLB 固相萃取柱处理的红花 LC-MS/MS 基质加标液中化合物出峰良好，搭配上述解决办法有效地解决了红花中农残分析中存在的问题，提高了实验效率，为红花的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。 纳谱分析纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com NanoChrom