伏格列波糖中定量分析检测方案(液相色谱仪)

Application No.L580NewS岛津SHIMADZUhttp：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2020年10月400-650-0439 使用柱后衍生化法分析伏格列波糖 伏格列波糖是一种治疗糖尿病的药物，该药物可以抑制在肠道中将二糖分解为单糖的a-葡萄糖苷酶的活性，从而延缓糖类物质的消化吸收，改善餐后血糖。 由于伏格列波糖没有紫外吸收，因此，在日本药典第十七修正版中记载了使用HPLC 柱后衍生化法，采用牛磺酸/高碘酸钠试剂进行实验的方法(伏格列波糖纯度试验、伏格列波糖片定量方法)。 本文介绍了使用 NexeraTM 系列 HPLC，按照日本药典第十七修正版收录的“伏格列波糖片定量方法”进行分析的示例。 Y. Zhou I伏格列波糖标准溶液分析 柱后衍生化反应可以在化学反应箱 CRB-40中进行，该模块可通过工作站 LabSolutionsTM 进行控制。图1所示为 LabSolutions 上的显示画面。工作站能够将分析结果关联起来，包括分析方法、分析操作日志以及装置状态在内的项目，都可以由软件进行统一管理，并保证数据的完整性。 图2所示为本次分析的系统流程图。分析条件如表1中所示，1mg/L的伏格列波糖标准溶液进样50uL 后的色谱图，如图3所示。 图1LabSolutions上的显示画面 <分离> 系统 ： Nexera lite 色谱柱 ： Shim-packTM GIST NH2 (150 mm×4.0 mm 内径， 5 pm)*1 样品瓶 ： Shimadzu Vials，LC，玻璃*2 流动相 ：磷酸钠缓冲液 (pH 6.5)/乙腈=300： 600 流速 ： 0.38 mL/min 柱温 ： 25℃ 进样量 ：50pL <检测> 反应试剂 ：牛磺酸/高碘酸钠水溶液 流速 ： 0.38 mL/min 反应温度 ：100℃ 检测器 ：荧光检测器 (RF-20Axs) Ex.350 nm， Em.430 nm 图3伏格列波糖标准溶液(1mg/L)的色谱图 图2伏格列波糖片分析的流程图 系统适用性试验 采用日本药典第十七修正版“伏格列波糖片定量方法”中规定的方法，进行“系统适用性”试验。 图4所示为含 4g/L 乳糖与 40mg/L伏格列波糖的标准品溶液的色谱图，图5所示为用于评估系统重现性的伏格列波糖(40mg/L)标准溶液色谱图。 表2所示为系统适用性试验结果。乳糖与伏格列波糖的分离度为5.5，证实符合日本药典的标准(4以上)。伏格列波糖的峰面积值相对标准偏差(%RSD)为0.11%(n=6)，证实符合日本药典的标准(2%以下)。 图4乳糖(4g/L)、伏格列波糖 (40mg/L)标准混合溶液的色谱图 图5伏格列波糖(40mg/L)标准溶液的色谱图 表2系统适用性试验结果 检测项目 标准 结果 判定 分离度 (乳糖和伏格列波糖之间) 4 5.5 通过 峰面积相对标准偏差(%) (n=6) ≤2 0.11 通过 线性 由浓度10、25、100、250、1000(ug/L)的伏格列波糖标准溶液建立的校准曲线，如图6所示。在该浓度范围内线性良好，r2=0.9999. 图6伏格列波糖标准溶液的校准曲线(10pg/L~1000pg/L) 高灵敏度分析例 图7所示为10ug/L伏格波波糖标准溶液色谱图，进样量50pL。对低浓度点10pg/L的伏格列波糖标准品溶液，重复进样6次，峰面积%RSD 为2.5%，表明仪器具有良好的重复性。 图7伏格列波糖标准溶液的色谱图(10pg/L) 总结 本文使用 Nexera 系列 HPLC， 按照日本药典第十七修正版收录的“伏格列波糖片定量方法”对伏格列波糖进行了分析。通过系统适用性试验证实，系统性能和系统重复性均符合日本药典的标准。 另外，对 10ug/L的伏格列波糖标准溶液进行了6次重复分析，即使是如此低浓度的试样，也能保证良好的重现性。因此，Nexera 系列 HPLC不受试样浓度的限制，均可得到可靠性高的结果。 ( 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 伏格列波糖是一种治疗糖尿病的药物，该药物可以抑制在肠道中将二糖分解为单糖的α-葡萄糖苷酶的活性，从而延缓糖类物质的消化吸收，改善餐后血糖。由于伏格列波糖没有紫外吸收，因此，在日本药典第十七修正版中记载了使用HPLC柱后衍生化法，采用牛磺酸/高碘酸钠试剂进行实验的方法（伏格列波糖纯度试验、伏格列波糖片定量方法）。本文介绍了使用Nexera™系列HPLC，按照日本药典第十七修正版收录的“伏格列波糖片定量方法”进行分析的示例。