逍遥丸中芍药苷检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA19-117Excellence in Science Excellence in ScienceLC-180 岛津 Nexera LC-40测定逍遥丸中芍药苷的含量 LC-180 摘要：本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱仪，建立了逍遥丸中芍药苷含量测定的方法。该方法中，芍药苷在2.0-300.0 ug/mL线性范围内线性良好，相关系数为0.9999。精密度实验中，芍药苷的保留时间相对标准偏差为0.08-0.19%；峰面积的相对标准偏差为 0.20-0.39%。供试品中每1g含白芍以芍药苷计，芍药苷含量为 13.2 mg。 实验结果表明，该方法能快速准确地测定逍遥丸中芍药苷的含量。 关键词： Nexera LC-40 高效液相色谱仪逍遥丸芍药苷 逍遥丸具有疏肝健脾，养血调经的功能，用于肝郁脾虚所致的郁闷不舒、胸胁胀痛、头晕目眩、食欲减退、月经不调。其主成分芍药苷，具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿的作用。 国家药典委员会2019年5月发布了“关于射麻口服液、小儿清热镇静散、逍遥丸(浓缩丸)国家药品标准修订草案的公示”逍遥丸检定方法征求意见稿。按照征求意见稿中逍遥丸含量测定项下要求，使用岛 津 Nexera LC-40 高效谱相色谱仪对主成分芍药苷含量进行测定。系统适用性试验中，按芍药苷峰计不低于2000；供试品中每1g含白芍以芍药苷计，芍药苷不得少于4.0mg.本实验使用 Nexera LC-40 高效液相色谱仪建立了逍遥丸中芍药苷的含量测定方法，该系统具有分析速度快、稳定性高的特点，适用于制药药检相关行业对药品质量控制和分析的检验检测工作。 I实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津Nexera LC-40液相色谱仪，具体配置为： SCL-40(系统控制器)， DGU-405(脱气机)LC-40B XR(输液泵)， SIL-40C XR 自动进样器， CTO-40C(柱温箱)， SPD-M40A(二极管阵列检测器))，LabSolutions Ver. 5.97(色谱工作站)。 图1岛津Nexera LC-40 高效液相色谱仪 1.2分析条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 (2.1mml.D.×100 mm L，2um) 流动相：A相-0.1%磷酸水溶液；B相-乙腈 流充速： 0.4mL/min柱 温：40℃ 检测波长：230nm 进样体积：4pL 洗脱方式：梯度洗脱，B相起始浓度为12%，时间程序如表1所示。 表1梯度洗脱时间程序 时间(min) 单元 处理命令 值 6.50 泵 B Conc 12 7.00 泵 B Conc 80 10.00 泵 B Conc 80 10.10 泵 B Conc 12 16.00 控制器 Stop 样品前处理 对照品溶液制备：参照征求意见稿含量测定项下测定法，取芍药苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1mL中约含60 ug的溶液，即得。 供试品溶液制备：参照征求意见稿含量测定项下测定法，取本品适量，研细，取约0.4g，精密称定，加2稀乙醇25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W， 频率33kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 结果与讨论 3.1系统适用性试验 按照1.2中分析条件对2中对照品溶液进行测定，色谱图如图2所示。芍药苷峰理论塔板数为3443，符合系统适用性要求(征求意见稿含量测定项下系统适用性试验按芍药苷峰计不低于2000) 图2对照品溶液系统适用性色谱图(60 pg/mL) 3.2标准曲线 按1.2中的分析条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积比为纵坐标，采用外标法建立标准曲线，结果如图3所示，芍药苷在2.0-300.0 ug/mL线性浓度范围内，线性相关性良好，相关系数为0.9999，具体结果见表2。 图3对乙酰氨基酚标准曲线 表2标准曲线参数 名称 英文名称 CAS No. 线性范围 线性方程 相关系数 准确度% (pg/mL) 芍药苷 Paeoniflorin 23180-57-6 2.0-300.0 Y=(9485.23)X+(-633.029) 0.9999 95.6-106.8 3.3.精密度实验 按照1.2分析条件测定，选择浓度为5.0、60.0和200.0 ug/mL的芍药苷对照品溶液分别连续进样测定6次重复性色谱图如图4所示。芍药苷的保留时间RSD% 为 0.08-0.19%；峰面积RSD%为0.20-0.39%，结果见表3。精密度实验结果表明， Nexera LC-40 液相色谱仪具有良好的精密度。 图4对照品溶液重复性色谱谱图图 ((60pg/mL) 表3芍药苷对照品溶液精密度的结果(n=6) 5.0 pg/mL 60.0 pg/mL 200.0 pg/mL R.T. Area R.T. Area R.T. Area 1 6.054 44，405 6.068 566，561 6.058 1，904，065 2 6.049 44，605 6.071 563，155 6.049 1，901，788 3 6.057 44，223 6.079 563，161 6.044 1，906，296 4 6.060 44，532 6.049 565，371 6.045 1，906，045 5 6.061 44，563 6.052 565，032 6.060 1，899，060 6 6.062 44，216 6.057 564，231 6.031 1，910，113 平均值 6.057 44，424 6.063 564，585 6.048 1，904，561 RSD(%) 0.08 0.39 0.19 0.24 0.17 0.20 3.4.样品含量测定 取某厂家生产的逍遥丸(规格：每8丸相当于饮片3g)适量，研细，精密称取 40.12 mg 粉末，按照2中步骤得到供试品溶液，上机分析。供试品溶液连续进样测定6次，芍药苷的保留时间 RSD%为0.10%，峰面积为0.20%，仪器精密度良好。供试品溶液色谱图及重复性色谱图如图6-图7所示，供试品溶液重复性结果见表4。使用外标法定量，计算得到供试品中品1g含白芍以芍药苷计，芍药苷含量为13.2 mg， 符合征求意见稿要求(征求意见稿含量测定项下供试品中每1g含白芍以芍药苷计，不得少于4.0mg)。 Nexera LC-40 系列 SPD-M40 具备 UV cut-off滤光片，可抑制低波长紫外光照射到检测池，从而避免样品溶液受到低波长紫外光照射后发生降解。如图5所示，图中分别展示了开启和关闭 cut-off 功能后的供试品溶液主成分芍药苷光谱图。 图5供试品溶液主成分芍药苷光谱图 图6供试品溶液色谱图 图7供试品溶液连续6针重复性色谱图 表4供共品溶液重重性结果(n=6) 芍药苷 R.T. Area 浓度 (ug/mL) 1 6.079 2，010，684 211.81 2 6.087 2，005，715 211.29 3 6.082 2，002，800 210.98 4 6.083 2，002，996 211.00 5 6.074 2，001，689 210.86 6 6.091 1，999，365 210.62 平均值 6.083 2，003，875 211.09 RSD (%) 0.10 0.20 I结论 本实验使用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱仪，参照“关于射麻口服液、小儿清热镇静散、逍遥丸(浓缩丸)国家药品标准修订草案的公示”逍遥丸检定方法征求意见稿中含量测定项，建立了逍遥丸中芍药苷含量测定的方法。结果表明，芍药苷峰理论塔板数为3443；芍药苷在2.0-300.0 ug/mL线性范围内线性良好，相关系数为0.9999。精密度实验中，芍药苷的保留时间相对标准偏差为0.08-0.19%；面面积的相对标准偏差分别为0.20-0.39%，仪器精密度良好；供试品中每1g含白芍以芍药苷计，芍药苷含量为 13.2mg，结果均符合征求意见稿要求。 岛津Nexera LC-40高效液相色谱仪分析速度快、稳定性良好、结果准确度高，适用于制药药检相关行业对药品质量控制和分析的检验检测工作。 ( 上海市徐汇区宜州路180号B2栋 咨询电话：02 1 -34193996 http：//www.shimadzu.com.cn Building B2， No.180 Y i zhou Road， S h ang h ai Ho tl ine ： 0 2 1-341 9 3 996 ) 本文采用岛津Nexera LC-40高效液相色谱仪，建立了逍遥丸中芍药苷含量测定的方法。该方法中，芍药苷在2.0-300.0 µg/mL线性范围内线性良好，相关系数为0.9999。精密度实验中，芍药苷的保留时间相对标准偏差为0.08-0.19%；峰面积的相对标准偏差为0.20-0.39%。供试品中每1 g含白芍以芍药苷计，芍药苷含量为13.2 mg。实验结果表明，该方法能快速准确地测定逍遥丸中芍药苷的含量。