黄芩配方颗粒中特征图谱检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-123Excellence in Science Excellence in ScienceLC-204 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterTel：86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn 岛津 Nexera LC-40 应用于黄配配方颗粒特征图谱的分析 LC-204 摘要：本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱系统，参考国家药典委员会公示的《黄芩配方颗粒》质量标准中的分析条件对黄芩配方颗粒的特征图谱进行了分析。实验结果显示：黄芩苷色谱峰的理论塔板数为85235，符合系统适用性要求；空白溶液在黄芩7个特征峰位置无明显色谱峰，，不干扰分析测定；黄芩对照药材参照物溶液连续6次进样，各峰保留时间和峰面积的RSD 分别在 0.01%~0.06%和0.32%~0.92%之间，仪器精密度良好；供试品色谱图与对照药材参照物色谱图中特征峰的保留时间一致，峰2与黄芩苷对照品参照物峰的保留时间相对应，且各特征峰相对保留时间在规定范围内，符合《黄芩配方颗粒》质量标准相关规定。 关键词： Nexera LC-40高效液相色谱仪黄芩配方颗粒特征图谱 黄芩别名山茶根、土金茶根。为唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi) ，以根入药。有清热燥湿，凉血安胎，解毒功效。主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。黄芩临床表现出明显的抗菌抗病毒作用，而且不产生抗药性。此外，黄芩还是本次战“疫”的关键药味之一，频频出现在中医处方中，通过和其他多味药材组合的中医方剂，多成分、多靶点及多途径协同作用于机体，最终形成其独特的药理作用，对临床轻型和普通型新型冠状病毒肺炎 (Corona Virus Disease 2019，COVID-19)感染者有良好的治疗作用。 中药特征图谱是一种多指标的质量控制模式，，它可以比较全面的反映所含化学成分的种类和数量，从而全面、综合地反映和控制中药的质量。目前中药特征图谱的测定方法较多，以色谱法和光谱法为主。其中，高效液相色谱法以其强大的分离能力和快捷的分析速度而成为目前研究中药化学特征图谱的常用方法，并在多版《中国药典》的指纹图谱及特征图谱分析中得到了广泛的应用。 本实验使用 Nexera LC-40 高效液相色谱系统对黄芩配方颗粒的特征图谱进行分析，该系统稳定性好，重复性高，特征图谱满足《黄芩配方颗粒》质量量准，能够为黄芩配方颗粒质量控制提供帮助。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40 液相色谱仪，包括 CBM-40A Lite 系统控制器， DGU-405 脱气机， LC-40BXR输送泵， SIL-40C XR 自动进样器， CTO-40S柱温箱， SPD-M40检测器， LabSolutions Ver. 5.98 色谱工作站。 1.2分析条件 1色谱柱：Endeavorsil C18色谱柱(150mm× 2.1 mml.D.， 1.8 um) 流动相：A：0.1%磷酸水溶液； B：乙腈 流速：0.3mL/min 柱温：30℃ 检测波长：280nm 进样体积： 1uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相起始浓度为2%，时间程序如表1所示。 表1梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 2.00 Pumps Pump B Conc. 2 5.00 Pumps Pump B Conc. 17 10.00 Pumps Pump B Conc. 25 20.00 Pumps Pump B Conc. 25 25.00 Pumps Pump B Conc. 45 29.00 Pumps Pump B Conc. 50 32.00 Pumps Pump B Conc. 70 33.00 Pumps Pump B Conc. 2 38.00 Controller Stop 样品前处理 对照药材参照物溶液的制备：取黄芩对照药材0.1g，置具塞锥形瓶中，加入70%甲醇25mL密塞，超声处理20分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，‘作为对照药材参照物溶液。 对照品参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成1ml 含60 ug的溶液，，作为对照品参照物溶液。 供试品溶液的制备：取0.1g，同“对照药材参照物溶液”制备方法制成供试品溶液。 结果与讨论 3.1特征图谱 按照1.2中色谱分析条件，对空白溶剂、对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液和供试品溶液分别上机分析，空白溶剂色谱图如图1，目标物出峰处无干扰。黄芩苷对照品参照物溶液谱图见图2，黄芩对照药材参照物溶液特征图谱和供试品溶液色谱图见图3、4所示。 图1 空白溶剂色谱图 mAU 图2 对照品参照物溶液色谱图 图3 对照药材参照物溶液特征图谱 注：峰2(S)：黄芩苷峰5：汉黄芩苷峰6：黄芩素峰7：汉黄芩素 图4 供试品溶液色谱图 注：峰2(S)：黄芩苷峰5：汉黄芩苷峰6：黄芩素峰7：汉黄芩素 3.2系统适用性考察结果 以黄芩苷作为对照品参照物，其理论塔板数为85235，公示稿质量标准系统适用性项下规定黄芩苷的理论塔板数不得低于5000，本实验结果质量标准规定。 3.3供试品和对照药材参照物特征图谱对比结果 按照国家药典委员会公示的《黄芩配方颗粒》质量标准相关规定，供试品色谱中应呈现7个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的7个特征峰保留时间相对应，其中峰2应与黄芩苷对照品参照物峰保留时间相对应。以黄芩苷参照物相应的峰为Ｓ峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%之内。规定值为：0.65(峰1)、1.19(峰3)、1.32(峰4)、1.51(峰5)、1.76(峰6)、1.97(峰7)。实际测定结果见表2，均满足质量标准相关规定。 表2 供试品和对照药材参照物特征图谱对比结果 供试品特征峰 供试品特征峰 相对保留 对照药材参照物 黄芩苷对照品 特征峰名称 保留时间 与S峰相对 时间允许范围 特征峰保留时间 参照物保留时间 (min) 保留时间 (min) (min) (min) 峰1 9.295 0.66 0.59-0.72 9.286 峰2(黄芩苷) 14.087 1.00 1.00 14.050 峰3 16.598 1.18 1.07-1.31 16.550 峰4 18.366 1.30 1.19-1.45 18.301 14.038 峰5(汉黄芩苷) 20.977 1.49 1.36-1.66 20.894 峰6(黄芩素) 24.703 1.75 1.58-1.94 24.674 峰7(汉黄芩素) 27.544 1.96 1.77-2.17 27.523 3.4精密度实验 Nexera LC-40 液相色谱系统采用更加节约空间的二元输液泵一体化设计，最大耐压70MPa，可轻松实现延时短且精度高的高压梯度，流量精确度的误差在0.06%。本实验中将黄芩对照药材参照物溶液连续进样6次，考察仪器精密度。7个特征峰的保留时间和峰面积RSD 值分别在0.01%~0.06%和0.32%~0.92%之间，仪器精密度良好，详见图5和表3。 图5黄芩对照药材参照物溶液精密度测试色谱图(n=6) 表3黄芩对照药材参照物溶液精密度测试结果(n=6) 特征峰名称 保留时间 RSD (%) 峰面积RSD (%) 峰1 0.06 0.32 峰2(黄芩苷，S峰) 0.04 0.64 峰3 0.03 0.72 峰4 0.03 0.72 峰5(汉黄芩苷) 0.04 0.92 峰6(黄芩素) 0.02 0.65 峰7(汉黄芩素) 0.01 0.82 结论 本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相谱系统，对黄芩配方颗粒的特征图谱进行了分析。结果表明，黄芩苷色谱峰的理论塔板数为85235，符合系统适用性要求；空白溶液在黄芩7个特征峰位置无明显色谱峰，不干扰分析测定；黄芩对照药材参照物溶液连续6次进样，各峰保留时间和峰面积的RSD 分别在 0.01%~0.06%和0.32%~0.92%之间，仪器精密度良好；供试品色谱图与对照药材参照物色谱图中特征峰的保留时间一致，峰2与黄芩苷对照品参照物峰的保留时间相对应，且各特征峰相对保留时间在规定范围内，符合《黄芩配方颗粒》质量标准相关规定。综上，本系统满足黄芩配方颗粒的特征图谱分析要求。 岛津应用云 本文采用岛津Nexera LC-40高效液相谱系统，对黄芩配方颗粒的特征图谱进行了分析。结果表明，黄芩苷色谱峰的理论塔板数为85235，符合系统适用性要求；空白溶液在黄芩7个特征峰位置无明显色谱峰，不干扰分析测定；黄芩对照药材参照物溶液连续6次进样，各峰保留时间和峰面积的RSD分别在0.01%~0.06%和0.32%~0.92%之间，仪器精密度良好；供试品色谱图与对照药材参照物色谱图中特征峰的保留时间一致，峰2与黄芩苷对照品参照物峰的保留时间相对应，且各特征峰相对保留时间在规定范围内，符合《黄芩配方颗粒》质量标准相关规定。综上，本系统满足黄芩配方颗粒的特征图谱分析要求。