抗生素中12种头孢成分检测方案(液相色谱仪)

LAAN-A-LC-C022 ApplicationnNo.L475News岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司http：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2014年11月400-650-0439 高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography 使用 Nexera-i 对头孢类抗生素进行快速高分离分析 High-Speed and High-Resolution Analysis by Nexera-i Analysis of Cephem Antibiotics 头孢类抗生素与青霉素、碳青霉烯类抗生素相同，是β-内酰胺类抗生素的一种，被用于口服剂和注射液。通常，头孢类抗生素的副作用小，疗效高且毒性低，在抗感染治疗中占有十分重要的地位。应用报告 No.L348中，介绍了使用超快速 LC系统Prominence UFLC 对头孢类抗生素进行快速高分离的分析示例。 本文将向您介绍使用新一体型超高效液相色谱 Nexera-i，对头孢类抗生素进行快速高分离的分析示例。 头孢类抗生素标准样品的分析Analysis of Standard of Cephem Antibiotics 头孢类抗生素有50种以上的类型。本次分析测定了其中12种成分(头孢拉定、头孢氨苄、头孢匹林、头孢唑啉、头孢羟氨苄、头孢噻吩、头孢孟多*、头孢克洛、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢呋辛、头孢西丁)的标准混合溶液(各50mg/L)。图1中的上图为使用通用色谱柱 Shim-pack VP-ODS 得到的色谱图；下图为使用快速分析用色谱柱 Shim-pack XR-ODS II得到的色谱图。表1为分析条件；图2为头孢类抗生素12种成分的结构式。 根据图1中的上图可知，检测大约6分钟的头孢克洛与头孢氨苄，分离度为1.8，已达到基线分离的分离度1.5。下图中上述成分的分离度约为1.9。 另外，使用 Shim-pack XR-ODS II， 可在保持分离的状态下将分析时间缩短1/5，流动相的消耗量减少1/4。该条件下的系统负载压力约为55 MPa。 因为 Nexera-i具有66MPa 的耐压，所以可轻松实现快速化。 *头孢孟多可确认到2个峰，分别作为头孢孟多A和头孢孟多 B。 表1分析条件 色谱柱 Analytical Conditions ： Shim-pack VP-ODS (250 mmLx4.6mml.D.，4.6 um) Shim-pack XR-ODS II (150 mmL.x3.0 mml.D.， 2.2 um) 流动相 ： A)0.1%甲酸水溶液 B)乙青 时间程序 ： [VP-ODS] B. Conc. 15% (0 min)→ 55%(35min)→ 15%(35.01-50 min) [XR-ODSII B. Conc. 15%(0 min)→ 55%(6.95 min)→ 15%(6.96-10 min) 实时进样343pL 流速 ：0.7 mL/min (VP-ODS) 0.9 mL/min (XR-ODS II) 柱温 ：40℃ 进样体积 ： 5 pL (VP-ODS) 2uL (XR-ODS II) 检测器 ： LC-2040PDA at 260 nm 流通池 ：高灵敏度 UHPLC流通池(选配件) 图1头孢类抗生素12种成分的色谱图上图：Shim-pack VP-ODS 下图： Shim-pack XR-ODS IIChromatograms of a Standard Mixture of 12 Cephem AntibioticsUpper： Shim-pack VP-ODS Lower： Shim-pack XR-ODS II 图2头头类抗生素12种成分的结构式Structures of 12 Cephem Antibiotics 吸收光谱UV-VIS Spectra 重复性 Repeatability 图3为使用LC-2040C 3D得到的头孢类抗生素12种成分谱图。 表2为使用 Nexera-i 对头孢类抗生素12种成分(各50 mg/L)进行测定后，得到的保留时间和峰面积的6次重复性。分析条件与表1的XR-ODSⅡI相同。 由表可知，12种成分的保留时间与峰面积均得到了良好的重复性。 表2头孢类抗生素的重复性 Repeatability of Retention Time and Peak Area of Cephem Antibiotics ID# 化合物 保留时间 峰面积 %RSD (n=6) %RSD (n=6) 头孢羟氨苄 0.14 0.14 2 头孢匹林 0.09 0.17 3 头孢克洛 0.22 0.25 头孢氨苄 0.19 0.29 5 头孢拉定 0.24 0.29 6 头孢噻肟 0.07 0.10 7 头孢唑啉 0.06 0.09 8 头孢呋辛 0.05 0.07 头孢哌酮 0.05 0.11 头孢西丁 0.04 0.14 头孢孟多 A 0.04 0.17 头孢噻吩 0.03 0.09 头孢孟多B 0.03 0.21 图3头孢类抗生素12种成分的谱图Spectra of 12 Cephem Antibiotics ( 免责声明： ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 本文使用耐压66MPa的Nexera-i对12种头孢类抗生素进行测定。对比了Shim-pack VP-ODS色谱柱和Shim-pack XR-ODS II色谱柱，Shim-pack XR-ODS II可以在保证分离度1.9状态下，节省1/4流动相、缩短分析时间1/5，并且保留时间和峰面积重复性良好。