日本酒中低聚糖检测方案(液相色谱仪)

LAAN-A-LC-C021岛津SHIMADZU ApplicationnNo.L474Newshttp：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2014年11月400-650-0439 ApplicationNews 高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography 使用蒸发光散射检测器测定日本酒中的 低聚糖 No.L474 Analysis of Oligosaccharides in Japanese Sake Using the Evaporative Light Scattering Detector 因为蒸发光散射检测器(ELSD)可以检测不具有紫外吸收的有机物质，所以有望得到广泛应用。虽然也可使用示差折光率检测器(RID)对不具有光吸收特性的化合物进行测定，但ELSD将流动相蒸发去除后再检测，由此可去除最初洗脱的溶剂峰，并且 ■低聚异麦芽糖标准样品的分析 Analysis of a Standard Mixture of Isomaltooligosaccharides 通常使用示差折光率检测器进行糖类分析，但无法使用梯度洗脱法进行分析，而使用等度洗脱法。图1为使用蒸发光散射检测器，以等度条件测定低聚异麦芽糖的混合标准样品得到的色谱图。表1为分析条件。 表1等度分析条件 色谱柱 ： Asahipak NH2P-50 4E (250 mm L.×4.6 mm l.D.) 流动相 ：A：10mM 乙酸盐(氨盐)缓冲液 B：乙清 等度洗脱法 B70% 流速 ：1.0mL/min 柱温 ：40℃ 检测器 ： ELSD-LT II 温度 ：40℃ 增益 雾化气 气压 ：350kPa 等度条件分析中，保留时间长的组分峰有变宽的趋势，因此降低了灵敏度。 图2为使用梯度洗脱对同一样品进行分析的示例。表2为分析条件。在 ELSD 中使用梯度洗脱法可高灵敏度分离多种组分。 表2梯度分析条件 Analytical Conditions： Gradient Elution 色谱柱 ： Asahipak NH2P-50 4E(250 mm L.×4.6 mml.D.) 流动相 ： A：10mM 乙酸盐(氨盐)缓冲液 B：乙清 线性梯度洗脱法 B70%→40%，25min 流速 ：1.0mL/min 柱温 ：40℃ 检测器 ： ELSD-LTⅡI 温度 ：40℃ 增益 雾化气 气压 ：350kPa 可以使用梯度洗脱条件，因此比示差折光率检测器更准确。利用一体型高效液相色谱(Nexera-i)可连接内置检测器以外的检测器的功能，本文向您介绍使用蒸发光散射检测器 (ELSD-LTII)，对日本酒中的低聚糖进行分析的示例。 图1等度条件下的低聚异麦芽糖混合标准样品 Standard Solution of Isomaltooligosaccharides： Isocratic Elution 图2梯度条件下的低聚异麦芽糖混合标准样品 使用 ELSD对日本酒中的葡萄糖、异麦芽糖和潘糖三种成分进行定量分析。图3为日本酒的预处理步骤；图4为标准样品的标准曲线；表2为条件分析。因为ELSD 的响应为指数的反应级别，因此在双对数图中呈现线性近似。在浓度范围100、200、400、1000、2000mg/L(葡萄糖为200、400、800、2000、4000 mg/L)回归系数(R²)为0.999以上，表示线性良好。图5为日本酒的色谱图；表2为分析条件。表3为使用标准样品的标准曲线得到的定量结果。 图3日本酒的预处理步骤Pretreatment of Sake 图4标准曲线(分别注入2uL) Calibration Curves (each injection 2 uL) 表3日本酒中的糖类的定量结果与重复性(n=3) Quantitation Results and Repeatability(n=3) of Oligosaccharides in Japanese Sake 峰面积 %RSD 浓度 葡萄糖 432x10* 0.6 13110 mg/L 异麦芽糖 228x10° 2.1 5130mg/L 潘糖 909x10 5.9 1410 mg/L *浓度是将测定样品得到的结果换算成原液的值。 图5日本酒的色谱图 Chromatogram of Sake ( 免责声明： ) ( 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 蒸发光散射检测器ELSD可以检测不具有紫外吸收的有机物质，所以得到广泛应用。虽然示差折光检测器RID也可对不具有光吸收特性化合物进行测定，但ELSD将流动相蒸发去除后再检测，可以去除最初洗脱的溶剂峰，并可使用梯度洗脱，因此比示差折光检测器更准确。利用一体型高效液相色谱Nexera-i可以连接内置检测器以外的检测器的功能，本文介绍使用蒸发光检测器ELSD-LTII，对日本酒中葡萄糖、异麦芽糖和潘糖进行定量分析。线性及重复性良好。