食用植物油中乙基麦芽酚检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-111Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-462 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. - Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel： 86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MS/MS 法测定食用植物油中乙基麦芽酚 LCMSMS-462 摘要：本文使用岛津三重四极杆液相色谱质谱联用仪 (LCMS-8045)开发了食用植物油中乙基麦芽酚的检测方法。实验结果表明， 0.5 ng/mL 乙基麦芽酚标准溶液的 S/N 为 41.91。2.5 ng/mL 标准溶液连续进样6次，峰面积相对标准偏差为2.36%，仪器精密度良好。在0.5-500 ng/mL浓度范围内，方法线性良好，线性相关系数为 0.9992。曲线各标点准确度在92.2-107.4% 之间。5、50和500 ug/kg三个不同浓度加标回收率在86.2-108.6%之间，平行三份样品的相对标准偏差(RSD%)在0.79-2.60%之间。该方法简单、方便、准确，满足国家食品药品监督管理总局 BJS 201708 公告的要求，适用于食用植物油中乙基麦芽酚的检测。 关键词： LC-MS/MS食用植物油乙基麦芽酚 从2020年4月至2020年6月，深圳市市场监督管理局，安徽省市场监督管理局，北京市市场监督管理局先后发布了香谷园、多力(臻宝)食用植物调和油中乙基麦芽酚抽检不合格的公告。乙基麦芽酚逐渐进入公众的视野。 乙基麦芽酚属于食品添加剂，是一种有芬芳香气的白色晶状粉末。它能使食品中原有香味得到调和、改良和提升，因此经常被作为香味改良剂。同时，乙基麦芽酚还具有延长食品储存期的功效。但是该物质过量食用对人肝脏有影响，引发骨骼和关节提前脆变 癌变等疾病，还可能导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至能够损伤肝、肾，对人体有较大的危害。植物油脂没有加香的必要， 《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》(GB2760-2014))中明确规定，植物油脂不得添加食品用香料、香精，即乙基麦芽酚为不得检出。 目前乙基麦芽酚的检测方法主要有高效液相色谱法， 气相色谱法等，这些方法耗时长，灵敏度低，抗假阳性能力差。本文采用岛津三重四极杆液质联用仪LCMS-8045， 建立了食用植物油中乙基麦芽酚的分析方法，供相关检测人员参考。 1.1仪器 岛津超高效液相色谱仪LC-30A与三重四极杆质谱仪LCMS-8045联用系统。具体配置为 LC-30AD×2输液泵，DGU-20A5 在线脱气机， SIL-30AC自动进样器， CTO-30A 柱温箱， CBM-20A系统控制器， LCMS-8045三重四极杆质谱仪，数据采集使用 LabSolutions Ver. 5.97， 数据处理使用 LabSolutions Insight 3.6。 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack GIST C18 (100 mm × 2.1 mm l.D.， 2 um， SGLC， P/N：227-30001-04) 流动相：A相-0.1%甲酸水；B相-0.1%甲酸甲醇 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样器温度：15℃ 进样量：2uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为50%，洗脱程序见表1。 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 1.00 Pumps Pump B Conc. 50 3.00 Pumps Pump B Conc. 95 4.00 Pumps Pump B Conc. 95 4.10 Pumps Pump B Conc. 50 7.00 Controller Stop LCMS-8045质谱条件： 离子源：ESI，正离子模式雾化气：氮气3.0 L/min干燥气：氮气10.0 L/min加热气：空气10.0 L/min 加热模块温度：400C 接口温度：300℃ 扫描模式：多反应监测(MRM) MRM参数：见表2 DL管温度：250℃ 表2 MRM 参数 No. 名称 CAS 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3 Pre Bias(V) 1 乙基麦芽酚 4940-11-8 141.1 125.9* -16 -24 -22 70.9 -16 -34 -26 *表示定量离子 1.3准准品溶液制备 乙基麦芽酚标准储备液：精密称取乙基麦芽酚标准品100 mg，用甲醇定容至100 mL容量瓶中，制得1 mg/mL乙基麦芽酚标准储备液。 乙基麦芽酚标准系列工作溶液：从上述储备液中移取适量，用甲醇逐级稀释制成0.05 ug/mL、0.25ug/mL、1.25 ug/mL、2.5 ug/mL、5 ug/mL、25 ug/mL、50 ug/mL 的标准溶液。准确称取与试样基质相应的阴性食用植物油试样10g，分别加入上述标准溶液200 uL，与试样同时进行前处理，制成最终浓度为 0.5 ng/mL、2.5 ng/mL、12.5 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL标准系列工作溶液。 1.4样品前处理 准确称取10g试样至50mL离心管中，加入甲醇10mL，涡旋混匀2分钟，以10000转/分的速率离心10分钟，将上清液移入20mL具塞刻度试管中，下层油液再用10mL甲醇重复提取一次，合并上清液，用甲醇定容至20mL，过0.22 m 滤膜过滤，取滤液上机。 结果与讨论 2.1标准品溶液色谱图 图1乙基麦芽酚标准品溶液(0.5ng/mL) MRM 色谱图 2.2线性范围和灵敏度考察 将1.3中制备的0.5、2.5、12.5、25、50、250、500 ng/mL标准系列工作溶液，取2uL进样，，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，使用外标法拟合工作曲线。标准曲线见图2，相关系数R2= 0.9992。各浓度点线性回归的准确度、信噪比、定量限如表3所示。曲线各标点准确度在92.2-107.4%。0.5 ng/mL标准溶液的S/N 为41.91。 图22乙基麦芽酚工作曲线 表3 乙基麦芽酚校准曲线准确度和定量限 Data 数据文件名 保留时间 面积 浓度 (ng/mL) 标准浓度 精确度% S/H 定量限 1 0.5.lcd 1.893 10，375 0.506 0.5 101.2 41.91 0.12 2 2.5.lcd 1.881 30，858 2.304 2.5 92.2 127.82 0.18 3 12.5.lcd 1.905 155，900 13.280 12.5 106.2 312.30 0.43 4 25.lcd 1.855 310，525 26.853 25 107.4 445.75 0.60 5 50.lcd 1.900 593，665 51.708 50 103.4 483.47 1.07 6 250.lcd 1.871 2，668，538 233.843 250 93.5 552.45 4.23 7 500.lcd 1.899 5，477，672 480.433 500 96.1 601.34 7.99 2.3重复性考察 2.5 ng/mL 浓度对照品溶液，连续进样6次，考察保留时间和峰面积的重复性，结果如下表3所示。保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD%)分别为0.66%和2.36%，方法精密度良好。 表42.5ng/mL 乙基麦芽酚标准溶液连续6针重复性结果 编号 峰面积 保留时间 1 28457 1.892 2 27223 1.861 3 26832 1.894 4 28475 1.873 5 27785 1.881 6 27772 1.881 平均值 27757 1.880 RSD% 2.36 0.66 2.4加标回收率及重复性考察 按照1.4前处理方法，往食用植物油空白样品中加入低、中、高三个浓度乙基麦芽酚标准溶液，进行三个浓度水平加标回收率考察。每个浓度平行制备三份样品，进行重复性考察。低、中、高三个加标浓度分别为5、50和500 ug/kg。未加标样品谱图和加标样品谱图见图3。三水平加标回收率及重复性结果见表5。 图3 实际样品谱图和加标回收样品谱图 表5 三浓度水平加标回收率及重复性计算结果((n=3) No. 5ug/kg 加标回收率(%) 50 ug/kg 加标回收率(%) 500 ug/kg 加标回收率(%) 91.4 107.8 89.0 2 94.6 106.9 87.8 3 96.2 108.6 86.2 平均值 94.1 107.8 87.7 CV% 2.60 0.79 1.58 结论 本文利用岛津LCMS-8045三重四级杆液质联用仪定量测定了食用植物油中的乙基麦芽酚。实验结果表明，0.5 ng/mL乙基麦芽酚标准溶液的 S/N 为 41.91。2.5 ng/mL 标准溶液连续进样6次，峰面积相对标准偏差为2.36%，仪器精密度良好。在0.5-500 ng/mL 浓度范围内，方法线性良好，线性相关系数为0.9992。曲线各标点准确度在92.2-107.4%之间。5、50和500 ug/kg 三个不同浓度加标回收率在86.2-108.6%之间，平行三份样品的相对标准偏差(RSD%) 在 0.79-2.60%之间。该方法灵敏，准确，定定性好，回收率高，抗假阳性能力强，适用于食用植物油中的乙基麦芽酚的检测。 岛津应用云 本文利用岛津LCMS-8045三重四级杆液质联用仪定量测定了食用植物油中的乙基麦芽酚。实验结果表明，0.5 ng/mL乙基麦芽酚标准溶液的S/N为41.91。2.5 ng/mL标准溶液连续进样6次，峰面积相对标准偏差为2.36%，仪器精密度良好。在0.5-500 ng/mL浓度范围内，方法线性良好，线性相关系数为0.9992。曲线各标点准确度在92.2-107.4%之间。5、50和500 μg/kg三个不同浓度加标回收率在86.2-108.6%之间，平行三份样品的相对标准偏差(RSD%)在0.79-2.60%之间。该方法灵敏，准确，稳定性好，回收率高，抗假阳性能力强，适用于食用植物油中的乙基麦芽酚的检测。