人体血浆中槲皮素检测方案(液质联用仪)

作者 摘要 Jihyun Lee 及 Alyson E. Mitchell 食品科学与技术系， 加州大学戴维斯分校 One Shields Avenue Davis， CA 95616 Susan Ebeler 葡萄栽培和酿酒系，加州大学戴维斯分校 One Shields Avenue Davis， CA 95616 Jerry Zweigenbaum 安捷伦科技公司 2850 Centerville Road 应用 UHPLC-ESI精确质量数 Q-TOFMS/MS方法表征斛皮素在人体内的代谢和生物利用度 应用简报 食品质量和药理学 生物类黄酮皮素在食品中以一系列糖苷形式存在，而这些糖苷的组成具有物种及栽培品种特异性。在人体内，檞皮素经过广泛的Ⅱ相生物转化，最终形成一系列代谢物的复杂混合物，其中每种代谢物的生物活性取决于生物转化过程中所形成偶联物的类型和位置。本文应用 Agilent 1290 UHPLC 联合 Agilent 6530 精确质量 Q-TOF LC/MS， 对食用添加微粒化苹果皮(AP)或洋葱粉 (OP)的苹果酱后人血浆中的各檞皮素代谢物进行鉴定并测定相对含量， AP及OP标准准后相当于 100 mg 总皮皮素糖苷。然后利用包含Ⅱ相生物转化反应中中皮素相关产物的定制安捷伦个人化合物数据库和居库 (PCDL)以及Agilent MassHunter 定性分析软件对代谢物进行鉴定。最后通过 Q-TOF MS/MS碎片数据和 Agilent MassHunter 分子结构关联 (MSC)软件确认所鉴定代谢物的结构。 Wilmington， DE 19808 Agilent Technologies 本研究中桷皮素代谢的补充报告发表在《农业与食品化学杂志》(Journal of Agriculture and Food Chemistry) 上[1]。之所以选择槲皮素进行研究，是因为流行病学研究表明高黄酮类的饮食结构可能会降低发生心血管疾病、癌症及其它年龄相关疾病的风险[2，3，4]。如图1所示，素皮素在食品中以糖苷形式存在，其糖苷形式决定了它的生物利用度(吸收)。食品中这类糖苷的组成具有物种及栽培品种特异性。洋葱中的主要糖苷为苷皮素4'-0-葡萄糖苷，苹果中的主要糖苷形式为檞皮素3-0-半乳糖苷。 桷皮素糖苷在肠中吸收。糖苷由小肠刷状缘膜中的β-葡萄糖苷酶及乳糖酶根皮苷水解酶进行裂解，得到的糖苷配基被人体吸收。糖苷配基经由肠上皮细胞内的Ⅱ相生物转化酶进行广泛代谢，这会产生一系列的硫酸化、葡糖醛酸化及甲基化代谢物。这些代谢物通过肝门静脉转运至肝脏，发生进一步的Ⅱ相代谢，然后进入体循环。 体外研究表明檞皮素代谢物的活性取决于它们结构中偶联基团的类型和位置。例如， Jansich 等人报道：相比于桷皮素糖苷配基，桷皮素-7-葡糖苷酸更能增加体外LDL氧化的滞后时间，而相同浓 度的皮素-3'-硫酸酯或异鼠李素-3-葡糖苷酸则不会影响该滞后时间[5]。鉴定血浆中每种代谢物的动力学谱对了解它们的作用机理和生物活性非常关键[61。 全扫描四极杆电喷雾电离液质联用(ESI LC/MS)方法已成功用于鉴定血浆中的代谢物，但这些方法的灵敏度较低，无法用于监测血浆中每种代谢物在六小时后的含量变化 [7，8，9]。 ESI LC/MS/MS对檞皮素代谢物的定量主要依靠葡糖苷酸或硫酸结合物的酶裂解，以及桷皮素糖苷配基及异鼠李素(甲基檞皮素糖苷配基)的共存物测定。虽然该方法可用于建立药代动力学曲线，但是损失了循环代谢物的相关信息。精确质量数串联质谱可有效促进复杂混合物中的代谢物结构解析，特别是对于黄酮类代谢物的复杂混合物(例如，檞皮素)非常有用，目前这类混合物尚缺乏商业标样。精确质量数四极杆飞行时间 (Q-TOF) 质谱方法具有较高的灵敏度和选择性，能有效分辨同重离子，提供更准确的分子式信息，从而促进非靶向未知化合物的鉴定。对 Q-TOFLC/MS模式下生成的子离子进行精确质量数分析可简化结构解析，进一步促进化合物的鉴定。 OH Q3-0-半乳糖苷：苹果中的主要形式 本应用简报将介绍用于解释皮素生物利用度差异的工具：UHPLC-ESI 精确质量数 Q-TOF LC/MS分析，结合安捷伦个人化合物数据库和谱库 (PCDL)管理软件和 Agilent MassHunter 定性分析软件。作者特别对食用两种不同食物(苹果皮和洋葱粉)后血浆中存在的檞皮素代谢物进行了研究，这两种食物中的总皮素量相同，但檞皮素糖苷组成不同。研究的目的是要了解糖苷形式是否会影响药代动力学参数(例如，吸收和代谢)。由于缺乏标样，本研究通过比较代谢物和参比标样的响应进行半定量分析。 实验部分 具体的实验设计及流程说明可参考《农业与食品化学杂志》中发表的补充报告[1]。 研究设计 本研究通过一个随机交叉试食试验方案对强化苹果酱中檞皮素糖苷的吸收和代谢进行研究，该方案由加州大学戴维斯分校的伦理审查委员会批准。试验招募了16名名愿者：8名女性，8名男性。受试者完成了所有的研究试验，以自身作为对照，采用随机顺序进入研究。受试者在开始试验前两天和试验期间，食用低黄酮类(无斛皮素)食物。空腹过夜后，食用含有苹果皮粉(AP)或洋葱粉(OP)的强化苹果酱作为早餐。两种试验方案均食用100mg 的总桷皮素。 强化苹果酱中皮素糖苷的成分如表1所示，事先由三重四极杆液质(LC/MS/MS)联用仪进行鉴定，再由高压液相色谱法 (HPLC)进行定量[6]。在含有AP 的强化苹果酱中，主要的檞皮素形式包括3-半乳糖苷，3-葡萄糖苷，及3-鼠李糖苷。在含有OP的强化苹果酱中，檞皮素3，4'二葡糖苷及檞皮素4'-葡萄糖苷为主要成分。 食用强化苹果酱后的0、0.5、1、2、4、6、8及24小时采集受试者血样。样品经离心处理，使血浆与血细胞分离。 样品前处理：提取槲皮素代谢物 本实验采用的提取方法由 Mullen 等人[8，10]发表的方法修改而得。采用用皮素4'-0-葡萄糖苷作为参比标样(RS)，加入基础血浆中(终浓度为10和1000 ng/mL 血浆)，进行回收率测定。之前的研究发现，食用檞皮素糖苷或富含檞皮素糖苷的食物后，血浆中未发现皮素4'-0-葡萄糖苷[11，12]。 表1. 强化苹果酱中中皮素糖苷成分及含量(mg) 100g苹果酱中添加： 梅皮素糖苷 苹果皮粉 洋葱粉 檞皮素 3，4'-0-二葡糖苷 0mg 44.9mg 皮素3-0-芸香糖苷(芸香苷) 6.5 0 桷皮素3-0-半乳糖苷 16.8 0 桷皮素3-0-葡萄糖苷 16.1 4.9 桷皮素-0-木糖苷 9.3 0 桷皮素-0-阿拉伯呋喃糖 3.0 0 桷皮素-0-阿拉伯呱喃糖 17.6 榭皮素3-0-鼠李糖苷 30.6 0 皮素4'-0-葡萄糖苷 0 48.7 总计 99.9±2.3 mg 所提取的又皮素代谢物由 Agilent 1290 Inifinity 二元液相系统联用配有安捷伦喷射流技术(用于电喷雾离子化)的 Agilent 6530精确质量 Q-TOF LC/MS 系统进行分析。UHPLC 配有带内置真空脱气机 (G4220A)的二元泵，带有温控模块 (G1330B)的自动进样器 (G4226A)，以及柱温箱(G1316C)。 UHPLC 参数见表2。 为鉴定所有可能的皮素代谢物，试验对血浆提取样品进行了Q-TOF MS1分析。在 m/z 100-1000的质量数范围内，以负离子和正离子模式采集总离子谱图。Q-TOF MS 参数见表3. 为获得所需的质量数准确度，分析中一直采用内标校正。 在 Q-TOF MS1模下下，采用皮素4'-0-葡萄糖苷作为 RS 对每种檞皮素代谢物进行相对定量。通过标准加入法，在混合血浆中添加已知含量的标样储备液，获取校正曲线。RS 的检测限为 1 ng/mL血浆，线性动态范围跨越三个数量级。采用 Q-TOF (MS/MS负ESI模式)检测可能斛皮素代谢物的相应洗脱峰。 表2.UHPLC 参数 Agilent 1290 Infinity 二元液相色谱 A) 0.1%甲酸水溶液 B)0.1%甲酸乙腈溶液 初始5%B 线性 时间(min) %B 0-5 5-10 5-8 10-12 8-10 12-15 10-15 15 15-18 15-55 18-20 55-90 0.4 mL/min Agilent Poroshell EC18 UHPLC 色谱柱 2.1×100 mm， 2.7 pm (部件号695775-902)，配有安捷伦 2.1 mm×5mm， 保护户(部件号821725-911) 以初始流动相运行4分钟 30°C 5pL 表3. Q-TOF LC/MS 参数 仪器 Agilent 6530 精确质量 Q-TOF LC/MS 电离模式 采用安捷伦喷射流技术的正离子和负离子电喷雾 采集速率 1.0谱图/秒 质量数范围 100-1，000m/z 干燥气温度 225°C 干燥气流速 8.0L/min 鞘气温度 300°C 鞘气流速 10.0 L/min 雾化器压力 45 psi 锥孔电压 65V 八极杆射频电压 750 V 碎裂电压 125V 毛细管电压 2.5kV (负离子模式)或 3.5kV(正离子模式) 数据分析 皮素代谢物按以下步骤进行鉴定： 1.利用之前报道的代谢物，以及基于已知Ⅱ相生物转化通路计算所得的质量数，建立一个代谢物数据库。在 PCDL管理软件中编入这些潜在檞皮素代谢物的精确质量数(图2)，然后将该数据库导入 MassHunter定性分析软件 2. 利用MassHunter定性分析软件在步骤1中描述的 PCDL数据库中搜索 Q-TOF MS1分析获取的数据，然后根据精确质量数、同位素丰度和同位素分布对搜索获得的潜在檞皮素相关代谢物列表进行鉴定。这一步会获得可能化合物的列表 3.将Q-TOFMS/MS碎片数据与 MassHunter MSC软件中的分子式进行匹配，进一步确认步骤2中所鉴定檞皮素代谢物的结构 药代动力学 要测定的药代动力学变量包括血浆刮皮素浓度峰值(Cmax)， 达峰时间 (tmax)，以及0到24小时(AUCO-24小时)内的血浆浓度-时间曲线下面积。采用配对t-检验测定不同食物受试者的血浆药代动力学参数变化，结果为P<0.05，确定存在显著差异。另外通过独立样本t-检验评价血浆药代动力学中的性别差异，结果P<0.05，认为存在性别差异。 图2.MassHunter PCDL 管理软件用于建立和管理黄酮类代谢物的精确质量数谱库。输入化合物的结构和名称时，软件会自动计算其质量数和分子式 结果与讨论 皮素代谢物鉴定与确认 图3中展示了食用强化苹果酱2小时后，志愿者血浆样品中所鉴定桷皮素代谢物的代表性提取离子色谱图。实验利用 MassHunter定性分析软件针对导入自自知代谢物PCDL 数据库的值进行数据搜索，对代谢物进行鉴定。代谢物的鉴定建立在精确质量数和同位素保真性的基础上而完成。 表4列出了可能檞皮素代谢物的峰号、保留时间、分子离子类型、实测及预测的质量数，以及质量数误差。实测及预测 m/z间的误差均小于2.5 ppm。 图3. 血浆中檞皮素代谢物的提取离子色谱图，食用强化苹果酱2小时之后测得。采用 MassHunter 软件和定制的 PCDL 数据库进行鉴定 为进行结构确认，试验还对这15个鉴定的可能槲皮素代谢物进行了Q-TOF MS/MS分析。皮素的计算单一同位素质量数为302.0427 Da。 由于榭皮素糖苷配基(无偶联物的檞皮素)的存 在，所有檞皮素相关的代谢物均会产生一个负离子碎片离子，m/z为 301.0354。唯一例外的是甲基化皮素相关代谢物，它们产生的碎片离子为m/z315.0510， 即无偶联物的甲基化皮素离子。 表4. 按峰号排列的可能檞皮素代谢物，同时列有保留时间、分子离子类型、实测及预测的质量数和质量数误差 色谱峰 RT (min) 可能化合物 分子离子类型 预测 m/z 实测 m/z 8.86 甲基Q二葡糖苷酸 [M-H] 667.1152 667.1146 0.9 10.07 Q二葡糖苷酸 [M-H] 653.0996 653.0987 1.4 3 10.70 甲基Q二葡糖苷酸 [M-H] 667.1152 667.1136 2.4 11.10 Q二葡糖苷酸 [M-H] 653.0996 653.0986 1.5 5 11.22 甲基Q二葡糖苷酸 [M-H] 667.1152 667.1147 0.6 12.18 Q二葡糖苷酸 [M-H] 653.0996 653.0989 1.1 7 12.32 Q二葡糖苷酸 [M-H] 653.0996 653.0989 1.1 8 13.38 Q二葡糖苷硫酸酯 [M-H] 557.0243 557.0240 0.5 9 13.10 Q-3-葡糖苷酸 [M-H] 477.0675 477.0671 0.8 10 16.80 Q-3'-葡糖苷酸 [M-H] 477.0675 477.0673 0.4 11 16.85 甲基Q3葡糖苷酸 [M-H] 491.0831 491.0832 -0.2 12 16.90 Q谷胱甘肽 [M+HC0O] 651.1012 651.0998 2.2 13 17.07 Q葡糖苷酸 [M-H] 477.0675 477.0672 0.6 14 17.10 甲基Q葡糖苷酸 [M-H] 491.0831 491.0831 0.0 15 17.45 Q-3-硫酸酯 [M-H] 380.9922 380.9925 -0.8 图4展示示檞皮素葡糖苷酸与檞皮素硫酸酯的 Q-TOF MS/MS 谱图， m/z 301.0354 是从分子离子 477.0673 中丢失一个葡糖苷酸后所得的特征碎片离子，或是从分子离子 380.9925 中丢失一个硫酸基团。m/z 113.0244代表葡糖苷酸基团。 将所得的MS/MS碎片与可能的结构进行匹配，其碎片可对之前的鉴定进行进一步确证。MassHunter MSC 软件通过匹配分 ×103 301.0354 1.4 1.2- ： 0.8- 0.6- 477.0719 0.4- 113.0224 0.2- _....... .aL.smdk 100 200 300 400 500 600 质荷比(m/z) 子式，可确认所鉴定代谢物的结构。MassHunter MSC 软件利用系统性键断裂方法将所得的 MS/MS 碎片离子与可能的结构进行关联。图5给出了一个实例，其中利用 MS/MS 确认了檞皮素葡糖苷酸的碎片离子 m/z 301.0354。图6展示了 MassHunter MSC软件提供的檞皮素葡糖苷酸预测碎片。 檞皮素硫酸酯 图5. 利用 MassHunter MSC 软件对檞皮素葡糖苷酸的碎片离子 m/z 301.0354 进行 MS/MS确认。软件会同时显示母离子和碎片离子的分子式，当用户选中一个分子式时，软件会相应显示其结构 图6. MassHunter MSC 软件提供的檞皮素葡糖苷酸预测碎片 药代动力学 由于 Q-TOF LC/MS 具有灵敏的检测性能，我们得以在较长的时间段(24小时)内对每种代谢物进行监测，轻松计算出各自的药代动力学参数。在本应用研究中，我们发现见皮素的血浆代谢物谱在食用两种不同食品时基本相同；但是，它们的生物利用度不同(图7)。相比于食用含有 AP的强化苹果酱，食用含有OP的强化苹果酱后，各檞皮素代谢物的血浆浓度显著升高。由于没有使用真正的标样，图7中显示的定量结果仅为相对定量(而非绝对定量)值。 结论 精确质量数 Q-TOF LC/MS 可对人血浆中的檞皮素代谢物进行高灵敏度、高选择性的检测、鉴定、相对定量和动态监测。在8名女性和8名男性受试者食用富含微粒化苹果皮或洋葱粉的苹果酱(其中含总檞皮素100 mg)后的24小时内，可在他/她们的血浆内鉴定到类似的檞皮素代谢物。 檞皮素二葡糖苷酸 甲基皮素二葡糖苷酸 图7.正离子电喷雾离子化模式下测得的血浆中的檞皮素代谢物 将定制的黄酮类代谢物 PCDL导入MassHunter性性沐析软件后，可快速进行代谢物筛选和鉴定。 Q-TOFMS/MS碎片数据和MassHunter MSC 软件可用于确认所鉴定代谢物的结构。ESI的极性会影响皮素代谢物的离子化效率。例如，檞皮素谷胱甘肽可在负ESI模式下鉴定，但在正ESI模式下无法鉴定。 鉴定出的庄要代谢物包括：梅皮素硫酸酯，檞皮素葡糖苷酸，以及檞皮素二葡糖苷酸，且在两种试验方案中结果相同。但是，两种试验方案的药代动力学参数 AUCO-24 h 和 Cmax存在差异。食用洋葱粉后，梅皮素代谢物的血浆浓度显著增高。此外，檞皮素硫酸酯和和皮素硫酸葡糖苷酸代谢物的 AUCO-24h还存在性别差异。 衷心感谢 Patrick Dunn 博士及先进加工和包装研究中心 (Centerfor Advanced Processing and Packaging Studies， CAPPS)发起该项目并提供经费资助；感谢食品，营养和健康学讲座教授John E. Kinsella， 西方人类营养研究中心 (Western HumanNutrition Research Center， WHNRC) 的Ellen Bonnel 及 LeslieWoodhouse 博士，以及 Danielle Robertson 帮助开展临床试验；感谢 Henry A. Jastro & Peter J. Shields 研究奖金(加州大学戴维斯分校)， Kwanjeong教育基金奖学金(韩国)；感谢 OregonFreeze Dry 公司、Gills Onions 公司， 以及 Cadbury Schweppes公司。 ( 参考文献 ) ( 1， J.Lee， S.E. Ebeler， J.A. Zweigenbaum， A. E. Mitchell，“UHPLC-(ESI)QTOF M S /MS Profiling of Q u ercetinMetabolites in Human Plasma Postconsumption ofApplesauce Enriched with Apple P e el and Onion，" J. Agric. Food Chem. 60，8510-8520，2012 ) ( 2. L . Hooper， P.A. Kroon， E.B. Rimm， J.S. Cohn，I. Harvey， K.A. Le Cornu， J .J. Ryder， W.L. Hall， A. Cassidy， "Flavonoids， flavonoid-rich foods， and cardiovascular risk： a meta-analysis o f randomized c o ntrolled trials，" The American Journal of Clinical Nutrition. 88，3 8 -50， 2 0 08 ) ( 3 . H . Yao， W. Xu， X. Shi， Z. Z hang， “ D ietary flavonoids ascancer prevention agents"， Journal of environmental sci- ence and health. 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O’Leary， P.C. Hollman， “Quercetinglucuronides but not glucosides are present in humanplasma after consumption of quercetin-3-glucoside orquercetin-4'-glucoside，"J. Nutr. 131，1938-1941， 2001 更多信息 这些数据代表典型结果。有关我们的产品和服务的详细信息，请访问我们的网站： www.agilent.com/chem/cn. www.agilent.com/chem/cn 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本资料中的信息、说明和性能指标如有变更，恕不另行通知。 C安捷伦科技(中国)有限公司，2013 2013年9月5日，中国印刷 5991-3076CHCN 摘要生物类黄酮槲皮素在食品中以一系列糖苷形式存在，而这些糖苷的组成具有物种及栽培品种特异性。在人体内，槲皮素经过广泛的II 相生物转化，最终形成一系列代谢物的复杂混合物，其中每种代谢物的生物活性取决于生物转化过程中所形成偶联物的类型和位置。本文应用Agilent 1290 UHPLC 联合Agilent 6530 精确质量Q-TOF LC/MS，对食用添加微粒化苹果皮(AP) 或洋葱粉(OP) 的苹果酱后人血浆中的各槲皮素代谢物进行鉴定并测定相对含量，AP 及OP 标准化后相当于100 mg 总槲皮素糖苷。然后利用包含II 相生物转化反应中槲皮素相关产物的定制安捷伦个人化合物数据库和谱库(PCDL) 以及 Agilent MassHunter 定性分析软件对代谢物进行鉴定。最后通过Q-TOF MS/MS 碎片数据和Agilent MassHunter 分子结构关联(MSC) 软件确认所鉴定代谢物的结构。前言本研究中槲皮素代谢的补充报告发表在《农业与食品化学杂志》(Journal of Agriculture and Food Chemistry) 上。之所以选择槲皮素进行研究，是因为流行病学研究表明高黄酮类的饮食结构可能会降低发生心血管疾病、癌症及其它年龄相关疾病的风险。如图1 所示，槲皮素在食品中以糖苷形式存在，其糖苷形式决定了它的生物利用度（吸收）。食品中这类糖苷的组成具有物种及栽培品种特异性。洋葱中的主要糖苷为槲皮素4'-O-葡萄糖苷，苹果中的主要糖苷形式为槲皮素3-O-半乳糖苷。槲皮素糖苷在肠中吸收。糖苷由小肠刷状缘膜中的b-葡萄糖苷酶及乳糖酶根皮苷水解酶进行裂解，得到的糖苷配基被人体吸收。糖苷配基经由肠上皮细胞内的II 相生物转化酶进行广泛代谢，这会产生一系列的硫酸化、葡糖醛酸化及甲基化代谢物。这些代谢物通过肝门静脉转运至肝脏，发生进一步的II 相代谢，然后进入体循环。体外研究表明槲皮素代谢物的活性取决于它们结构中偶联基团的类型和位置。例如，Jansich 等人报道：相比于槲皮素糖苷配基，槲皮素-7-葡糖苷酸更能增加体外LDL 氧化的滞后时间，而相同浓度的槲皮素-3'-硫酸酯或异鼠李素-3-葡糖苷酸则不会影响该滞后时间。鉴定血浆中每种代谢物的动力学谱对了解它们的作用机理和生物活性非常关键。全扫描四极杆电喷雾电离液质联用(ESI LC/MS) 方法已成功用于鉴定血浆中的代谢物，但这些方法的灵敏度较低，无法用于监测血浆中每种代谢物在六小时后的含量变化。ESI LC/MS/MS对槲皮素代谢物的定量主要依靠葡糖苷酸或硫酸结合物的酶裂解，以及槲皮素糖苷配基及异鼠李素（甲基槲皮素糖苷配基）的共存物测定。虽然该方法可用于建立药代动力学曲线，但是损失了循环代谢物的相关信息。精确质量数串联质谱可有效促进复杂混合物中的代谢物结构解析，特别是对于黄酮类代谢物的复杂混合物（例如，槲皮素）非常有用，目前这类混合物尚缺乏商业标样。精确质量数四极杆飞行时间(Q-TOF) 质谱方法具有较高的灵敏度和选择性，能有效分辨同重离子，提供更准确的分子式信息，从而促进非靶向未知化合物的鉴定。对Q-TOF LC/MS 模式下生成的子离子进行精确质量数分析可简化结构解析，进一步促进化合物的鉴定。本应用简报将介绍用于解释槲皮素生物利用度差异的工具：UHPLC-ESI 精确质量数Q-TOF LC/MS 分析，结合安捷伦个人化合物数据库和谱库(PCDL) 管理软件和Agilent MassHunter 定性分析软件。作者特别对食用两种不同食物（苹果皮和洋葱粉）后血浆中存在的槲皮素代谢物进行了研究，这两种食物中的总槲皮素量相同，但槲皮素糖苷组成不同。研究的目的是要了解糖苷形式是否会影响药代动力学参数（例如，吸收和代谢）。由于缺乏标样，本研究通过比较代谢物和参比标样的响应进行半定量分析。结论精确质量数Q-TOF LC/MS 可对人血浆中的槲皮素代谢物进行高灵敏度、高选择性的检测、鉴定、相对定量和动态监测。在8 名女性和8 名男性受试者食用富含微粒化苹果皮或洋葱粉的苹果酱（其中含总槲皮素100 mg）后的24 小时内，可在他/她们的血浆内鉴定到类似的槲皮素代谢物。将定制的黄酮类代谢物PCDL 导入MassHunter 定性分析软件后，可快速进行代谢物筛选和鉴定。Q-TOF MS/MS 碎片数据和 MassHunter MSC 软件可用于确认所鉴定代谢物的结构。ESI 的极性会影响槲皮素代谢物的离子化效率。例如，槲皮素谷胱甘肽可在负ESI 模式下鉴定，但在正ESI 模式下无法鉴定。鉴定出的主要代谢物包括：槲皮素硫酸酯，槲皮素葡糖苷酸，以及槲皮素二葡糖苷酸，且在两种试验方案中结果相同。但是，两种试验方案的药代动力学参数AUC0?24 h 和Cmax 存在差异。食用洋葱粉后，槲皮素代谢物的血浆浓度显著增高。此外，槲皮素硫酸酯和槲皮素硫酸葡糖苷酸代谢物的AUC0?24 h 还存在性别差异。