人尿液和血清中合成芬太尼类似物检测方案(液质联用仪)

应用简报 Agilent临床研究 Trusted Answers 使用 Agilent Ultivo LC/TQ 对人尿液和血清中的合成芬太尼类似物进行检测与分析确认 Peter JW Stone 安捷伦科技有限公司 Santa Clara， CA 本研究开发出一种灵敏、稳定且相对快速的靶向分析方法，用于定量分析12种合成芬太尼阿片类药物、4-ANPP(合成前体分子)以及称为 W-18 的强大的阿片类似合成物。利用简单的样品前处理程序配制人血清和尿液基质样品，所配制的样品可直接使用 Agilent Ultivo 三重四极杆质谱仪 LC/MS (LC/TQ) 进行分析。本研究概述了对尿液和血清这两种基质中各种分析物的分析性能的比较。 在不断快速变化的秘密合成药物环境下，同步采用新的分析方法来测量此类分析物和代谢物至关重要。芬太尼类似物阿片类药物是一类新兴的阿片类药物。 使用 Agilent Masshunter Optimizer 自动化方法与 Agilent Ultivo 三重四极杆LC/MS， 开发出一种用于对12种合成芬太尼阿片类药物、合成前体前子 4-ANPP和称为 W-18的类似阿片类合成物进行分析的靶向分析方法。采用简单的样品前处理技术配制以尿液和血清为代表性基质的人体样品，并对该分析研究方法的线性、灵敏度和精度进行了测试。 为获得统计上有效的分析性能结果，本研究配制并分析了多个单独批次的样品。本文讨论了所得到的各种合成阿片类药物的定量下限(LLOQ)、色谱精度、校准线性、范围和准确度。还概述了对尿液和血清这两种基质中各种分析物的分析性能的比较。 液相色谱配置和参数 配置 仪器 Agilent 1290 Infinity ll 高速泵 (G7120A) Agilent 1290 Infinity 自动进样器 (G4226A) Agilent 1290 Infinity 自动进样器温控 (G1330B) Agilent 1290 Infinity lI高容量柱温箱(G7116B) 进样针清洗 100%甲醇 自动进样器温度 4°C 进样量 5pL 分析柱 Agilent Poroshell 120 EC-C18液相色谱柱，2.1×50 mm， 2.7 pm (部件号699775-902) 柱温 55°℃ 流动相A 含0.01%甲酸和5mM甲酸铵的水溶液 流动相B 0.01%甲酸的甲醇溶液 流速 0.4mL/min 梯度 时间 (min) %B 0 100.5 153.0 505.5 95 6.0 95 总运行时间 7分钟 三重四极杆质谱仪配置和参数 配置 仪器 配备电喷雾离子源(ESI) 的 Agilent Ultivo 三重四杆质谱仪 MS/MS模式 MRM 离子模式 正离子 干燥气温度 325℃ 干燥气流速 9 L/min 雾化器压力 35 psi 鞘气温度 350°℃ 鞘气流速 11 L/min 喷嘴电压 0V 正离子化的毛细管电压 3500V MS1/MS2分辨率 0.7/0.7 Unit 驻留时间 10 ms 化学品与试剂 用于校准品基质匹配的人血清和尿液分别购自 Golden West Biologicals 和 UTAKLaboratories (Valencia， CA)。标准品和内标购自 Sigma-Aldrich (St. Louis， MO) 和Cerilliant Corporation (Round Rock， TX)。样品前处理和液相色谱溶剂购自 Sigma-Aldrich (St. Louis， MO) 和 HoneywellRiedel-de Haen (Seelze， Germany)。 样品前处理 在人血清样品(250pL)中加标各种浓度的校准品，然后加入含气代内标的低温乙腈(500pL)使蛋白质沉淀，并以5000 rpm 的转速进行离心。然后在仪器进样之前，用10：90甲醇：水溶剂混合物进一步稀释(1：2)上清液。所得的稀释倍数为1：6。 在阴性尿样中加入内标并达到指定的校准浓度，在4℃下以 5000 rpm 的转速离心10分钟，然后将 100 uL 上清液转移至样品瓶中，并加入900 pL去离子水将其定容至1mL。所得的稀释倍数为1：10。12种校准浓度处于 1 pg/mL至500 ng/mL 的范围内。 数据分析 采集数据并用 Agilent MassHunter 软件包 C.01.00 版对 Ultivo 采集的数据进行分析。利用 MassHunter Optimizer 软件获得 MS/MS 离子对，在进样分析各化合物或内标的纯溶液时确定最佳的母离子和子离子、碎裂电压和碰撞能量。 人血清提取物获得了优异的线性和重现性，对于实际浓度范围通常为10或50 pg/mL 至500 ng/mL(柱上进样量50/250 fg 至柱上进样量2500 pg) 的各种合成阿片类分析物，配制的三批样品得到的线性系数高于 0.997。由三批样品得到的精度数据表明，在所有校准浓度下，%RSD 变化小于7%。 由稀释尿液样品得到的结果表明，对于实际浓度范围为50或 100 pg/mL 至500 ng/mL (柱上进样量 250/500 fg 至柱上进样量2500 pg) 的各种合成阿片类分析物，配制的三批样品得到的线性系数高于0.996。由三批样品得到的精度数据表明，在所有校准浓度下， %RSD小于9%。 该方法去用 LC/TQ 在宽浓度范围内同时检测多种化合物。各种分析物的校准浓度范围为 12 ng/mL 至200000 ng/mL。高浓度范围为 1.5 pg/mL 至200 pg/mL，所用浓度与曲线拟合参数一起在表1中列出。R²值均高于0.997，其中一些化合物在浓度范围内呈现线性响应，而其他化合物则需要二次拟合。 表1.从血清和尿液中获得的 LLOQ浓度，以及在血清和尿液中浓度分别为 50 pg/mL 和100 pg/mL的条件下获得的%RSD 分析物 实际LLOQ(血清)(pg/mL) 血清中浓度为 50pg/mL 的：分析物CV(n=3) 实际LLOQ(尿液)(pg/mL) 尿液中浓度为100 pg/mL的分析物CV (n=3) 4-ANPP 10 1.94% 100 15.33% 3-甲基芬太尼 50 4.92% 100 2.94% 乙酰芬太尼 10 5.42% 50 6.07% 乙酰去甲芬太尼 50 6.35% 100 3.59% 丙烯酰芬太尼 10 4.21% 50 15.32% 丁酰芬太尼 50 3.33% 100 9.61% 卡芬太尼 10 4.36% 50 7.31% 呋喃芬太尼 50 5.97% 50 5.82% 对氟丁酰芬太尼 50 7.96% 50 11.62% 去甲芬太尼 50 14.94% 100 2.06% N-去甲基 U-47700 50 11.56% 100 17.70% 戊酰芬太尼 50 6.29% 100 3.79% U-47700 50 4.31% 100 6.74% W-18 RM 50 6.33% 50 8.30% 图3.血清中卡芬太尼的 LLOQ 为 10 pg/mL 图4.血清中化合物的示例性校准曲线 5 ( 本研究项目表明，创新的 Agilent UltivoLC/TQ的高性能结合所述分析方法能够使人血清中浓度在10或 50 pg/mL至500 ng/mL 范围内的各种合成阿片类药 物获得优异的线性、精度和灵敏度。该方 法还使人尿液中浓度在50 或 100 pg/mL至500 ng/mL 范围内的各种合成阿片类药物获得了高分析灵敏度。 ) 未来的工作重点在于消除这种分析方法的潜在基质或药物干扰，应用于分析更多新合成物质，并开发新的标准品。 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 仅限研究使用。不可用于诊断目的。 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 摘要本研究开发出一种灵敏、稳定且相对快速的靶向分析方法，用于定量分析 12 种合成芬太尼阿片类药物、4-ANPP（合成前体分子）以及称为 W-18 的强大的阿片类似合成物。利用简单的样品前处理程序配制人血清和尿液基质样品，所配制的样品可直接使用 Agilent Ultivo 三重四极杆质谱仪 LC/MS (LC/TQ) 进行分析。本研究概述了对尿液和血清这两种基质中各种分析物的分析性能的比较。前言在不断快速变化的秘密合成药物环境下，同步采用新的分析方法来测量此类分析物和代谢物至关重要。芬太尼类似物阿片类药物是一类新兴的阿片类药物。使用 Agilent Masshunter Optimizer 自动化方法与 Agilent Ultivo 三重四极杆 LC/MS，开发出一种用于对 12 种合成芬太尼阿片类药物、合成前体分子 4-ANPP 和称为 W-18 的类似阿片类合成物进行分析的靶向分析方法。采用简单的样品前处理技术配制以尿液和血清为代表性基质的人体样品，并对该分析研究方法的线性、灵敏度和精度进行了测试。为获得统计上有效的分析性能结果，本研究配制并分析了多个单独批次的样品。本文讨论了所得到的各种合成阿片类药物的定量下限 (LLOQ)、色谱精度、校准线性、范围和准确度。还概述了对尿液和血清这两种基质中各种分析物的分析性能的比较。结论本研究项目表明，创新的 Agilent Ultivo LC/TQ 的高性能结合所述分析方法能够使人血清中浓度在 10 或 50 pg/mL 至 500 ng/mL 范围内的各种合成阿片类药物获得优异的线性、精度和灵敏度。该方法还使人尿液中浓度在 50 或 100 pg/mL 至 500 ng/mL 范围内的各种合成阿片类药物获得了高分析灵敏度。未来的工作重点在于消除这种分析方法的潜在基质或药物干扰，应用于分析更多新合成物质，并开发新的标准品。