血液样品中铅检测方案(原子吸收光谱)

用于测定血铅的高性能石墨炉管 应用简报临床研究 作者 Kai Robinson、John Sanders、James Barker 安捷伦科技公司澳大利亚墨尔本 前言 随着石墨炉原子吸收光谱技术 (GF-AAS)的发展，石墨管与仪器平台也在不断发展。早期石墨管采用未涂覆的石墨，寿命短、存在记忆效应且灵敏度低。热解涂层管的开发提高了石墨管的抗氧化性。经过涂覆的石墨管具有优异的寿命、分析物灵敏度和精密度。 石墨管设计的新一项进步是引入了石墨平台(“L'vov 平台”)，将样品注入到该平台上进行原子化。平台的使用将原子化延迟至气体环境相对于管壁达到稳定温度时。这避免了气相分析物的冷凝和重组。 各种平台设计已经使用了多年，其中一些平台具有样品体积小和原子化温度受限等局限性。 ： 本应用简报介绍了一种克服以上局限性的石墨管，与之前的石墨管设计相比提高了灵敏度和检测限。这款设计称为安捷伦 Omega 平台管。 接触铅对人体健康具有不利影响。美国疾病控制与预防中心(CDC)规定，血铅浓度大于 10 pg/dL (相当于0.48 umol/L)时就应受到关注，并认可研究中表明的较低血铅浓度即会对儿童具有不利影响的观点[1]。 本应用简报评估了安捷伦 Omega 平台管在血铅测定中的应用。气和塞曼背景校正是适用于该应用的两种常用技术。本应用采用塞曼背景校正法对背景进行校正。这种复杂的基质需要很好地控制温度曲线。 仪器 用于测定血铅的仪器为具有塞曼背景校正功能的Agilent 280Z AA。 Agilent 280Z AA 配置有8个处于固定位置的灯。安捷伦 UltrAA 灯有助于提高发射强度、降低噪音并提升灵敏度，可用于该仪器。 光谱仪配备 Agilent GTA 120 石墨管原子化器和Agilent PSD 120可编程进样器。 Agilent PSD 120 最多能够支持135种溶液，且允许进行自动化标样前处理和超范围稀释。 Tube-CAM 石墨炉摄像头是 Agilent 280Z AA 的标准配置。Tube-CAM 通过 SpectrAA 软件呈现了石墨管内部的实时视图。在整个分析过程中，可以记录静态图像和视频。 Tube-CAM 能够准确设置进样高度，在方法开发过程中确认石墨炉条件，并监测原子化阶段之后石墨管内可能出现的基质积聚。 表1列出了仪器设置，表2列出了分析中使用的石墨炉设置。所用的惰性气体为高纯度氩气。 表1.仪器设置 仪器参数 设置 测量 重复次数 2 模式 峰面积 光学参数 灯 Pb UltrAA 波长 283.3 nm 狭缝宽度 0.5R 灯电流 10.0 mA 标样 标样1 0.0483 pmol/L 标样2 0.0966 pmol/L 标样3 0.1449 pmol/L 标样4 0.2419 pmol/L 标样5 0.3382 pmol/L 进样器 总体积 10pL 样品量 10 pL 进样次数 1 表2.石墨炉设置 步骤 温度(℃) 时间 (s) 流速(L/min) 读数 1 80 5 0.3 2 95 40 0.3 3 120 5 0.3 4 250 5 0.3 5 250 5 0.3 6 400 10 0.3 7 700 10 0.3 8 700 10 0.3 9 700 2 0 10 2200 0.7 0 有 11 2200 1.5 0 有 12 2600 0.4 0.3 13 2600 2 0.3 材料和试剂 利用非离子型表面活性剂使血液样品的红细胞发生溶解。采用的磷酸盐化学改性剂可使用更高的灰化温度，从而减小基质干扰效应并稳定铅的信号[21。 用下列试剂配制校准溶液并进行样品前处理： ( 铅标准溶液，1000 m g /L (SpectrasoL， BDH Laboratory Supplies， Poole， BH15 1TD，England) ) ( 非离子型表面活性剂 (Triton X-100， LABCHEM， AJAX Chemicals，Sydney，NSW，Australia) ) ( 高纯度硝酸 (Ultr a pur， Mer c k， Kil s yth， V i ctoria， Australia) ) ( 磷酸二氢铵 (Suprapur， Merck， Kilsyth， Victoria， Australia) ) 1类水(MW/cm) 全血金属对照物勿 (Lyphochek 浓度1、2和3，BIO-RAD Laboratories， Irvine， CA， USA) ( 猪血(经EDTA 抗凝和y射线照射处理， QCT Quality Control Technologies Pty Ltd， Newcastle， NSW， Australia) ) 样品前处理 将1.5g磷酸二氢铵和5mL 1%(v/v) 的 Triton X-100溶液加入1类水中并定容至100mL， 制得非离子型表面活性剂/磷酸盐溶液。 用0.1%硝酸配制 1 mg/L 铅溶液 (4.83 pmol/L Pb)。然后采用该溶液配制校准溶液和基质加标样品。 用非离子型表面活性剂/磷酸盐溶液将1mL猪血和所需量的1 mg/L 铅溶液稀释至10mL，制得五种校准溶液和一个空白。 按照随附的说明书复溶 Lyphochek 全血金属对照物。然后用非离子型表面活性剂/磷酸盐溶液将0.5mL 复溶的 Lyphochek 稀释至5mL，制得有证标准物质(CRM)。 用非离子型表面活性剂/磷酸盐溶液将 0.5mL Lyphochek 浓度1和20pL1 mg/L的 Pb 溶液稀释至5mL， 制得 Lyphochek浓度1加标样品。 每天配制新鲜的所有校准溶液和 CRM 溶液。 用于 PSD-120 可编程进样器的冲洗溶液为溶于1类水中的0.1%硝酸和0.1%非离子型表面活性剂。可使用溶于1类水中的0.1%硝酸和10%乙醇作为另一种冲洗溶液。 结果与讨论 加标样品和 CRM 获得了准确的结果(参见表3)。该方法表现出优异的相关系数， R²=0.9992(参见图1)。0mega 平台管对于这种复杂的基质表现出良好的性能，具有极小的碳积聚(参见图2)。 表3.加标样品和 CRM结果 样品 Pb 浓度 (umol/L) 回收率(%) 猪血 0 N/A 猪血加标样品(0.14 umol/L Pb) 0.14 100 Lypocheck 1 (0.41 pmol/LPb) 0.40 98 Lypocheck 2 (1.34 pmol/L Pb) 1.31 98 Lypocheck 3 (2.50 pmol/L Pb) 2.63 105 标准品和样品的温度曲线表明，利用0mega 平台管获得了高信噪比(参见图3和4)。 未观察到样品之间存在交叉污染。在每个分析序列之后，将分配器毛细管置于王水中浸泡1分钟，除去所有蛋白质并确保毛细管保持疏水性。这是针对这种基质的推荐方法。 图4. Lypocheck 1 SRM 的温度曲线 结论 图1.血液中 Pb 的校准曲线表现出优异的相关系数， R²=0.9992 安捷伦高性能 Omega 平台管可通过 Agilent 280Z AA以石墨炉 AAS 法成功测定血铅。复杂的样品基质产生了宽带分子吸收，可通过塞曼背景校正得到准确校正。加标加品和标准参比物质 (0.41 umol/L)获得了优异的回收率，分别为100%和98%。 安捷伦 Omega 平台管设计的优势在于适用于各种其他分析。 图2.分析完成时， 由 Tube-CAM 摄像头采集的Omega 平台管的图像 图3.血液标准品中 0.0483 pmol/L Pb 的温度曲线 ( 参考文献 ) ( 1. J.L. Gerberding， et al.， Preventing Lead Poisoning inYoung Children， A Statement by the C e nters for DiseaseControl， Public Health S ervice， Atlanta， GA (5th R evisionAugust 2005). U.S. Department of Health and Human Services， Centers for Disease Control and Prevention Web site. Available at ： http：//www.cdc.gov/nceh/lead/ ACCLPP/recom- mend.htm Accessed 2 0 th June， 2008 ) 2. Hinderberger， E. J.， Kaiser， M. L.， and Koirtyohann，S. R.At. Spectrosc.1981， 2 (1)，1-7 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 仅限研究使用。不可用于诊断目的。 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 @安捷伦科技(中国)有限公司，2015 2015年8月12日，中国出版 出版号：SI-1586CHCN Agilent Technologies Agilent Technologies 前言随着石墨炉原子吸收光谱技术 (GF-AAS) 的发展，石墨管与仪器平台也在不断发展。早期石墨管采用未涂覆的石墨，寿命短、存在记忆效应且灵敏度低。热解涂层管的开发提高了石墨管的抗氧化性。经过涂覆的石墨管具有优异的寿命、分析物灵敏度和精密度。石墨管设计的新一项进步是引入了石墨平台（“L'vov 平台”），将样品注入到该平台上进行原子化。平台的使用将原子化延迟至气体环境相对于管壁达到稳定温度时。这避免了气相分析物的冷凝和重组。各种平台设计已经使用了多年，其中一些平台具有样品体积小和原子化温度受限等局限性。本应用简报介绍了一种克服以上局限性的石墨管，与之前的石墨管设计相比提高了灵敏度和检测限。这款设计称为安捷伦 Omega 平台管。接触铅对人体健康具有不利影响。美国疾病控制与预防中心 (CDC) 规定，血铅浓度大于 10 g/dL（相当于 0.48 mol/L）时就应受到关注，并认可研究中表明的较低血铅浓度即会对儿童具有不利影响的观点。本应用简报评估了安捷伦 Omega 平台管在血铅测定中的应用。氘和塞曼背景校正是适用于该应用的两种常用技术。本应用采用塞曼背景校正法对背景进行校正。这种复杂的基质需要很好地控制温度曲线。结论安捷伦高性能 Omega 平台管可通过 Agilent 280Z AA 以石墨炉 AAS 法成功测定血铅。复杂的样品基质产生了宽带分子吸收，可通过塞曼背景校正得到准确校正。加标样品和标准参比物质 (0.41 mol/L) 获得了优异的回收率，分别为 100% 和 98%。安捷伦 Omega 平台管设计的优势在于适用于各种其他分析。