肉桂中肉桂酸和肉桂醛检测方案(毛细管电泳仪)

Vol.26 No. 2274~276第26卷第2期2007年3月分析测试学报FENXICESHIXUEBAO (Joumal of Instrumental Analysis) 275李利军等：非水毛细管电泳/紫外检测法测定肉桂中的肉桂酸和肉桂醛第2期 非水毛细管电泳/紫外检测法测定肉桂中的肉桂酸和肉桂醛 李利军，，黄文艺2，冯 军，程 昊2，孔红星，吴健玲 (1.广西工学院 生物与化学工程系，广西 柳州 545006： 2广西大学 化学与化学工程学院，广西 南宁 530005) 摘 要：建立了用非水相体系高效毛细管电泳/紫外检测法同时测定肉桂酸和肉桂醛的新方法，考察了运行电压、非水相介质和电解质等因素的影响。在25℃下，以乙腈和碳酸丙烯酯(体积比3 ：2)的混合液为缓冲体系的溶剂，缓冲体系中含25mmol/L十六烷基三甲基溴化铵，0.375%(中)乙酸，以碳酸丙烯酯为样品溶剂，重力进样30s，运行电压20kV， 毛细管总长 45 cm，有效长度30 cm， 075 um，检测波长310 mm。肉桂酸线性范围为 4~100 mg/L， r=0.9994，检出限为0.80mg/L， RSD为 1.07%。肉桂醛的线性范围10~240mg/L，r=0.9996，检出限为2.30mg/L， RSD 为 2.19%。应用于肉桂中的肉桂醛和肉桂酸的测定，结果满意。 关键词：肉桂；肉桂酸；肉桂醛；非水相体系；毛细管电泳；紫外检测 中图分类号：O657.8；R284.1 文献标识码：A 文章编号：1004-4957(2007)02-0274-03 Detem ination of Cinnamaldehyde and Cinnamic Acid in Cinnamon byNon aqueous Cap illary Electropho resis with UV Detection LILi-jun， HUANGWen-yi， FENG Jun， CHENG Hao， KONG Hong-xing， wU Jian-ling (1. Department of B io logical and Chem ical Engineering， Guangxi University of Techno logy， Liuzhou 545006， China；2 College of Chem istry and Chem ical Engineering， Guangxi University， Nanning530005， China) Abstact： A new method for the detemm ination of cinnamaldehyde and cinnamic acid was established bynon-aqueous cap illary electrophoresis with UV detectionTThe effects of the different types of non-aque-ous buffer solutions， the concentrations of electrolyte and the app lied voltage were investigated The buffering solution used in this new method was the m ixture of acetonitrile and propylene carbonate (33：2， byvolume) containing 0.375%(中) acetic acid and 25 mmol/L hexadecyltrimethyl ammonium brom ide Theapplied voltage was 20 kV and the UV detection wavelength was 310 nm. The linear ranges of the methodwere 10- 240 mg/L (r=0.999 6) for cinnamaldehyde and 4- 100 mg/L(r=0.999 4) for cinnam icacid， respectivelyTThe recoveries of cinnamaldehyde and cinnamic acid were 97%， 104% and the de-tection lim its were 2.3 mg/L， 0.80 mg/L， respectively This method was simple， rap id and accurate Ithad been successfully used for the detem ination of cinnamaldehyde and cinnamic acid in cinnamon Key words：Cinnamon； Cinnamic acid； Cinnamaldehyde； Non-aqueous；Cap illary electrophoresis；UV detection 肉桂为植物肉桂(Cinnam om um cass， la Pres1.)的干燥树皮，具有补火助阳、活血通经的功效，用于阳痿、宫冷、腰膝冷痈、肾虚作喘等症。肉桂酸和肉桂醛是肉桂中的两种活性成分。肉桂醛具有镇静、镇痛及解热作用；肉桂酸具有抗菌、升高白细胞、利胆21、抗癌3作用。 文献曾报道用气相色谱法【1，4]、导数光谱法51、薄层扫描法2，6]和高效液相色谱法17-91等测定肉桂醛含量；紫外分光光度法101和毛细管电泳法法1-121等测定肉桂醛和肉桂酸，但到目前为止，还没有利用非水毛细管电泳法同时测定肉桂酸和肉桂醛两种组分的报道。 由于肉桂醛和肉桂酸在水中的溶解度较低，而易溶于有机溶剂，因此本文利用非水毛细管电泳技术，采用能同时溶解肉桂酸和肉桂醛的乙腈和碳酸丙烯酯作为缓冲液溶剂，以十六烷基三甲基溴化铵为电解质，以乙酸调节 pH值，实现了对肉桂酸和肉桂醛的分离分析，建立了非水体系毛细管电泳- ( 收稿日期：2006-03-18：修回日期：2006-08-06 ) ( 基金项目：广西教育厅科研基金资助项目(2000392)；广西自然科学基金资助项目(0481019) ) ( 作者简介：李利军(1966-)，男，湖北黄梅人，教授，理学博士， Tel： 0772-2685028， E-mail： lilijun 0 562@sina. com ) 紫外检测法同时测定肉桂中两种有效成分的含量，方法简便、准确，可为不同产地肉桂的质量控制提供依据。 实验部分 1.1 仪器与试剂 ACS2000型高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司)，负电源：电压0~30kV可调，未涂层石英毛细管细75 um， 总长 45 cm、有效长度30cm，检测波长 310 mm。UV-2102PC型紫外-可见分光光度计(Unico instruments Co.， Ltd)。 肉桂醛，国药集团分析试剂有限公司；肉桂酸，中国医药上海北学试剂公司；碳酸丙烯酯、乙腈，国药集团化学试剂有限公司；十六烷基三甲基溴化铵，湘中地质实验研究所；氢氧化钠，乙酸。以上所有试剂均为分析纯。 1.2 样品的处理 将肉桂市购)置于60℃的烘箱内烘12h，然后研磨成粉。准确称取 0.5g肉桂粉置于容量瓶内，用 25mL醇醇浸泡，超声波振荡 30min， 浸泡4h，再进行超声波振荡30min后过滤，滤渣用甲醇冲洗3遍，合并滤液。将滤液用真空旋转蒸发器在40℃下蒸干，所得固体用碳酸丙烯酯溶解，过滤后转移至25mL的容量瓶内，定容至刻度，制成样品溶液。 1.3 实验条件与操作 电压：20 kV；进样方式：重力进样；进样高度： 11cm；进样时间：： 30 s：检测波长310mm：环境温度：25℃。 毛细管的处理：实验前依次用 1mol/L NaOH水溶液、双蒸水、无水乙腈分别冲冼5min， 进样前用缓冲液冲洗 5min， 实验4h后更换缓冲液。实验结束后依次用无水乙腈、二次蒸馏水冲洗，并用二次蒸馏水浸泡过夜。实验所用的溶液进样前均用0.45 um的滤膜过滤，并经超声波脱气。 2 结果与讨论 2.1 分离条件选择 2.1.1 检测波长的选择 实验以纯碳酸丙烯酯为参比液，分别对1g/L肉桂酸和肉桂醛的碳酸丙烯酯溶液在200~400 nm波长之间进行扫描，发现肉桂酸和肉桂醛分别在310、342mm处有最大吸收，并且肉桂醛在310mm处也有较强的吸收，因此本实验选取310nm作为检测波长。 2.1.2 缓冲体系的选择 (1)试剂的选择：在非水体系中常用乙腈或碳酸丙烯酯作为分离分析中性物质的溶剂。虽然乙腈的电渗流较大，用作缓冲液溶剂时分析时间短，但乙腈对表面活性剂的溶解能力有限，因此不能将肉桂酸和肉桂醛有效分离。表面活性剂易溶于碳酸丙烯酯，以碳酸丙烯酯为溶剂时，能将肉桂酸和肉桂醛有效地分离，但其电渗流小，分离分析时间长。因此本实验以乙腈和碳酸丙烯酯的混合液为缓冲试剂。考察了不同比例的乙腈和碳酸丙烯酯的混合液，发现随着碳酸丙烯酯的比例的增加分析时间越长，但若碳酸丙烯酯所含的比例太低则表面活性剂的溶解能力将受到限制，肉桂酸和肉桂醛将不能很好地分离。通过实验发现乙腈和碳酸丙烯酯的比例为3 ：2时分析时间较短，而且能使肉桂酸和肉桂醛很好地分离。因此本实验选择3 ：2的乙腈和碳酸丙烯酯的混和液为缓冲体系的溶剂。 (2)十六烷基三甲基溴化铵浓度的选择：在非水相体系时，表面活性剂的临界胶束浓度(CMC)要比在水相体系时大得多。因此本实验选择 CMC较小的十六烷基三甲基溴化铵调节电渗流。考察了十六烷基三甲基溴化铵的浓度为5~30 mmol/L时的实验效果。结果表明，十六烷基三甲基溴化铵浓度对分析时间有很大影响。低浓度时基线稳定，但分析时间长、样品峰很宽，而且肉桂酸的峰有拖尾现象；随着浓度的增大，峰宽变窄，分析时间逐渐缩短，在15 mmol/L分析时间最短；浓度大于15 mmol/L时分析时间又逐渐增长。但十六烷基三甲基溴化铵浓度的改变不能完全克服肉桂酸的峰拖尾现象。综合考虑，本实验以 25 mmo1/L 为十六烷基三甲基溴化铵的最佳用量。 (3)pH值的调节：本实验在缓冲体系中通过改变的乙酸体积百分比(0~2.0%)来调节缓冲体系的 pH值，实验表明 pH值对峰形有很大的影响。在不加乙酸时，肉桂酸的峰宽而且有拖尾现象，随着乙酸浓度的增加，肉桂酸的峰形变得尖锐，拖尾现象逐渐消失。但在低浓度的乙酸时，肉桂酸和肉桂醛不能实现基线分离，肉桂酸和肉桂醛的分离度随着乙酸浓度的增加而增加，实现了基线分离，但分析时间也会相应增加。综合考虑，本实验选择加入乙酸0.375%()时为最佳 pH值。 2.1.3 分离电压的选择 实验考察了电压为10~25kV时的试验效果，发现电压低时，基线稳定，但样品的分析时间长，峰形宽；随着电压的增加，样品的分析时间缩短，峰形窄，分离效果好，但基线的稳定性略有下降，基线噪音增大。为保证较短的分离时间和较好的基线，选用20kV作为分离电压。 2.2 工作曲线的制定 用碳酸丙烯酯配制不同浓度的肉桂酸和肉桂醛系列标准溶液。按上述试验方法，平行测定 5次，由其平均峰高(mV)与质量浓度(mg/L)计算线性方程及相关系数。肉桂酸： Y=82.079 X+8.547 4，线性范围：4~100mg/L， r=0.999 4；肉桂醛：Y=54.693 X-178.59，线性范围： 10~240 mg/L，r=0.999 6。按信噪比 SIN=3计算，肉桂酸和肉桂醛的检出限分别为0.80mg/L和2.3mg/L。对20mg/L肉桂酸和40mg/L肉桂醛平行测定5次，其RSD分别为1.07%和2.19%1.8- 2.3 样品的测定与回收率实验 在上述实验条件下测定肉桂样品溶液中肉桂酸和肉桂醛的含量，平行测定5次，取其平均值。肉桂标样及样品电泳谱图见图1。样品溶液中肉桂酸和肉桂醛的含量分别为： 11.8mg/L和217.2mg/L。 精密称取已知含量为同一肉桂的干燥粉末0.5g，分别精密加入肉桂醛对照品储备液及肉桂酸对照品储备液适量，用本法进行回收率试验。按样品制备方法平行操作5份，测得肉桂醛的平均回收率为97%，RSD 为2.95%(n=5)；肉桂酸的平均回收率为104%， RSD为4.53%(n=5)。 图1 标准品(A)和肉桂样品(B)的电泳谱图 Fig.1 Electropherograms of standard sample(A)and cinnamon sample(B) peak identification： 1. cinnamaldehyde； 2. cinnamic aci ( 参考文献： ) ( 冼寒梅，黄海滨，陈燕军.肉桂泡汁和煎液中桂皮醛含量的气相色谱分析[J].广西植物，1996，1 6 (2)：188 . ) ( 张 玲，单卫华，时延增，等.双波长薄层扫描法测定肉桂中肉桂酸的含量[J].药物分析杂志，1997， ， 17(6)： 408-410. ) ( [3] 黄 炜，黄济群.桂皮酸诱导高转移人肺癌细胞恶性表型逆转和抑制侵袭作用的研究[J].中国肿瘤临床，1997， 24(6)：456-460. ) ( 4 郭晓玲.桂枝茯苓胶囊中桂皮醛和丹皮酚的含量测定[J].中药材，1999， 2 2(7)：36 1 -362 5 ) ( 李同芬.肉桂中桂皮醛的导数光谱法测定[J].中成药，1994，16(3)： 16-17. ) ( [6] 刘伟华，孙晓菊，张立群.薄层扫描法测定肉桂中桂皮醛的含量[J].中国中药杂志， 1992， 1 7(6)： 3 58-3 6 0. ) ( [7] 宋建平，谭晓梅，朴奉花.高效液相色谱法测定桂皮中肉桂酸含量[J].药物分析杂志，l992， ，L (3)：1 182- 184. ) ( 朱晓薇，蔡 刚，潘桂湘，等. 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