叶下珠中没食子酸检测方案(毛细管电泳仪)

第8卷第2期2008年3月Vol8No 2Mar 2008潍坊学院学报Joumal ofW eifang University 潍坊学院学报2008年3月 毛细管区带电泳法测定叶下珠中没食子酸的含量 刘海兴 (潍坊学院，山东 潍坊 261061) 摘 要：采用毛细管区带电泳法测定了叶下珠中没食子酸的含量。在 20 mmol/L NaBO，缓冲溶液的条件下，实现了被测组分的有效分离。测得叶下珠中没食子酸的含量为5.42 mg/g (RSD =5.62%)(n=6)。平均回收率为110.4%6((n=6)。本法简便、快速。 关键词：毛细管电泳；叶下珠；没食子酸 中图分类号：O657.8 文献标识码：A 文章编号：1671-4288(2008)02-0073-02 叶下珠为大戟科植物叶下珠的干燥全草，具有平肝清热、利水解毒的功效。主治肠炎、痢疾、传染性肝炎、肾炎水肿、尿路感染、无名肿毒等。叶下珠中含有正十八烷谷甾醇和没食子酸等。没食子酸的含量较高，它具有较强的抗菌、抗病毒和抗肿瘤作用。目前叶下珠中没食子酸含量的测定方法有HPLC法等11，2，毛细管电泳法测定叶下珠中没食子酸的含量未见文献报道。毛细管电泳是近些年发展起来的分离分析新技术，以其快速、高效、微量、灵敏度高、实验经济等特点，在化学、生命科学和药学等领域均有广泛的应用，尤其适合于药物化学成分的分析13-6]。本文建立了毛细管电泳测定叶下珠中没食子酸含量的新方法。 1实验部分 1.1 仪器与试剂 CL1030高效毛细管电泳仪(北京彩陆仪器有限公司)。HW2000色谱工作站(南京千谱软件公司)。精密pH计(上海雷磁仪器厂)。 没食子酸来自中国药品和生物制品鉴定所，叶下珠购于山东潍坊颐卜生大药房。所用其它试剂均为分析纯，水为双蒸馏水。 1.2 实验方法 实验前，毛细管依次用1 mol/L HC1双蒸馏水、1 mol/L NaOH、双蒸馏水各冲洗 8min，然后再用缓冲溶液冲洗 8min。4次运行之后，毛细管再用起初的方法清洗1次。 运行电压为20kV，紫外检测波长为270 mm，实验温度为23℃，重力进样时间为8s(7.5 cm高度差)。 1.3 样品制备 称取0.1672g叶下珠粉末，加入6mL双蒸水，超声提取时间 30min(40℃)，过滤、洗涤并定容至25mL溶液，即为叶下珠样品溶液。 2 结果与讨论 2.1 电泳条件的选择 配成浓度为10、20、30、40、50 mmol/L硼砂缓冲溶液，运行没食子酸标准溶液和叶下珠样品溶液(20KV)，测得没食子酸迁移时间分别为7.228、9.473、11.024、13.875、14.980min。由此表明，随着硼砂浓度的增加，没食子酸迁移时间增加。叶下珠样品溶液中没食子酸与其它组分均获得了分离。在20mmol/L硼砂溶液中，又考察了运行电压对没食子酸迁移时间的影响，当电压为16、18、20、22、24 KV时，没食子酸迁移时间分别为13.576、12.180、9.473、8.995、7.653 min。考虑到运行电流的大小及稳定性问题，选择了20 mmol/L硼砂溶液，电压 20 KV，紫外检测波长为270 nm，作为电泳测定的条件。图1表示了叶下珠样品溶液分离谱图。 图1 叶下珠样品溶液电泳谱图 1-没食子酸 ( *收稿稿期：2007-07-25 ) ( 作者简介：刘海兴(1963-)，男，河北扶宁人，潍坊学院化学化工系副教授，博士。 ) 2.2.1 标准曲线 首先先制浓度分别为0.550、0.275、0. 138、0.068、0.034、0.017、0.008 mg/mL的没食子酸标准溶液。在上述电泳条件下运行各个标准溶液。每种溶液分别运行3次，取平均值。以谱图中峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。没食子酸的线性回归方程(峰面积：yuVos，浓度：xmg/mL)和线性范围如下：y=-7447. 94 + 581484. 93x(r=0.989)，0.008~0.550 mg/mL。 22.2 精密度试验 一种没食子酸标准溶液，在选择的电泳条件下运行5次，则迁移时间的RSD为3.2%，峰面积的 RSD为5.4%。 2.2.3 稳定性试验 取“2.3"项的样品溶液，放置1、4、7、10、13 h后进样测定，峰面积的RSD为6.2%。 2.2.4 样品含量的测定 在选定的电泳条件下，运行样品溶液。测得的叶下珠中没食子酸含量为5.42 mg/g (RSD=5.62%)(n=6)。此结果高于文献的报道。 225 回收率试验 通过6次测定，回收率在86%~122%之间变化，平均回收率为110.4%。 ( 参考文献： ) ( [1]邢俊波，曹 红，王朝红，等. H PLC法测定叶下珠中没食子酸的含量[J].中华中医药学刊，2007，25(1)：166-167. ) ( [2防方 岚，胡旭佳，张 华. RP-HPLC法测定叶下珠片中没食子酸的含量[J].华西药学杂志，2004，19(4)：307-308. ) ( [3]Liu H X， Y u AM， Liu F Q， et al Chira l separation of cefadroxil by cap illary electrochromatography[J]， J P hamaceutical and Biomedical Analysis， 2006，41(4)： 1 376-1 3 79. ) ( [4]Liu H X， S h i Y H， Wang D X， et al MECC d et e mm ination of oleanolic acid and ursoli c acid i some r s in ligus t rum lucidum ait [J ] . J Phamaceutical and B iomedicalAnalysis ， 2003 ， 32： 4 79-48 5 . ) ( [5]刘海兴，刘凤芹，于爱民，等.维生素C稳定性及其与牛血清白蛋白亲和作用的研究[J].分析科学学报，2007，23(1)： 82-84 ) ( [6]刘海兴.毛细管电泳法测定人血清中的头孢他啶[J].华西药学杂志，2007，22(6)：687-688 ) CZE for the Determ ination of Gallic Acid inthe Phyllan thus Urinara L IU Hai-xing (Weifang Un iversity， W eifang 261061， China) Abstract： The paper introduces CZE to detem ine the gallic acid in the phyllanthus urinaria In the condition of20 mmol/L of the NaB4O， buffer， the effective separation of components is obtained in the phyllanthus urinariaThe gallic acid content is 5. 42 mg/g (RSD=5.62%)(n =6). The average recovery of gallic acid is 110. 4%(n=6).This method is simple and rap id Keywords： capillary zone electrophoresis， phyllanthus urinaria， gallic acid —China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved http：//www.cnki.net