可非糖浆中盐酸异丙嗪与磷酸可待因检测方案

分析测试学报FENXICESHIXUEBAO (Joumal of Instrumental Analysis)第29卷第4期2010年4月Vo. 29 No. 4394~397 395第4期 李利军等：阳离子选择性耗尽进样-胶束电动色谱法对可非糖浆中盐酸异丙嗪与磷酸可待因的测定 阳离子选择性耗尽进样-胶束电动色谱法对可非糖浆中盐酸异丙嗪与磷酸可待因的测定 李利军，郝学超，李彦青，程昊 (广西工学院生物与化学工程系，广西杉柳州 545006) 摘要：在胶束电动色谱法的基础上，联用阳离子选择性耗尽进样技术，对盐酸异丙嗪和磷酸可待因同时测定的方法进行了研究。考察了 pH值、有机溶剂、SDS浓度、进样时间、进样电压等实验条件对分离效果的影响。最佳实验条件为：缓冲体系16%乙腈 +80 mmol/L SDS+20 mmol/L NaH，PO4 (pH 2.4)，分离电压为-18 kV， 测量波长214 nm， 萃取液 pH 2.4， 进样电压10kV， 进样时间100s.在优化实验条件下，两种物质在8min内出峰，峰面积 RSD不大于 4.6%。盐酸异丙嗪、磷酸可待因的线性范围分别为0.50~81.3、0.78~62.5ug/L，检出限分别为 0.16、0.12p g/L，相关系数分别为0.998 9、0.9988.将方法用于可非糖浆中盐酸异丙嗪与磷酸可待因的测定，回收率为96%~106%。 关键词：毛细管电泳；阳离子选择性耗尽进样；胶束电动色谱法；盐酸异丙嗪；磷酸可待因 中图分类号：0657.7； R917 文献标识码： A 文章编号：1004-4957(2010)04-0394-04 doi： 10.3969/j. issn. 1004-4957.2010.04.017 Detemm ination of Promethazine Hydrochloride and Codeine Phosphate in CompoundCodeine Phosphate Syrup by Sweep ing M icellar Electrokinetic Chromatographyin Combination with Cation-selective Exhaustive Injection LILi-jun， HAO Xue-chao， LIYan-qing， CHENG Hao (Deparment ofB iological and Chem ical Engineering， GuangxiUniversity of Techno logy， Liuzhou545006， China) Abstract A sweep ing m icellar electrokinetic chromatography(MEKC) in combination with cation-se-lective exhaustive injection (CSEI) method was developed for the detemm ination of promethazinehydrochloride and codeine phosphateThe expermentalfactors， iincludingpH， concentration of ace-tonitrile， the effectof SDS concentration， sample injection time and injection voltage were op tim izedThe optimum conditions were as the follow s：buffer system：16% acetonitrile +80 mmol/L SDS+20mm NaHPO4 (pH 2.4)， separationpot ntial -18 kV；detecting wavelength： 214 nm； eex-traction buffer pH 2. 4； sample injection voltage：10 kV：；iinjection time：：100 sUnder the optimum conditions.，two substances were successfully separated with in 8 m inutes with the RSD s of peakarea less than 4.6%. The calibration plots were linear in the range of 0.50 -81.3pg/L forpromethazine hydrochloride， and 0.78-62.5p g/L for codeine phosphate Their correlative coeffi-cients were 0. 998 9 and 0.998 8， respectively， and their lim it detections were 0.16p g/L and 0. 12ug/L， respectively The proposed CSEI-sweep ingMEKC method was successfully applied for thedetection of p omethazine hydrochloride and codeine phosphate in compound codeine phosphate syrupw ith recoveries of 96%-106%. Key words： cap illary electrophoresis；； cation-selective exhaustive injection；l，sweep ing m icellar elec-trokinetic chromatography， promethazine hydrochloride； codeine pho sphate 盐酸异丙嗪和磷酸可待因是可非糖浆中的有效成分，但磷酸可待因的滥用会造成药物依赖性，严重者可导致肾功能障碍。药物中盐酸异丙嗪和磷酸可待因含量的测定方法有高效液相色谱法2-4]、胶束电动色谱法15-7]、荧光分光光度法[8-9]、电化学发光法[10-111等。本文在胶束电动色谱的基础上，联用 ( 收稿日期：2009-11-24；修回日期：2010-02-20 ) ( 第一作者：李利军(1966-)，男，湖北黄梅人，教授，博士， Tel： 0772-2685028， E-mail： l ilijun0562@ sina. com ) 阳离子选择性耗尽进样，对可非糖浆中的盐酸异丙嗪和磷酸可待因进行测定。 阳离子选择性耗尽进样法2是在充满非胶束背景溶液的毛细管中，首先进一段不含胶束的高电导缓冲液区带，再进一小段水塞，然后在正向电压下电动进样，样品阳离子快速通过水塞并在水塞和高 电导缓冲液间的界面处聚集，形成窄的样品区带，然后在胶束缓冲溶液中施加负向电压分离。胶束进入毛细管并对样品离子进行扫集，实现样品的第二次富集。最后在此电压下进行胶束电动色谱分离。由于选择性耗尽进样法是样品堆积与扫集两种富集方法的结合，因此其富集效果大大增强，富集倍数高达1000倍以上113-15]。将本方法应用于可非糖浆中盐酸异丙嗪和磷酸可待因的分离测定，结果满意。 图1盐酸异丙嗪(左)与磷酸可待因(右)的分子结构图 Fig. 11NMolecular structures of p romethazine hydrochloride(left)and codeine phosphate (right) 1实验部分 1.1仪器与试剂 ACS 2000高效毛细管电泳(北京彩陆公司)，未涂层毛细管(50m x69.0 cm，有效长度35.0 cm，大连三杰科技发展公司)。 DL-60D超声波清洗器(上海之信公司)； Mettler toledo Delta 320酸度计(瑞士梅特勒托利多公司)。盐酸异丙嗪、磷酸可待因对照品(中国药品生物制品检定所)；可非糖浆沈阳第五制药厂)； NaH，PO4、Hg PO4、CH， OH(汕头西陇化工厂)；十二烷基磺酸钠(SDS， 汕头光华化工厂)。以上试剂均为分析纯，实验用水均为二次蒸馏水。 准确称取盐酸异丙嗪 5.2 mg山磷酸磷待因 4.0 mg， 用20% CH，OH分别配成质量浓度为 520 mg/L和400 mg/L的对照品储备液。电泳缓冲液用 100 mmol/L NaH， PO4、200 mmol/L SDS储备液配制， pH值用85%(体积分数)H上 Po 调节。所有溶液进毛细管前均用 0.45um滤纸过滤，超声脱气。 1.2实验方法 先在毛细管中充入萃取液 (20 mmol/L NaH，PO4+16%乙腈， pH 2.4)，再用正电源10 kV电动进样100 s， 切换电源后，采用负电源-18 kV电压进行分离。检测波长214 mm；实验室温度保持约25℃。 2结果与讨论 2.1电泳运行条件选择 为抑制电渗流，调整磷酸盐缓冲体系的 pH值为2.0~3.0。考察了不同 pH值、不同有机改性剂(甲醇、乙腈、异丙醇和乙醇)及不同分离电压对分离效果的影响。结果表明，当选用缓冲体系的 pH值为2.4，有机改性剂为16%乙腈，分离电压为-18kV时，两种化合物的峰形理想，出峰时间短，结果见图 2A、B。 图2pH(A)、乙腈体积分数(B)与 SDS浓度 (C)对峰面积的影响 Fig.2 Effect ofpH(A)， volume fraction of acetonitrile(B) and concentration of SDS(C) on peak area 1.promethazine hydrochloride， 2. codeine phosphate； background electrolyte： A. 60 mmol/L SDS+20 mmol/L NaH2PO4+10%acetonitrile， B. 60 mmol/L SDS+20 mmol/L NaH， PO4 (pH 2.4)，C. 20 mmol/L NaH，PO4 (pH 2.4)+16% acetonitrile 考察了 SDS浓度为 60~120mmol/L时两种化合物的分离效果。如图2C所示，随着 SDS浓度增加，峰增高，出峰时间缩短。这是由于 SDS增大了样品的容量因子。但过高的 SDS浓度会导致低导样品区带中形成的堆积区宽度增大，引起峰增宽。实验结果表明当SDS浓度为 120mmol/L时，出现明显的峰增宽峰高降低的现象。因此为保证稳定性，实验选择SDS浓度为 80mmol/L。 2.2胶束扫集进样时间的确定 考察了进样时间为40~80 s(H=18.0 cm)时样品的峰面积，结果表明峰高随进样时间的延长呈增大趋势。但由于进样时间大于60s时，基线稳定性明显变差，易出现杂峰，柱效下降，故选择进样时间为60 s 2.3 阳离子选择性耗尽进样 2.3.1萃取液的选择以20 mmol/L NaH， PO4+16%乙腈溶液为萃取液，考察了用85%磷酸调节萃取液 pH值为2.0、2.2、2.4.、4、2.6、2.8时盐酸异丙嗪和磷酸可待因的出峰情况。如图3A所示，萃取液pH为2.4时出峰最高，效果最好，因此选用萃取液 pH为 2.4。 2.3.2进样电压、进水时间及进样时间的选择考察了进进电压为 7、8、9、 10、111 kV时的进样效率。如图3B所示，随着电压增大，进样量增大，但11kV后，电压过大产生了大量的焦耳热，进样效率变低，且过大的电压会损坏毛细管柱，因而选用进样电压为 10 kV。 考察了进水时间为0、50、100、150s时的出峰情况，结果显示进水时间对峰面积无太大影响，但电流会因进水而降低，出峰时间延长，因而选择进样前不引进水柱。 在 10 kV的进样电压下，对进样时间分别为70、80、90、100、110s时两种化合物的出峰情况进行了考察，结果见图3C。峰面积随着进样时间的延长而增大，但峰宽增大、柱效降低，当时间超过110 s时，峰严重展宽，甚至分峰，因而选择进样时间为100s. 图3萃取液 pH值(A)、进样电压(B)与进样时间(C)对峰面积的影响 Fig.3 Effect of pH of extraction buffer(A)， injection voltage (B) and injection time(C) on peak area1.promethazine hydrochloride， 2. codeine phosphate； background electrolyte：80 mmol/L SDS+20 mmol/L NaH，PO4 (pH 2.4) +16% acetonitrile 2.4 方法的性能 胶束电动色谱联用选择性耗尽进样后，两物质的检测信号均显著增强(强图4)。在优化条件下，阳离子选择性耗尽进样-胶束电动色谱法的性能参数见表1。经计算，其峰高比胶束扫集增大约1000倍，检出限降低约800倍，且方法重复性较好，因而可用本法测定可非糖浆中的盐酸异丙嗪和磷酸可待因，检出限(S/N=3)三别为0.16、0.12u g/L。 表11胶束电动色谱法和阳离子选择性耗尽进样-胶束电动色谱法比较 Table 1 L inear ranges， regression equations， and LODs of promethazine hydrochlorideand codeine phosphate by sweep EKC and CSEI- sweep MEKC Analyte SweepMEKC CSEI- sweepMEKC L inear range Regression LOD Linear range Regression LOD p/(mgL) equation* p/(mg. L) p/(gL) equation p/(ugL) Promethazine 1.6~26 y=29.568x+50.186 0.20 0.9994 0.50~81.3 y=27278x-240.99 0.16 0.9989 hydiochloride Codeine phosphate 1.3~20 v=60.948x+29.363 0.16 0.99960.78~62.5 y=45 837x-760.31 0.12 0.9988 图4标准品与可非糖浆样品的电泳图 Fig.4 Electropherogram s of standard and samp le of compound codeine pho sphate syrup sample A. standard by sweep MEKC， B. standard by CSEI- sweep MEKC， C. sample by CSEI- sweep MEKC； 1.promethazine hydrochloride，2. codeine phosphate； background electrolyte： 80 mmol/L SDS+20 mmol/LNaH，PO4(pH=2.4) +16% acetonitrile 2.5实际样品分析 将可非糖浆稀释2000倍，在优化实验条件下平行测定5次，电泳图谱如图4C所示。经计算，样品中盐酸异丙嗪、磷酸可待因的质量浓度分别为1.23、1.97 g/L， RSD分别为 3.3%、2.1%，与药品的标示值1.40、2.00 g/L比较吻合。样品回收率实验结果见表2。结果表明，本法可用于可非糖浆中盐酸异丙嗪和磷酸可待因的含量测定。 表2样品中盐酸异丙嗪、磷酸可待因的回收率 Table 2 Recoveries of promethazine hydiochloride and codeine phosphate in real sample Analyte Addedp/(g L) Foundp/(ug. L-1) Recovery R/% Average recovery R /% RSDs./% Promethazine hydrochloride 20.3， 30.4，40.6 21.1，29.3，38.9 104， 96，96 99 4.6 Codeine phosphate 15.6.23.4.31.2 15.9.24.7. 30.8 102.106.99 102 3.4 ( 参考文献： ) ( 吴小芳，林芝，李英华.滥饮联邦止咳露致相关性肾病的 21 护理[J].现代临床护理，2008，7(10)：66-67. ) ( 贺帅，张忠义，张守尧.鼻可灵喷雾剂中地塞米松磷酸钠、氧氟沙星及盐酸麻黄碱含量的微乳液相色谱法测定 [J] . 分析测试学报，2008，27(6)：654-656. ) ( T3 陈建，利云，张家明，等. 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