灵芝中活性成分检测方案(毛细管电泳仪)

第28卷增刊2009年11月分析试验室Chinese Journal of Analvsis LaboratorvVol.28. Suppl.2009-11 灵芝活性成分的毛细管电泳快速分离检测 丁娜1.2，黄杉生*1，钟建江2，樊柳荫²，张 薇，曹成喜**2 (1.上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234； 2.上海交通大学生命科学技术学院，上海200240) 摘 要：建立了一种毛细管区带电泳的分离模式同时分离检测4种灵芝酸(灵芝酸T、灵芝酸Mk、灵芝酸Me、灵芝酸S)的新方法。为获得最合适的分离度和检测时间，对缓冲液pH及浓度、添加剂种类及浓度、操作电压等条件进行逐步优化。在最优实验条件下，以甘草次酸(GTA)为内标，测得4种样品的线性范围在0.5~100 ug/mL之间(r≥0.9979)，最低检测限(LOD)在0.3000~0.5505ug/mL之间。该方法已用于灵芝酸样品的检测。 关键词：毛细管区带电泳；灵芝酸；分离；检测 灵芝(Ganoderma lucidum Fr.. Karst.)为灵芝科灵芝属药用真菌，是中国中医药宝库中的上等珍品，素有“仙草”、“神芝”之誉，具有延年益寿、滋补强身、补气安神、防病治病的神奇功效。灵芝酸是从灵芝中分离出来的一种重要的有效活性成分，成为近年来的研究热点，它具有抗过敏、解毒保肝、降胆固醇、抗艾滋病毒等广泛的药理作用。目前，已有多种方法对灵芝酸进行分离检测，如 TLCRP-HPLC3]、紫外比色法等，以上方法虽为常用检测方法但操作耗时、仪器成本高、试剂用量大且污染严重。近年来，高效毛细管电泳技术以其快速、高效、样品用量少、低成本等独特的优势得到广泛的应用，故本试验采用简单的毛细管区带电泳的方式对4种灵芝酸进行分离检测。 实验部分 1.1 仪器与试剂 ACS 2000高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器公司)，配有 HW-2000色谱工作站及紫外检测器(190~740nm)；毛细管采用有效长度46 cm 内径75 pm 的未涂层熔融石英毛细管。4种灵芝酸的 标品由上海交通大学生命科学技术学院的钟建江教授实验室提供；甘草次酸(分析纯，阿拉丁试剂有限公司，上海)； H，BO，、硼酸钠(优级纯，中国医药集团上海试剂公司，上海)。 2结果讨论2最优分离检测条件 经过逐步优化，确定了以下最优分离条件：25mmol/L H，BO，-硼砂缓冲液(pH9.0)为运行缓冲液，操作电压27.5kV， 检测波长245 nm， 10 s 13 mbar压力上样。毛细管温度恒定在25℃。 2.2线性范围和检测限 在最优分离条件下，测得4种组分的线性范围在0.5~100 pg/mL 之间，相关系数(r)在0.9979~0.9995之间，最低检测限(S/N=3)在0.3000~0.5505 ug/mL之间。 2.3 实际样品检测 含有灵芝酸的灵芝干细胞粉经乙醇提取， 排除了其他杂质的干扰，取得了较好的提取回收率。利用该方法成功检测出了实际样品中的灵芝酸成分，电泳图见图1所示。 ( *基金项目： NSFC (20675051、20805031)和科技部973重大基础研究计划(2009CB118906)及科技部863支撑计划(2007BAK26B06、2007AA10Z441)项目资助 ) ( E-mail： cxcao@sjtu.edu. cn ) 图1 空白样品和实际样品的电泳图 (a)空白样品；(b)实际样品 1-GA-T；2- GA-Mk； 3-GA-Me； 4-GA-S； 5-GTA 3 结论 本文采用简单的毛细管区带电泳的模式，对电泳条件进行逐步优化，实现了同时对4种灵芝酸进行分离与定量检测，建立了一种快速、简单、真实可靠的检测方法，对缩短检测时间，检测实际灵芝酸样品具有重要的现实意义。 ( 参考文献 ) ( 李抒诗，于丽薇.中国医药指南，2009，7(4)：108 ) ( 马礼金，姚汝华.中国食用菌，1998，17(1)：3 ) ( 王晓明，关树宏，毕开顺等.沈阳药科大学学报， 2007，24(7)：；407 ) ( [4] 黄书铭，杨新林， 黄 健等.北京理工大学学报， 2004， 24(6)：555 ) Simultaneously separation and determination of ganoderic acids by capillary zone electrophoresis DING Na2， HUANG Shan-sheng*1， ZHONG Jian-jiang’， FAN Liu-yin’， ZHANG Wei’ and CAO Cheng-xi(1. Life and Environmental Science College， Shanghai Normal University， Shanghai 200234； 2. School of Life Scienceand Biotechnology， Shanghai Jiao Tong University， Shanghai 200240) Abstract： A capillary zone electrophoresis method was developed for the simultaneous analysis of ganoderic acids (GA-T， GA-Mk， GA-Me， GA-S). To obtain the most suitable resolution and migration time， CZE conditions such as pHand concentration of buffer， the species and concentration of organic additive and applied voltage were optimized pro-gressively. Under the optimum conditions， glycyrhetinic acid (GTA) used as intemal standard， the linear response ofthe analytes concentration ranged from 0.5 to 100 pg/mL(r≥0.9979)， and the limit of detection were in the range of0.3000~0.5505 pg/mL. This method has been used to detect ganoderic acids in real sample. Keywords： Capillary zone electrophoresis； Ganoderic acids； Separation； Determination China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net