复方芦丁片中芦丁和维生素C检测方案(毛细管电泳仪)

分析试验室Chinese Journal of Analysis LaboratoryVol. 20.No.52001-9第20卷第5期2001年9月 第20卷第5期2001年9月分析试验室Chinese Journal of Analysis LaboratoryVol.20.No.52001一9 毛细管电泳法测定复方芦丁片中的芦丁和维生素C 李向军，熊 辉，袁倬斌* (中国科技大学研究生院化学部，北京100039) 摘 要：用毛细管电泳紫外检测法同时测定了复方芦丁片中芦丁和抗坏血酸的含量，研究了各种条件的影响，得到了优化的实验条件，在30 mmol/L NazBO-H，BO(pH 7.50)缓冲溶液中，芦丁和维生素C在 13 min 内得到了良好的分离，芦丁和维生素C分别在0.5~0.005 mg 和5.0~0.05 mg 浓度范围内与电泳峰高呈现良好线性关系，检测下限分别为 0.002 mg 和0.01mg，应用于实际样品的测定。 关键词：毛细管电泳；芦丁；维生素C 复方芦丁片属于维生素类药，主要用于高血压病的辅助治疗，其主要成分为芦丁和维生素C，芦丁是维生素P的一种，具有维持血管抵抗力、降低其通透性、减少脆性及抗炎、抗病毒等作用；维生素C 为人体必需的营养成分，临床用于坏血病的预防及治疗，可增加人体的抵抗力1，芦丁L2，3」和维CL4，5]的测定方法有很多，其中液相色谱法L6较多被应用，陈刚等7用毛细管电泳电化学柱端检测法同时测定了复方芦丁片中的芦丁和维C，但电化学检测法存在电极制备比较困难，操作繁琐的缺点，本研究采用紫外检测法同时测定了复方芦丁片中的芦丁和维C。 1 实验部分 1.1 仪器和试剂 ACS-2000 毛细管电泳仪(中国科学院研究生院应用化学研究所)；8823-B紫外检测器(北京新技术研究所)；检测波长254nm，未涂层弹性石英毛细管柱(50um i. d.总长50cm，有效长度40cm，河北永年光导纤维维)；pHS-3型酸度计(上海雷磁仪器厂)。 芦丁(baicalin)对照品(中国药品生物制品检定所)；复方芦丁片(北京市燕京制药厂，批号 981104)；其它试剂均为分析纯，水为二次重蒸水。 1.2 标准溶液的制备 准确称取复方芦丁和维生素C，分别用适量乙醇及水溶液，使浓度分别为1.0mg/mL 和 10.0mg/mL，以 0. 45 um 滤膜过滤后备用。 1.3 样品溶液的制备 将多片复方芦丁片研成细粉，准确称取 0.5 g的粉末于50mL 容量瓶中，加 30 mmol/L 硼砂-乙醇(体积比1：1)混合溶液20 mL，于50℃水浴中预热15 min，超声助溶 2 min 后定容，经普通滤纸过滤，即得复方芦丁片样品溶液，以 0.45um滤膜过滤后备用。 1.4 实验条件的选择 以 30 mmol/L 硼砂缓冲溶液(硼酸调至pH7.50)为电泳介质，未涂层弹性石英毛细管(50 umi.d，总长50cm，用于分离的有效长度为40cm)。所有溶液使用前均用0.45 um 滤膜过滤，每次实验后依次以 0.01 mol/L NaOH 溶液、蒸馏水及电泳缓冲溶液液洗毛细管10 min，然后进行分离测定，实验过程中采用电动进样，采样时间5s，采样电压10kV，分离电压10kV，检测波长254 nm，测定峰电流的高度，所有实验均在室温下进行。 ( 收稿日期：2001-01- 1 6；修订日期：2001-0 3 -29 ) ( 基金项目：国家“九五”重点科技攻关项目(96-A23-01-06)和国家自然科学基金(29875027)资助课题 ) ( 作者简介：李向军(1968一)，男，博士研究生 ) 2 结果与讨论 2.1 缓冲液pH 值的影响 电泳液的pH值对分离效果有着很大的影响。在实验过程中发发，随着缓冲溶液 pH 值的增大，芦丁及维C的迁移时间均有所减小，分离度变差，故选择pH 7.50， 2.2 分离电压及缓冲溶液浓度的影响 上述实验条件下分别考察了分离电压(6~20kV)及缓冲溶液浓度(10~100mmol/L)的影响，结果发现，各组分的迁移率随分离电压的降低而减小，迁移时间增大，分离度提高旦谱带展宽且峰高降低，随着高压增高，基线噪音也增大，分离度变差，随缓冲溶液浓度的增加，迁移时间增大，但电流增大会导致毛细管发热，降低分离度，故实验过程 中选用10kV作为分离电压，30 mmol/L 的NaB，O.-HBO，(pH 7.50)为缓冲溶液，在此条件下，芦丁和维生素C 在 13 min 内得到了良好的分离。 2.3 进样时间的选择 分离电压10kV，选择进样时间为2，4，6，8，10和12s，测定芦丁与维C的峰高与进样时间的关系，发现8s 后峰高增加不明显，但导致峰展宽和拖尾，故选择进样时间为5 s。 2.4 工作曲线及检测限 在上述实验条件下，对一系列芦丁和维C的标准混合样品进行分析测定，测定其峰高与浓度的关系，结果如表1所示， 表1 芦丁和维C的回归方程及检测限 Tab. 1 Regression equations and detection limits for rutin and vitamin C 样品 回归方程 相关 线性范围 检测限" y=a-bx* 系数 (mg/mL) (mg/mL) 芦丁 y=21.52x+0.21 0.9995 0.5~~0.005 0.002 维生素C y=5.475x-0.49 0.9990 5.0~0.05 0.01 *y和r分别表示峰高(nA)和被测物浓度(mg/mL)；**检测限按3倍噪声计算 2.5 精密度实验 浓度为 0.5 mg/mL 的芦丁和维C对照品溶液各平行进样6次，测得芦丁峰高的 RSD 为1.9%，迁移时间的 RSD 为 2.8%；维C峰高的RSD 为 2.8%，迁移时间的 RSD 为 2.6%。 2.6 样品测定及回收率 精密吸取6份品溶液，每份2.0 mL，以缓冲溶液定容于10mL容量瓶中后，依上述实验条件分别测定芦丁和维C的含量见图1：精密吸取6份样品溶液，每份2.0mL，分别加入芦丁和维C对照品0.2 mg和0.5mg，以缓冲溶液定容于10 mL容量瓶中后，依上述实验条件进行加标回收实验，所测结果列于表2. 表2 样品测定结果及回收率(n=6) Tab.2 Delermination results of sample 样品 标示值 测定值 回收率 (mg/片) (mg/片) (%) 芦丁 20 20. 61 99.61 维C 50 51.87 100.6 图1 样品的毛细管电泳图 Fig.1 Electrophograms of sample solution1一乙醇；2一芦丁：3一维C ( 参考文献 ) ( 1] ] 国家医药管理局中草药情报中心站编.植物药有效成分手册(第一版).北京：人民卫生出版社，1986 ) ( 杨运发.分析化学，1996，24(11)：1277 ) ( 聂 峰，李丽青，封满良，吕九如分析试验室，1999. 18(1)：54 ) ( [4 ] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(二部).北京：人民卫生出版社，1990 ) ( [57 Li Guanbin，Fan Chunsheng，Xin Cunzhang. Sepu， 1997，15(1)：65 ) ( 6 张国峰，缪 刚.色谱，1996，14(3)：227 ) ( [7 ] 陈 刚，丁祥欢，叶建农.高等学校化学学报，2000， 21(9)：1364 ) Separation and determination of rutin and ( Vitamin C in r utin c ompound tablets by capillary electrophores i s L I Xiang-jun，XIONG Hui andYUAN Zhuo-bin(Department o f Chemistry，Grad- uate School，University of Science and Technologyof China， Chinese Academy of Science，Beijing)， Fenxi Shiyanshi，200 1 ，20(5)：41~43 ) ( Abstract： The separation and determination ofrutin and vitamin C by high performance capillary ) electrophoresis was reported. The effect of sepa-ration voltage， concentration and pH of the run-ning buffer on the determination were investigatedand discussed. Rutin and vitamin C could be wellseparated in a Na2BO-HBO buffer (pH 7.50)within 13 min. A good linearity was obtained inthe concentration range of 0.5~0.005 mg/mL forrutin， 0.5~0.05 mg/mL for vitamin C，respec-tively. The detection limits are 0.002 mg/mL and0.01 mg/mL for rutin and vitamin C， respective-ly. The method was successfully used in analysisof pharmaceutical samples with satisfactory re-sults. ( Keywords：Capillary electrophoresis； R utin； V i ta- min C ) 《中国无机分析化学文摘》2002年征订启事 《中国无机分析化学文摘》经国家科委批准，1984年创刊，公开发行(刊号ISSN1003-5249/CN11-1835/O6)。本刊以文摘、简介及题录形式报道国内公开发行的有关无机分析化学的期刊300余种及各种会议论文集、新标准、新书目等，年收录文献3000篇左右。栏目分为：一般问题、重量法与滴定法、光度法、电化学分析、光谱分析、色谱分析、物相分析、气体分析、活化分析、质谱分析、分离方法、贵金属分析专栏等十二大类。为便于读者检索，每期附有按被测元素及阴离子编排的索引。读者对象：冶金、有色金属、地质、机械、半导体材料、宇航、核技术、化工、建材、环保、食品工业、药物、医学、商品检检等部门分析工作者及有关院校师生。 在每次全国科技文献检索期刊评比中本刊均获奖。本刊是了解国内无机分析动态的窗口；是检索国内文献的理论工具；是普及推广新技术的阵地；是分析工作者的得力助手。 本刊2002年出版四期(季刊)及2002年年度主题与作者索引一本，激光照排，胶版印刷，大16开，定价12.00元，全年订费为60.00元(包括邮费在内)。2002年仍由编辑部发行。欲订阅者请向编辑部索取订单并汇款至：北京西直门外文兴街1号，北京矿冶研究总院《中国无机分析化学文摘》编辑部。邮政编码：100044；电话：(010)68333366-3415。 — —