肉苁蓉中红景天苷检测方案(毛细管电泳仪)

责任编辑 罗芸 责任校对 卢瑶安徽农业科学， Joumal of Anhui Agri Sci 2009，37(19)：8979-8980 8980安徽农业科学2009年 HPCE法测定肉苁蓉中红景天苷的含量 李明国，魏培海^，李炳奇》，魏英勤 (1.新疆石河子大学生命科学院，新疆石河子832003；2.山东教育学院化学系，山东济南 250013；3.新疆石河子大学化学化工学院，新疆石河子832003；4.山东轻工业学院化学工程学院，山东济南250353) 摘要 [目的]建立采用高效毛细管电泳色谱法测定肉苁蓉中有效成分红景天苷含量的方法。[方法]采用毛细管区带电泳(CZE)：运行缓冲液为 30mmol/L酸酸-硼砂缓冲液(pH=9.00)；工作电压8kV；柱温25℃；检测波长278mm。[结果]红景天沃含量在0.007~0.140 mg/ml的浓度范围内线性关系良好(r=0.999 8)，加样回收率为100.1%，RSD为1.4%。[结论]高效毛细管电泳法可用于测定肉苁蓉中红景天苷的含量，该方法简便、快速、准确重复性好。 关键词 HPCE；肉苁蓉；红景天苷 中图分类号 R282.71 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2009)19-08979-02 Determ ina tion of Salidroside in Herba Cistanches by HPCE LIM ing guo et al (School of L ife Science， ShiheziUniversity， Shihezi， Xinjiang 832003) Abstract[Objective] The research aied to establish a HPCE method for detemm ining salidroside in Herba Cistanches [Method] U sing theCZE， salidroside content was dete im ined in Herba Cistanches and the experimental conditions were as follows： 30 mmol/L boron granule buffer(pH=9.0)， working voltage of 8 kV， temperature of25℃ and detective wavelength of 278 nm. [Result] The linear range of salidrosidewas 0. 007 - 0. 140 mg/ml (r=0.999 8) and the average recovery was 100.1% (RSD=1.4%). [Conclusion] The established method issimple， quick and accurate and suitable for detemining salidroside in Herba Cistanches Key words HPCE； Herba Cistanches； Salidro side 肉苁蓉 (Herba Cistanche)为列当科(Oroban-chaceae)植物肉苁蓉(C istanche deserticola Y. Cia)的带鳞片的干燥肉质茎，又名苁蓉、大芸、金笋、地精。始载于《神农本草经》，列为上品，其后古典本草经疏》体草汇言》《月华子本草》等都有记载。肉苁蓉味甘、咸，性温，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能，，在在我国已有2000多年的使用历史，现代药理学表明，肉苁蓉除作为传统的补肾壮阳中药外，更兼具有抗衰老、增强记忆、提高免疫力等多种功能。2005年版《中国药典》采用高效液相色谱法对肉从蓉中松果菊苷、毛蕊花苷进行含量测定定，日本唐沪心户等从 C salsa 中分得新化合物：肉苁蓉苷 H(Cistanoside H)、肉苁蓉苷I(CistanosideI、Decaffeoylacteoside肉苁蓉苷 G(Cistanoside G)红景天(Salidroside)4。尚未见到国内外对肉苁蓉中红景天苷含量测定的报道。高效毛细管电泳(HPCE)技术具有样品用量少、时间短、灵敏度高、分离效果明显的特点，在苷类物质的检测方面具有独特的优势，笔者采用高效毛细管电泳测定了肉苁蓉中红景天苷的含量。 1 材料与方法 1.11仪器、试药与药材 HPCE高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司)；紫外检测器；弹性石英毛细管柱(50um X60 cm，有效长度48 cm，河北永年光导纤维厂)。HW-2000色谱工作站，电动进样器；ALC110.4电子天平(北京赛多利斯仪器)； SK3200LH超声清洗器(上海科导超声仪器)；島津紫外可见分光光度计-1700；Dela320型pH计(梅特勒-托利多上海有限公司)。红景天苷对照品(110770-200409)由中国药品生物制品检定所提供；硼砂、硼酸、氢氧化钠、盐酸均为分析纯；水为二次蒸馏水。肉苁蓉药材由新疆石河子开发区国浩饮片厂提供，刘怀中中药药剂师鉴定。 ( 作者简介 李明国(1974-)，男，山东聊城人，在读硕士，中学一级教 师，从事植物化学研究。 *通讯作者，教授，Email： li b - i ngqishzu@tom. com. ) 1.2 溶液的制备 1.211标准品溶液的制备。取红景天苷1.400 mg，用水定容10ml，制成1ml含0.14mg的标准品溶液。 1.222样品溶液。精密称取过80目筛的肉苁蓉药材粉末1.2g，置25ml棕色量瓶中，加入60%甲醇 20ml，浸泡0.5h，超声处理40min，取出，放冷，用60%甲醇稀释至刻度，静置，取上清液用0.45um 微孔滤膜过滤，滤液置棕色样品瓶保存，作为测定红景天苷的供试品溶液。 1.3毛细管的处理 每次运行前，所用溶液均用溶剂微孔过滤膜(0.45um)过滤，并经超声波脱气 30min。毛细管活化过程如下：①0.10mol/LNaOH溶液冲洗 5 min； ②二次蒸馏水冲洗 5min；③ 0. 10 mol/L HCl溶液冲洗 5 min。每次运行间冲洗程序：①二次蒸馏水冲洗 3 min；②缓冲溶液冲洗5min。 为保证重现性，缓冲溶液每运行3次后更换。 1.4 色谱条件 采用 50 {m X60 cm的空心石英毛细管柱，有效长度48cm；柱温25℃；运行缓冲液为30 mmol/L硼砂-硼酸溶液(pH 9. 00，25℃)；电动进样5s检测波长334nm。标准品及样品溶液高效毛细管电泳色谱图见图1。 2，结果与分析 2 1 线性关系考察 精密称取红景天苷对照品适量，用双蒸水溶解制成1ml含 0.14mg的红景天苷溶液。分别精密吸取储备液1、2、4、6、8ml于 10ml量瓶中，加双蒸水至刻度，摇匀，制成系列的对照品溶液，进样测定，测量峰面积值。以苷对照品峰面积对其质量浓度(mg/ml)作图，其线性回归方程为Y=-117.1+4 334e+0 04x(r=Q 999 8)，线性关系良好，线性范围0.007~0.140 mg/ml. 22精密度试验 取0 020 36 mg/ml红景天对对照品溶液，连续进样5次考察仪器精密度，记录峰面积。结果表明：峰面积 RSD=1.1%。 23 重现性试验 取肉苁蓉样品5份，分别精密称定，按“1.22"项中方法制备供试品溶液并测定，红景天苷含量的平均值为0.105 mg/ml，RSD =2 8%。 图11HPCE图谱 2 4 加样回收试验 取已知含量的肉苁蓉样品(红景天苷含量0.103mg/g)5份，每份0.6g，分别精密加入红景天苷对照品溶液，按“1.22"项中方法制备供试品溶液并测定，计算回收率，结果见表 1. 表1加样回收结果(n=5) Table 1 Addition recovery results of salidroside in Herba C istanche 样品含量/mg 标准品加入量/mg测得量/mg 回收率/% Sample Addition of standard Measured Recovery content substance amount rate 0.0599 0.0297 0.089 8 99.7 0.0597 0.0297 0.0981 98.9 0.0556 0.029 7 0.0858 100.2 0.0587 0.029 7 0.0903 1025 0.0586 0.0297 0. 0876 991 注：平均回收率为100.1%，RSD=1. 4%。 Note： The average recovery rate was 100. 1% and RSD =1. 4%. 2 55样品测定 取供试药材 1.2 g，按上述方法制备供试品溶液并进行测定，5批肉苁蓉中红景天普的含量分别为0.112%、0103%、0120%、0119%、0106%，平均含量 0.112%，RSD 为1.46%。 3 讨论 3.1 测量波长的选择 红景天苷对照品溶液的紫外吸收光谱显示在278mm处有最大吸收，结合文献资料，该试验选用278 nm为检测波长。 (上接第8978页) 夏有性生殖能力较低与其佛焰苞结构特征有关。半夏属于雌雄同花植物，其管部内部在雌雄花序之间有一海绵状突起，正好将雌花和雄花隔开。当雌、雄花成熟时，虽然突起内出现纵向小孔，但依靠该小孔成熟花粉并不能及时顺利地散落到柱头上面，或仅有少量花粉散落到柱头上面。笔者曾经在半夏盛花期，依靠外力如用手轻轻弹动雄花部位，使成熟花粉大量散落到柱头上面，结果大大提高了结实率。可见，借助一定的外力以弥补本身结构上的缺陷，有助于提高半夏的结实率。另外，佛焰苞不具有鲜艳的色彩，主要为绿色或仅在檐部边缘呈现紫色，也不具有特别的气味，这些表明半 3.2 分离电压的选择 试验考察了电压为8~25kV的效果，发现电压低时，基线稳定，但样品的分析时间长，峰形宽；随着电压的增加，样品的分析时间缩短，峰形窄，分离效果好，但基线的稳定性略有下降，基线噪音增大。为保证较短的分离时间和较好基线，该试验选用8kV为分离电压。 3.33缓冲溶液 pH值的选择 缓冲溶液的 pH值能改变溶质的表观电荷数，从而影响各组分在缓冲液中的迁移行为。试验用 30 mmol砂-硼酸作缓冲溶液，考察了 pH值分别为8.0、8.5、9.0、9.5、10.0对红景天苷分离的影响，结果表明，随着 pH值的减小，待测物的时间增长，分离度提高，色谱图中各峰均出现了峰分裂的情况。当 pH值为9.0时峰分裂及分离度达到了最佳条件，故选择pH值9.0的缓冲溶液。 3.4 提取方法的选择 试验中先后采取了水、75%乙醇对样品进行了超声提取试验。结果表明，样品采用水超声提取基本完全，且与杂质峰分离度较好。 ( 参考文献 ) ( [1]国家药典委员会.中国药典[S].北京：化学工业出版社，2005. ) ( [2]蔡鸿，鲍忠，姜勇，等.不同产地管花肉苁蓉中有效成分的定量分析 [J].中草药，2007，38(3)：452 ) ( [3]张炳，李鑫，热娜·卡斯木，等. 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