复方氨基酸注射液中18种氨基酸含量检测方案(氨基酸分析仪)

SSL-CA22-215Excellence in Science Excellence in ScienceLC-308 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 使用氨基酸分析仪测定复方氨基酸注射液中18种氨基酸含量 LC-308 摘要：本文参考2020年版《中国药典》二部——复方氨基酸注射液的相关条件和要求，采用岛津氨基酸分析仪建立了氨基酸注射液中18种氨基酸含量测定方法。实验结果显示：对照品溶液重复进样6次，18种氨基酸色谱峰保留时间和峰面积的 RSD 在 0.01%-0.14%和0.24%-2.54%之间，仪器精密度良好；以外标法定量，在10-2000 umol/L范围内，18种氨基酸线性相关系数均大于0.999，准确度在82.7-107.0%之间；对氨基酸注射液样品进行加加回收实验，回收率在96.2-106.4%之间。本方法准确度高，重复性好，适合氨基酸注射液中18种氨基酸含量的快速测定。 关键词：氨基酸分析柱后衍生含量测定 实验部分 1.1仪器 系统控制器：CBM-20A 自动进样器： SIL-16 柱温箱： CTO-16L 输液泵： LC-16 脱气机： D G U - 2 0 A 5 R 柱后衍生器： CRB-40 检测器： SPD-16 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.109 1.2分析条件 色谱柱： Shim-pack Amino-Na (100 mm×6 mml.D.，5 um) 流动相：A：柠檬酸三钠-高氯酸-辛酸-乙醇-水 B：柠檬酸三钠-硼酸-辛酸-氢氧化钠-水 C：氢氧化钠溶液 流速：0.6 mL/min柱温：60℃进样体积：20uL洗脱方式：梯度洗脱衍生温度：130℃衍生试剂：茚三酮溶液 衍生液流速：0.2mL/min 表1 梯度洗脱程序 Time Module command Value 9 泵 B.Conc 0 13 泵 B.Conc 7 17.2 泵 B.Conc 8 17.21 泵 B.Conc 11 20.8 泵 B.Conc 11 20.81 泵 B.Conc 50 射液中18种氨基酸含量测定方法。该系统稳定性好，重复性高，适合氨基酸注射液中18种氨基酸含量的快速测定，供相关检测人员参考。 22 泵 B.Conc 58 22.01 泵 B.Conc 100 28.8 泵 SV(PumpA) B-A-A 29.3 泵 B.Conc 100 29.31 泵 B.Conc 0 33 泵 SV(Pump A) A-A-A 35 泵 T.Flow 0.6 36.5 泵 T.Flow 0.7 43.3 泵 T.Flow 0.7 44 泵 T.Flow 0.6 45 控制器 Stop 样品前处理 对照品溶液的制备：取18种氨基酸对照品适量，用水稀释成10 umol/L、20 umol/L、50 umol/L、100 umol/L、200 umol/L、500 umol/L、1000 umol/L、2000 umol/L 不同浓度的校准曲线溶液。 供试品溶液的制备：取氨基酸注射液样品适量，过滤，取滤液稀释后待分析，记为 UNK。 结果与讨论 3.1对照品及溶剂空白色谱图 按照1.2中分析条件对2中对照品溶液进行测定，色谱图如图1所示。 图1对照品溶液((100umol/L)及溶剂空白色谱图 3.2线性 将对照品溶液按照1.2分析条件进行测定，以18种氨基酸的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归分析，18种氨基酸的线性范围为 10-2000 umol/L，相关系数均大于0.999，准确度在82.7-107.0%之间，线性良好，线性方程等相关参数见表2。 表2 18种氨基酸校准曲线参数 序号 测定化合物 线性范围(umol/L) 校准曲线 准确度(%) 相关系数r 1 Asp 10-2000 Y=17022.1X+27298.1 87.8-105.2 0.9995 2 Thr 10-2000 Y=19153.9X+31996.3 88.3-105.4 0.9995 3 Ser 10-2000 Y=18184.9X+33962.6 85.0-106.7 0.9992 4 Glu 10-2000 Y=19997.0X+20433.0 92.9-105.0 0.9997 5 Pro 10-2000 Y=5031.31X+42213.1 87.1-102.5 0.9997 6 Gly 10-2000 Y=24628.9X+44248.9 82.7-103.3 0.9993 7 Ala 10-2000 Y=16043.1X+25908.5 86.5-103.7 0.9992 8 Cys 10-2000 Y=23766.0X+38875.5 85.0-106.7 0.9990 9 Val 10-2000 Y=16440.7X+35558.1 84.2-106.9 0.9990 10 Met 10-2000 Y=22136.5X+34638.5 87.8-106.6 0.9992 11 lle 10-2000 Y=17785.5X+12395.3 96.1-103.0 0.9997 12 Leu 10-2000 Y=21804.1X+41760.9 87.3-105.8 0.9993 13 lyr 10-2000 Y=22425.7X+31389.1 88.1-105.2 0.9995 14 Phe 10-2000 Y=21239.9X+34374.1 85.0-107.0 0.9991 15 His 10-2000 Y=19402.3X+7352.83 93.0-104.7 0.9995 16 Lys 10-2000 Y=15189.2X+1193.42 97.6-104.0 0.9996 17 Irp 10-2000 Y=12696.5X+28716.8 96.9-102.5 0.9999 18 Arg 10-2000 Y=9238.64X+6377.29 94.5-106.2 0.9996 3.3精密度试验 按照1.2分析条件，分别取10 umol/L、100 umol/L对照品溶液上机测试，并计算各化合物保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)，以评价系统的检测结果的重复性，表3结果显示，目标物保留时间和峰面积的RSD 分别在 0.01%-0.14%和0.24%-2.54%之间。精密度实验结果表明，氨基酸分析系统具有良好的精密度。 表3精密度试验结果(n=6) 序号 待测化合物 RSD% (10 umol/L) RSD%(100 umol/L) 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 Asp 0.14 2.54 0.06 0.40 Thr 0.06 1.83 0.04 0.37 3 Ser 0.05 2.51 0.03 0.55 4 Glu 0.07 1.98 0.03 1.59 5 Pro 0.12 2.29 0.03 1.57 6 0.02 1.53 0.02 0.25 ( 0.05 1.88 0.02 0.39 8 0.07 1.98 0.07 0.40 9 0.04 0.97 0.03 0.24 10 Met 0.04 0.70 0.03 0.85 11 lle 0.05 2.39 0.06 0.41 12 Leu 0.03 1.02 0.02 0.46 13 Tyr 0.09 1.74 0.01 0.46 14 Phe 0.02 1.89 0.01 0.62 15 His 0.01 1.63 0.01 0.68 16 0.01 0.86 0.01 0.39 17 0.02 2.35 0.02 1.31 18 0.01 2.17 0.01 1.88 3.4样品测定 对供试品溶液稀释100倍后进样测定，供试品溶液色谱图如图2所示。以外标法计算供试品含量，定量结果如表4所示。 图2 供试品溶液色谱图 3.5回收率试验 在供试品中添加18种氨基酸标准溶液，加标浓度为 10 mmol/L，稀释100倍后进行测定。经测试18种氨基酸的回收率在96.2-106.4%之间，加标回收率如表4所示。 表4供试品溶液测试结果 序号 待测化合物 测试结果(mmol/L) 加标回收率(%) 18.89 104.8 2 21.09 103.9 3 Ser 9.72 98.8 Glu 5.07 96.5 5 Pro 8.10 97.4 6 97.72 102.6 7 22.78 103.3 8 N.D. 106.4 9 31.38 101.5 10 Met 15.42 104.2 11 lle 26.65 102.9 12 Leu 37.67 98.5 13 Tyr 1.33 105.3 14 Phe 32.83 99.2 15 11.74 96.2 16 23.68 103.4 17 4.28 101.8 18 Arg 22.69 104.1 注：N.D.表示未检出。 结论 本文参考2020年版《中国药典》二部——复方氨基酸注射液的相关条件和要求，采用岛津氨基酸分析系统建立了氨基酸注射液中18种氨基酸含量测定方法。结果显示线性、精密度及加标回收率试验结果均满足相关测定要求，本方法可用于氨基酸含量测定，供相关检测人员参考。 岛津应用云 本文参考2020年版《中国药典》二部——复方氨基酸注射液的相关条件和要求，采用岛津氨基酸分析系统建立了氨基酸注射液中18种氨基酸含量测定方法。结果显示线性、精密度及加标回收率试验结果均满足相关测定要求，本方法可用于氨基酸含量测定，供相关检测人员参考。