卡贝缩宫素注射液中有关物质检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-232Excellence in Science Excellence in ScienceLC-219 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 利用 Nexera LC-40 方法转移功能建立 UHPLC法测定卡贝缩宫素注射液的有关物质 LC-219 摘要：本文采用岛津 Nexera LC-40 系效高效液相色谱仪，利用方法转移功能建立了 UHPLC 法测定卡贝缩宫素注射液的有关物质。有关物质结果中，卡贝缩宫素峰的保留时间大于15分钟， [D-Asn5]卡贝缩宫素与卡贝缩宫素分离度为2.96，所有的有关物质峰(包含未知杂质峰)均符合国家标准(YBH00012016)检查项下有关物质规定。实验结果表明，利用方法转移功能建立分析方法能快速准确地测定卡贝缩宫素注射液中的有关物质。 卡贝缩宫素是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物。卡贝缩宫素为妇科药，临床上主要用于硬膜外或腰麻下剖腹产术后，以预防子宫张力不足和产后出血。卡贝缩宫素的临床和药理特性与天然产生的催产素类似，可以与子宫平滑肌的催产素受体结合，，引起子宫的节律性收缩，增加其频率和增加子宫张力。 在卡贝缩宫素注射液国家药品质量标准提高工作中，以国家食品药品监督管理局国家标准(YBH 00012016)为基础，参考国家食品药品监督管理局进口药品注册标准(JX20120178)，使用岛津NexeraLC-40 高效液相色谱仪方法转移功能，建立 UHPLC 法测定卡贝缩宫素注射液的有关物质。 岛津 Nexera LC-40 高效液相仪谱仪系统具有分析速度快、稳定性高的特点，同时具备方法转移功能，适用于制药药检相关行业对药品的分析检验及探索方法工作。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40 液相色谱仪，具体配置为：SCL-40(系统控制器)， DGU-405(脱气机)，LC-40B X3(输液泵)，， SIL-40C X3自动进样器，CTO-40C(柱温箱))，， SPD-40(紫外-可见光检测器)，LabSolutions Ver. 5.97(色谱工作站)。 图11岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱仪 1.2 Nexera LC-40 方法转移功能设定 岛津 Nexera LC-40 系列液相色谱仪新增方法转移设定功能。使用该功能前，首先设定分析条件参数并保存方法文件，然后打开移动仪器参数功能，设定相应参数，调节梯度开始时间或梯度程序，无需更换流路和混合器等部件就可以顺利地完成方法转移，自动获得方法转移后的分析条件参数。移动仪器参数功能实现了快速速捷的分析方法转换，大大节省方法优化的时间，有效提高工作效率。 图2移动仪器参数功能 样品前处理 供试品溶液制备：参照国家食品药品监督管理局国家标准 (YBH00012016)；检查项下有关物质测定要求，取卡贝缩宫素注射液作为供试品溶液，直接进样分析。 系统适用性溶液制备：参照国家食品药品监督管理局国家标准 (YBH00012016)检查项下有关物质测定要求制得系统适用性溶液，直接进样分析。 空白溶剂制备：取超纯水适量，用醋酸调 pH值为3-4。 结果与讨论 3.1系统适用性试验 参照国家标准 (YBH00012016)，设定 HPLC分析条件(表1和表2)，系统适用性溶液色谱图见图3. 仪器 LC-40 (Nexera XR) 色谱柱 Shim-pack VP-ODS (150 mm×4.6 mml.D.， 5.0 um) 流动相 A相-磷酸盐缓冲液(1mol/L 氢氧化钠调溶液 pH 为6.5)； B相-80%乙腈水溶液 流速 1.0mL/min 柱温 40°C 检测波长 220 nm 进样体积 10pL 洗脱方式 梯度洗脱，B相起始浓度为25%，时间程序见表2 表2 梯度洗脱时间程序 时间(min) 单元 处理命令 值 35.00 泵 B Conc 35 37.00 泵 B Conc 25 放大 图3系统适用性溶液色谱图(化合物峰号对应表5) 3.2利用方法转移功能设定 UHPLC分析条件 使用1.2中的方法转移设定功能，对3.1系统适用性试验的 HPLC 分析条件进行方法转移，建立 UHPLC方法。系统适用性溶液色谱图见图4，空白溶剂色谱图见图5， UHPLC 分析条件见表3和表4。 仪器 LC-40 (Nexera X3) 色谱柱 Shim-packXR-ODSⅢII (75 mm×2.0 mml.D.， 1.6um) 流动相 A相-磷酸盐缓冲液(1mol/L 氢氧化钠调溶液 pH 为6.5)； B相-80%乙腈水溶液 流速 0.3mL/min 柱温 40C 检测波长 220nm 进样体积 5 uL 洗脱方式 梯度洗脱，B相起始浓度为25%，时间程序见表4 表4 梯度洗脱时间程序 时间(min) 单元 处理命令 值 16.00 泵 B Conc 34 16.50 泵 B Conc 25 20.00 控制器 Stop 放大 图4系统适用性溶液色谱图(化合物峰号对应表5) 图5空白溶剂色谱图 表5 系统适用性溶液 UHPLC测定结果(n=6) 峰号 化合物名称 保留时间RSD% 峰面积RSD% [Gly-OH]卡贝缩宫素 0.1 1.4 2 [Asp*]卡贝缩宫素 0.3 1.4 3 [β-Asp]卡贝缩宫素 0.3 1.5 4 [Glu]卡贝缩宫素 0.1 1.8 5 卡贝缩宫素亚砜I 0.3 1.1 6 卡贝缩宫素亚砜Ⅱ 0.3 1.0 7 [D-Cys°]卡贝缩宫素 0.09 1.2 8 [des-Gln]卡贝缩宫素 0.09 0.9 9 卡贝缩宫素 0.08 0.8 10 [D-Asn]卡贝缩宫素 0.08 1.8 3.3有关物质测定结果 按3.2中的UHPLC分析条件进行测定，供试品溶液色谱图如图6所示，有关物质测定结果见表7。结果表明，卡贝缩宫素峰的保留时间大于15分钟，[D-Asn]卡贝缩宫素与卡贝缩宫素分离度为2.96，按峰面积归―化法计算，所有的有关物质峰(包含未知杂质峰)均符合国家标准((YBH00012016)检查项下有关物质规定。 国家标标 (YBH00012016)检查项下有关物质规定：卡贝缩宫素峰的保留时间应大于15分钟， [D-Asn]卡贝缩宫素与卡贝缩宫素分离度应符合规定(分离度大于1.5)。按峰面积归一化法计算，低于0.03%的杂质峰不计，卡贝缩宫素亚砜Ⅰ、卡贝缩宫素亚砜Ⅱ不得过0.8%； [Gly-OH]卡贝缩宫素、[Glu]卡贝缩宫素不得过1.5%；[Asp]卡贝缩宫素不得过 0.5%；[D-Cys]卡贝缩宫素、[D-Asn]卡贝缩宫素不得过1.1%；其他任―单个未知杂质不得过0.5%；未知杂质总量不得过1.0%；杂志总量不得过3.5%。 图6供试品溶液色色图(A、B、C公司) 表7 卡贝缩宫素注射液有关物质测定结果((面积归一化法) 峰号 峰面积 RSD(%) 化合物名称 A公司 B公司 C公司 标准要求 UHPLC方法 [Gly-OH]卡贝缩宫素 小于0.1 0.1 0.1 小于1.5 [Asp]卡贝缩宫素 0.1 0.3 小于0.5 [B-Asp]卡贝缩宫素 小于0.1 0.1 2 3 4 [Glu]卡贝缩宫素 小于0.1 小于0.1 小于0.1 小于1.5 5 卡贝缩宫素亚砜丨 0.4 0.1 0.3 小于0.8 6 卡贝缩宫素亚砜Ⅱ N.D. N.D. N.D. 小于0.8 7 [D-Cys]卡贝缩宫素 0.2 0.1 0.1 小于1.1 8 [des-Gln]卡贝缩宫素 N.D. N.D. N.D. 9 卡贝缩宫素 98.8 99.6 99.1 10 [D-Asn]卡贝缩宫素 N.D. N.D. N.D. 小于1.1 0 未知杂质(总量) 0.04 N.D. N.D. 小于1.0 N.D.= Not Detected 结论 本文采用岛津 Nexera LC-40 系列高效液相色谱仪，以国家食品药品监督管理局国家标准 (YBH00012016)为基础，参考国家食品药品监督管理局进口药品注册标准(JX20120178)，利用方法转移功能建立了 UHPLC法测定卡贝缩宫素注射液的有关物质。实验结果表明，所有测定结果均符合国家标准(YBH00012016)检查项下有关物质规定。利用方法转移功能建立的 UHPLC 方法分析时间为20分钟，在满足标准规定的同时，该方法相比国标 (YBH00012016) HPLC方法节省超过一半的分析时间，极大地提高了工作效率。 方法转移功能建立分析方法能快速、稳定、准确地测定卡贝缩宫素注射液中的有关物质，该功能适用于制药药检相关行业从业人员的药品分析检验及探索方法工作。 岛津应用云 本文采用岛津Nexera LC-40系列高效液相色谱仪，利用方法转移功能建立了UHPLC法测定卡贝缩宫素注射液的有关物质。有关物质结果中，卡贝缩宫素峰的保留时间大于15分钟，[D-Asn5]卡贝缩宫素与卡贝缩宫素分离度为2.96，所有的有关物质峰（包含未知杂质峰）均符合国家标准（YBH00012016）检查项下有关物质规定。实验结果表明，利用方法转移功能建立分析方法能快速准确地测定卡贝缩宫素注射液中的有关物质，该功能适用于制药药检相关行业从业人员的药品分析检验及探索方法工作。