中药材三七、大枣中农药残留物含量检测方案(气质联用仪)

SSL-CA19-195Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-184 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GC-MS/MS 法测定中药材三七和大枣中33个禁用农药残留物含量 GCMSMS-184 摘要：本文采用岛津 GCMS-TQ8040 NX三重四极杆气质联用仪结合岛津农残数据库建立了中药材三七和大枣中33个禁用农药残留物的GC-MS/MS检测方法，本方法依照《中国药典》2020年版通则2341第五法公示稿规定建立。在2~40 pg/L (以对硫磷计)浓度范围内建立内标曲线，线性关系良好，相关系数r均大于0.999。该方法适用于《0212药材和饮片检定通则》公示稿中规定的药材及饮片(植物类)中禁用农药残留物的准确定量测定。 关键词：三重四极杆气相色谱质谱联用仪三七大枣禁用农药残留 《中国药典》是国家保证药品质量可控、确保人民用药安全制定的药品法典，是药品研制、生产、经营、使用和管理都必须严格遵守的法定依据。《中国药典》2020年版的修订工作正在进行中，中国药典委员会官网发布的《0212药材和饮片检定通则》公式稿(以下简称0212通则公示稿)，与《中国药典》2015年版相比，它最显著的变化是加入了药材及饮片(植物类)33种禁用农药的定量限，规定了禁用农药不得检出(不得过定量限)。33种禁用农药在中药材(植物类)中以母体或代谢物形式存在，需要同时检测的母体和代谢物共53个。中国药典委公示《2341农药残留量测定法》 实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8040 NX三重四极杆气相色谱质谱联用仪 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rxi-17Sil MS， 30 m×0.25mm×0.25 um 柱温程序： 60℃ (1 min)_10℃ /min _160℃_2℃/min_230℃_15℃ /min _ 300℃ (6 min) 进样口温度：250℃ 进样方式：不分流进样 进样时间： 1 min 第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》公示稿(以下简称2341通则第五法公示稿)针对0212通则公示稿中禁用农药残留物种类，给出具体的测定方法，其中GCMSMS检测33个禁用农药残留物。 本文采用岛津 GCMS-TQ8040 NX三重四极杆气质联用仪，参照2341通则第五法公示稿中的仪器参数及样品前处理方式，建立了中药材三七和大枣中33个禁用农药残留量测定的方法。该方法灵敏度高，重复性好，完全满足0212通则公示稿的限量值的要求。 载气控制方式：恒压，146 kPa 进样量：1pL 离子化方式：El 离子源温度：250℃ 接口温度：250℃ 检测器电压：调谐电压+0.7 kV 采集模式：MRM，离子对信息见表1 表133个禁用农药残留物、内标磷酸三苯酯的保留时间及 MRM 条件设置 22 氟虫腈砜 fipronil-sulfone 35.809 120068-36-2 383.0>255.0 20 383.0>213.0 32 23 狄氏剂 Dieldrin 36.195 60-57-1 276.8>240.7 10 263.0>193.0 35 24 p，p'-DDE p，p'-DDE 36.262 72-55-9 246.0>176.0 316.0>246.0 30 25 25 苯线磷 Fenamiphos 37.965 22224-92-6 303.1>122.0 20 303.1>154.0 30 26 甲基硫环磷 phosfolan- methyl 38.802 5120-23-0 227.0>92.0 10 227.0>60.0 30 235.0>165.0 25 27 o，p'-DDT o，p'-DDT 40.689 789-02-6 237.0>165.0 25 28 除草醚 Nitrofen 40.697 1836-75-5 201.8>138.7 28 282.8>201.8 15 72-54-8 235.0>165.0 25 29 p，p'-DDD p，p'-DDD 41.706 237.0>165.0 25 33213-65-9 194.8>159.0 10 30 beta-硫丹 beta-Endosulfan 41.787 194.8>124.7 30 50-29-3 235.0>165.0 25 31 p，p'-DDT p，p'-DDT 44.060 237.0>165.0 25 32 硫丹硫酸酯 46.037 Endosulfan 1031-07-8 271.8>236.7 15 sulfate 273.8>238.9 15 33 磷酸三苯酯 Triphenyl 48.300 326.0>233.0 10 115-86-6 56-72-4 (内标) phosphate 326.0>215.0 25 34 蝇毒磷 Coumaphos 52.100 361.8>109.0 361.8>225.8 16 14 样品前处理 样品处理流程见下图1。 图1样品前处理流程 结果与讨论 3.1基质混合对照溶液谱图和质量色谱图 使用三七空白基质配制浓度为20~50 pg/L 的33个农药残留物的基质混合对照溶液，谱图如图2所示，各物质出峰时间详见表1。 图2三七基质混合对照溶液谱图(20~50 ug/L) 使用三七空白基质配制浓度为 2~5 ug/L的33个农药残留物的标准溶液(相当于三七中禁用农药含量为0.002~0.005 mg/kg)， 33个禁用农药残留物的浓度为0212通则公示稿中规定定量限的1/10，部分农药组分的 MRM 质量色谱图如图3所示。 8-六六六 艾氏剂 氟虫腈亚砜 氟虫腈 p，p’-DDT 硫丹硫酸酯 磷酸三苯酯(内标) 蝇毒磷 图3三七空白基质加标禁用农药组分质量色谱图(农药组分浓度2~5ug/L) 注：由于篇幅所限，只列出了部分禁用农药及代谢物的质量色谱图 使用大枣空白基质配置浓度为2~5 ug/L 的33个禁用农药残留物的标准溶液(相当于大枣中禁用农药含量为 0.002~0.005 mg/kg) ，33个禁用农药残留物的浓度为《0212药材和饮片检定通则》规定定量限的1/10，部分农药组分的 MRM质量色谱图如图4所示。 图4大枣空白基质部分加标禁用农药组分质量色谱图(农药组分浓度2~5ug/L) 注：因篇幅所限，以下仅列出三七基质的相关数据进行说明。 3.3标准曲线 使用三七空白基质配制农药混合标准溶液，浓度分别为2/5~40/100 ug/L (各农药组分浓度不不)，每1mL标准溶液加入0.3 mL浓度为0.1 ug/mL磷酸三苯酯作为内标(参照《中国药典》通则2341第五法公示稿)，取1uL 进样。、以目标农药与内标的浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标，制作内标曲线。因篇幅所限，部分禁用农药组分内标曲线如图5所示，各组分内标曲线线性相关系数见表2. 图55三七基质中部分禁用农药标准曲线(2/5~40/100 ug/L) 3.4检出限及重复性 根据2~5 ug/L (以对硫磷计)对照混合溶液数据，计算方法检出限(3倍噪声计算，噪声计算方式为峰至峰)，33个禁用农药残留物的对照混合溶液(2~5 ug/L) 重复测定6次，考察仪器重复性。各组分检出限及重复性见表2。 表233个农药残留物线性相关系数、检出限及重复性数据 结论 采用岛津 GCMS-TQ8040 NX 三重四极杆气质联用仪测定2341通则第五法公示稿中规定的药材中33个禁用农药残留物。中药材三七和大枣采用快速前处理法 QuEChERS方式作为前处理方法，标准曲线在2~40 ug/L (以对硫磷计)浓度范围内，禁用农药残留物线性良好，线性相关系数均大于0.999；浓度为2~5 ug/L 的33个禁用农药残留物的基质对照混合溶液重复进样6次，各组分峰面积 RSD 均小于10%，该方法重复性良好。该方法适用于0212通则公示稿中对药材及饮片(植物类)中禁用农药限量值的要求。 岛津应用云 使用岛津公司GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气质联用仪测定三七和大枣中33种农药残留物，前处理采用岛津（上海）实验器材公司的耗材包，方法简单、重复性好（RSD均小于4.96%），灵敏度高。在0.02 mg/kg的加标浓度下，回收率在60%~130%。实验表明，本方法能够有效地减小基质干扰，提高检测灵敏度及分析的选择性，适合三七和大枣中33个农药残留物的检测。