中药材及饮片中禁用农药及代谢物残留检测方案(液质联用仪)

SSL-CA19-098Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-400 上海市徐汇区宜州路180号B2栋http：//www.shimadzu.com.cn咨询电话：021-34193996Hotline： 021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai LC-MS/MS 法测定中药材麦冬中30个禁用农药残留物含量 LCMSMS-400 摘要：本文利用岛津LCMS-8050三重四极杆液质联用仪建立了 LC-MS/MS 测定中药材麦冬中30个禁用农药残留物含量的方法。在0.2~100 ug/L(以对硫磷计)浓度范围内建立标准曲线，线性关系良好，相关系数r均大于0.999，在1~5 ug/kg 加标浓度下，30个禁用农药残留物回收率在70.99 %~98.00%之间。该方法适用于中药材麦冬中30个禁用农药残留物 LCMSMS的准确定量测定。 关键词：三重四极杆液相色谱质谱联用仪麦冬禁用农药残留 《中国药典》2020年版的修订工作正在如火如荼的进行，中国药典委员会官网已陆续发布了新修订的指导标准。其中， 《0212药和和饮片检定通则》公示稿(以下简称0212通则公示稿)与《中国药典》2015年版相比，最显著的变化是加入了药材及饮片(植物类)33种禁用农药的定量限，规定了禁用农药不得检出(不得过定量限)。33种禁用农药在中药材(植物类)中以母体或代谢物形式存在，需要同时检测的母体和代谢物共53个。根据《2341农药残留量测定 法》第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》(以下简称2341通则第五法公示稿)，其中 LC-MS/MS 测定的禁用农药残留物为30个。 本文采用岛津 LCMS-8050三重四极杆液相色谱质谱联用仪，参照2341通则第五法公示稿的仪器参数及样品前处理方式，建立了中药材麦冬中30个禁用农药残留物测定的方法。该方法灵敏度高，重复性好，完全满足0212通则公示稿限量值的要求。 实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A 与三重四重杆质谱仪 LCMS-8050联用系统。具体配置为 LC-30AD×2输液泵， DGU-20A，在线脱气机， SIL-30AC 自动进样器， CTO-20A 柱温箱， CBM-20A系统控制器，LCMS-8050三重四极杆质谱仪， LabSolutions LCMS Ver.5.93版色谱工作站。 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱：Shim-pack Velox C18， 3.0 mm I.D.×150 mm L.， 2.7 um (Shimadzu SGLC， P/N：227-32010-04) 流动相：A相-0.1%甲酸水溶液(含5mmol/L甲酸铵) B相-乙腈：0.1%甲酸水溶液(含5mmol/L甲酸铵) (95：5，v/v) 流速：0.30 mL/min 柱温：40℃ 洗脱方式：采用梯度洗脱，B相初始浓度为30%，时间程序见表1 表1.梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 0.80 Pumps Pump B Conc. 30 13.00 Pumps Pump B Conc. 100 15.00 Pumps Pump B Conc. 100 15.01 Pumps Pump B Conc. 30 20.00 Controller Stop 质谱条件 离子源： ESI (+)脱溶剂管温度：250℃离子源接口电压：+4kV加热模块温度：400℃雾化气：氮气3.0L/min接口温度 ： 300℃干燥气： 氮气10 L/min扫描模式 ：MRM加热气： 空气 10 L/min驻留时间 ：10ms碰撞气：氩气MRM参数 ：见表2 表 2. MRM 参数 No. 中文名 英文名称 保留时间 监测离子对 Q1 Pre (V) CE Q3 Pre (V) 1 甲胺磷 2.425 142.05>125.05 -16 -16 -23 Methamidophos 142.05>94.00 -16 -15 -17 2 涕灭威亚砜 Aldicarb- 2.884 207.10>132.00 -14 -8 -23 sulfoxide 207.10>89.00 -14 -14 -15 196.90>46.10 -13 -20 -17 3 杀虫脒 Chlordimeform 4.733 196.90>117.05 -13 -27 -21 196.90>152.00 -13 -20 -17 4 涕灭威砜 Aldicarb-sulfone 3.212 240.10>223.00 -26 -8 -23 240.10>86.00 -26 -21 -15 5 久效磷 4.482 223.90>193.00 -11 -10 -21 Monocrotophos 223.90>127.00 -11 -15 -24 Carbofuran-3- 238.10>181.10 -15 -27 -19 6 3-羟基克百威 6.065 238.10>163.10 -15 -10 -17 hydroxy 238.10>220.10 -15 -7 -22 7 硫环磷 Phosfolan 7.559 256.00>168.10 -15 -25 -13 256.00>140.10 -15 -25 -15 8 涕灭威 Aldicarb 7.722 208.00>116.10 -14 -9 -19 208.00>89.10 -14 -20 -18 299.90>127.00 -15 -25 -25 9 磷胺 Phosphamidon 8.299 299.90>174.05 -15 -13 -19 10 甲磺隆 Metsulfuron- methyl 382.10>199.10 -19 -15 -26 8.610 382.10>167.10 -19 -16 -18 382.10>141.10 -19 -15 -26 11 克百威 Carbofuran 8.965 221.90>123.00 -11 -16 -16 221.90>165.00 -11 -6 -16 表格中多对监测离子对供定量和定性分析选择使用。 1.3标准品与试剂 农残对照品： Dr. Ehrenstorfer GmbH、美国 AccuStandard Inc、农业部环境保护科研监测所、 A ChemTek，于-20℃冰箱保存，备用。 试剂： SHIMSEN中药农残 QuEChERS 提取盐包 (SHIMADZU SGLC P/N： 380-00151)， SHIMSEN 中药农残 QuEChERS 净化管 (SHIMADZU SGLCP/N：380-00134)，室温保存。 甲醇/乙腈：色谱级，室温保存。 实验用水：由 Milli-Q Plus 水净化系统经去离子与二次净化制得。 甲酸/乙酸：色谱级，纯度98%，室温保存。 甲酸铵：色谱级，纯度99%，室温保存。 1.4供试品溶液的配制 取麦冬3.0 g， 置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15mL， 涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15 mL， 置振荡器上剧烈振荡(500次/min)5分钟，加入 SHIMSEN 中药农残QuEChERS提取盐包，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡(500次/min)3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心(4000转/min)5分钟，取上清液9mL， 置于 SHIMSEN 中药农残 QuEChERS净化管中，涡旋使充分混匀，再置振荡器上剧剧振荡(500次/min)5分钟使净化完全，离心(4000转/min)5分钟。精密量取上清液5mL，40℃水浴氮吹至约0.4 mL， 加乙腈稀释至1.0 mL，混匀，用微孔滤膜(0.22um)滤过，取滤液，即得。精密吸取供试品溶液1mL， 加入0.3mL纯水，混匀，过滤，取2uL续滤液上机分析。 1.5混合对照品溶液的制备 根据各农药对照品在仪器中不同的响应情况，精密量取不同体积的各对照品储备液置25 mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀；用乙腈稀释标准曲线浓度(以甲胺磷计)为100、50、20、10、5、、2、1、0.5、0.2ng/mL。精密吸取混合对照品溶液溶液1mL，加入0.3mL纯水，混匀，过滤，取2uL续滤液上机分析。 结果与讨论 2.1混合对照品溶液色谱图 图1.1.0ng/mL(以甲胺磷计)混合对照品溶液 MRM图谱(编号同表2) 表3.30个农药对照品标准曲线、相关系数和线性范围结果 2.2精密度考察 取混合对照品溶液(涕灭威、日甲基异柳磷为2.0 ng/mL， 甲拌磷、.甲磷砜、水水硫磷、地虫硫磷为1.0ng/mL；其余化合物浓度均为 0.5 ng/mL)注入液相色谱串联质谱仪，计算峰面积RSD。结果见表4。 2.2精密度考察 取混合对照品溶液(涕灭威、甲基异柳磷为2.0 ng/mL， 甲拌磷、甲拌磷砜、水胺安磷、地虫虫磷为1.0ng/mL；其余化合物浓度均为 0.5 ng/mL) 注入液谱色谱串联质谱仪，计算峰面积RSD。结果见表4。 表4.精密度考察结果((n=6) No. 中文名 RSD No. 中文名 RSD No. 中文名 RSD 1 甲胺磷 0.58% 11 克百威 1.45% 21 特丁硫磷砜 6.45% 2 涕灭威亚砜 1.10% 12 苯线磷亚砜 1.33% 22 氯唑磷 8.95% 3 杀虫脒 1.62% 13 苯线磷砜 3.26% 23 灭线磷 3.38% 4 涕灭威砜 2.35% 14 氯磺隆 2.12% 24 苯线磷 3.70% 5 久效磷 1.18% 15 胺苯磺隆 2.12% 25 治螟磷 3.30% 6 3-羟基克百威 0.92% 16 甲拌磷亚砜 3.04% 26 甲基异柳磷 2.22% 7 硫环磷 1.37% 17 甲拌磷砜 2.59% 27 蝇毒磷 4.12% 8 涕灭威 3.92% 18 水胺硫磷 3.75% 28 地虫硫磷 4.53% 9 磷胺 0.99% 19 内吸磷 1.27% 29 甲拌磷 4.70% 10 甲磺隆 2.59% 20 特丁硫磷亚砜 3.13% 30 硫线磷 3.18% 各农药峰面积 RSD 均小于8.95%，表明精密度满足试验需求。 2.3加标回收考察 在空白供试品中分别精密加入混合对照品(涕灭威、甲基异柳磷、甲拌磷、甲拌磷砜、水胺硫磷、地虫虫磷加标量为5 ug/kg， 其余化合物加标量均为1ug/kg)，按照样品前处理流程分别处理3份，，按1.4项下方法进行样品处理和测定，结果见表5。 表5.回收率考察结果 No. 中文名 平均回收率 No. 中文名 平均回收率 No. 中文名 平均回收率 1 甲胺磷 86.48% 11 克百威 91.95% 21 特丁硫磷砜 90.58% 2 涕灭威亚砜 85.84% 12 苯线磷亚砜 91.13% 22 氯唑磷 93.25% 3 杀虫脒 92.16% 13 苯线磷砜 87.14% 23 灭线磷 91.13% 4 涕灭威砜 90.75% 14 氯磺隆 90.11% 24 苯线磷 77.14% 5 久效磷 70.99% 15 胺苯磺隆 92.77% 25 治螟磷 90.11% 6 3-羟基克百威 96.85% 16 甲拌磷亚砜 93.02% 26 甲基异柳磷 72.77% 7 硫环磷 93.15% 17 甲拌磷砜 80.28% 27 蝇毒磷 90.02% 8 涕灭威 82.76% 18 水胺硫磷 91.84% 28 地虫硫磷 77.28% 9 磷胺 91.65% 19 内吸磷 88.41% 29 甲拌磷 71.84% 10 甲磺隆 94.04% 20 特丁硫磷亚砜 98.00% 30 硫线磷 98.41% 结果计算各农药平均回收率在70.99%~98.00%之间。 2.4检出限 将标准曲线中低浓度样品分别注入液相色谱质谱联用仪，根据各峰信号强度，计算其检出限。结果显示，30个化合物的检出限在0.10~1.99 pg/kg范围内，完全满足检测要求。 结论 中药材麦冬提取后，经WondaPak QuEChERS 醋酸钠提取管净化，可在20 min 内快速、准确对其中的30个禁用农药残留物进行筛查测定。本文考察了方法的线性、检出限、重复性、加标回收率。结果表明：30个禁用农药残留物在检测范围内线性良好，相关系数均大于0.999；方法检出限为 0.10~1.99 ug/kg；精密度在8.95%以内，回收率均在70.00%~98.00%范围内。使用高灵敏、高抗污染能力的 LCMS-8050系统，可以对中药材麦冬中30个禁用农药残留物进行灵敏、准确的定量检测。 岛津应用云 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 本文利用岛津LCMS-8050三重四极杆液质联用仪建立了LC-MS/MS测定2020版 《中国药典》通则2341第五法《药材及饮片（植物类）中禁用农药多残留测定法》规定的30种禁用农药残留方法。在0.2~100 µg/L浓度范围内建立标准曲线，线性关系良好，相关系数r均大于0.999，在1~5 μg/kg加标浓度下，30种农药及代谢物回收率分布在70.99 %~98.00 %之间。该方法适用于《中国药典》2020年版规定的药材及饮片（植物类）中30种禁用农药残留量的准确定量测定。