中药材中33种禁用农药及代谢物检测方案(气质联用仪)

SSL-CA19-084Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-173 上海市徐汇区宜州路180号B2栋http：//www.shimadzu.com.cn咨询电话：021-34193996Hotline：021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai GC-MS/MS 法测定中药材麦冬中33个禁用农药残留物含量 GCMSMS-173 摘要：本文利用岛津 GCMS-TQ8050 NX 三重四及杆气质联用仪建立了 GC-MS/MS 测定中药材麦冬中33个禁用农药残留物含量的方法。在1~20 ug/L (以对硫磷计)浓度范围内建立内标曲线，线性关系良好，相关系数r均大于0.999，在5~25 ug/kg 加标浓度下，33个禁用农药残留物回收率分布在60%~120%之间。该方法适用于《中国药典》2020年版通则2341第五法公示稿规定的药材及饮片(植物类)中禁用农药残留物的准确定量测定。 关键词：三重四极杆气相色谱质谱联用仪麦冬禁用农药残留 《中国药典》2020年版的修订工作正在如火如荼的进行，中国药典委员会官网已陆续发布了新修订的指导标准公示稿。其中，《0212药材和饮片检定通则》公示稿(以下简称0212通则公示稿)与《中国药典》2015版相比，最显著的变化是加入了药材及饮片(植物类)33种禁用农药的定量限，规定了禁用农药不得检出(不得过定量限)。33种禁用农药在中药材(植物类)中以母体或代谢物形式存在，需要同时检测的禁用农药残留物共53个。根据《2341农药残留量测 实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气相色谱质谱联用仪。 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rxi-17Sil MS， 30 m×0.25 mm×0.25 um 柱温程序： 60℃(1 min) _10℃/min _160℃_2℃ /min_230℃_15℃/min _ 300℃ (6min) 接口温度：250℃ 离子化方式：EI ( 采集模式：MRM，离子对信息见表1 ) 定法》第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》公示稿(以下简称2341通则第五法公示稿)规定， GC-MS/MS 测定的禁用农药残留物为33个。 本文采用岛津 GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气相色谱质谱联用仪，参照2341通则第五法公示稿的仪器参数及样品前处理方式，建立了中药材麦冬中33个禁用农药残留物测定的 MRM 方法。该方法灵敏度高，重复性好，完全满足0212通则公示稿限量值的要求。 载气控制方式：恒压，146 kPa 进样口温度：250℃ 进样方式：不分流进样 进样时间： 1 min 进样量：1uL 离子源温度：250℃ 检测器电压：调谐电压 +0.7kV 样品前处理 精确酥取3g麦冬粉碎样品，加入1%冰醋酸水溶液15mL， 涡旋使药粉充分浸润，放置30 min， 加入 15 mL乙腈 + 涡旋混匀后后荡 5 min， 加入无水硫酸镁与无水醋酸钠混合粉末 (4：1， m/m)，立刻摇散后震荡，冰浴中冷却 10 min， 4000 r/min 离心5 min，移取上清液9mL + 置于 15mL固相分散萃取净化管中，涡旋混匀，震荡5 min， 4000 r/min 离心5 min， 移取上清液5mL， 氮吹至0.4mL， 乙腈定容至1mL， 0.22 um 滤膜过滤. 加入0.3 mL磷酸三苯酯后涡旋混匀，供上机分析 结果与讨论 3.1MRM方法创建过程 岛津 Smart Pesticides Database 内置了 2341通则第五法公示稿规定的 GC-MS/MS检测的所有禁用农药残留物及内标磷酸三苯酯的 MRM 信息和不同极性色谱柱上的保留指数，结合保留时间自动调整功能(AART)，在无标准品情况下，自动生成所有目标物的 MRM 分析方法。 图1.岛津 Smart Pesticides Database 界面 3.2基质混合对照溶液谱图和质量色谱图 使用麦冬空白基质配置浓度度5~25pg/L (以对硫磷计)的基质混合对照溶液谱图如图2所示。使用麦冬空白基质配置浓度为 1~5 ug/L(以对硫磷计)的基质混合对照溶液(相当于麦冬中含量为 0.001~0.005mg/kg)，部分组分的 MRM 质量色谱图如图3所示。 图2.麦冬基质混和对照溶液谱图(5~25 ug/L) 表1.33个禁用农药残留物、内标的保留时间及 MRM 条件设置 p，p'-DDD beta-硫丹 图3.麦冬基质混合对照溶液中禁用农药残留物的 MRM 图(浓度1~5ug/L) 注：由于篇幅所限，只列出了部分禁用农药残留物的 MRM 图谱 3.3标准曲线 使用麦冬空白基质配制基质混合对照溶液，浓度分别为1、2、5、10、15、20 ug/L(以对硫磷计)，各农药标准曲线浓度范围请参见表2，并加入0.3 mL磷酸三苯酯作为内标(参照2341通则第五法公示稿))。取1uL进样。以目标农药与内标的浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标，制作内标曲线。因篇幅所限，部分禁用农药残留物内标曲线如图4所示，各组分内标曲线线性相关系数见表2。 Conc.Ratio (ug/L) Conc.Ratio (ug/L) Conc.Ratio (ug/L) 图4.部分禁用农药标准曲线(1~20 pg/L) 3.4检出限及重复性 根据1~5 ug/L麦冬基质混合对照溶液数据，，1计算方法检出限(3倍噪声计算)，并以6次测定的数据考察仪器重复性 ((见表2)。各禁用农药残留物检出限及重复性见表2。 表2.麦冬基质中33个禁用农药残留物线性相关系数、检出限及重复性数据 3.5加标回收率： 以麦冬为基质(麦冬样品中各农药残留物均未检出)，进行加标回收测试，33个禁用农药残留物加标浓度为5~25 ug/kg，(加标浓度均不超过0212通则公示稿规定的定量限)，按照样品前处理流程分别处理3份，所得回收率见表3。 表3.加标回收率结果 结论 采用岛津 GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气质联用仪测定了2341通则第五法公示稿中规定的药材中33个禁用农药残留物。中药材麦冬采用QuEChERS 方法处理，操作简单，净化效果明显。标准曲线在1~20pg/L(以对硫磷计)浓度范围内，33个禁用农药残留物线性良好，线性相关系数大于0.999；浓度为1~5 ug/L的麦冬基质对照混合溶液重复进样6次，各组分峰面积 RSD 均小于5.55%，该方法重复性良好；对麦冬样品进行加标回收实验，在5~25 ug/kg加标浓度下，33个禁用农药残留物加标浓度均低于0212通则公示稿的规定，回收率分布在60%~120%之间。该方法完全满足《中国药典》通则0212公示稿中对药材及饮片(植物类)中 33种禁用农药限量值的要求。 岛津应用云 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD.Analytical Applications Center 采用岛津GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气质联用仪分析2020版 《中国药典》四部通则2341中规定的农药组分，供试品溶液制备参考《2341 农药残留量测定法》第五法，采用QuEChERS方法，操作简单，净化效果明显。校准曲线在1~20µg/L浓度范围内，大部分农药线性良好，相关系数大于0.999；浓度为1~5 μg/L的33种农药混合标准溶液重复进样6次，各组分峰面积相对标准偏差均小于5.55%，该方法重复性良好；对样品进行加标回收实验，在5 ~25 μg/kg加标浓度下，33种农药回收率分布在60%~120%之间。该方法完全满足2020版《中国药典》对药材及饮片（植物类）中33种禁用农药限量值的要求。