中草药陈皮中农药残留物检测方案(气质联用仪)

SSL-CA19-189Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-182 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel： 86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn GC-MS/MS 法测定中药材陈皮中33个禁用农药残留物含量 GCMSMS-182 摘要：本文采用岛津GCMS-TQ8050 NX 三重四极杆气质联用仪结合岛津农残数据库建立了中药材陈皮中33个禁用农药残留物的 GC-MS/MS检测方法，本方法依据《中国药典》2020年版药典通则2341第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》公示稿建立。在1~20 ug/L (以对硫磷计)浓度范围内建立内标曲线，线性关系良好，相关系数r均大于0.999，在20~50 ug/kg 加标浓度下，33个禁用农药残留物回收率分布在60%~130%之间。该方法适用于《中国药典》2020年版通则2341第五法公示稿规定的药材及饮片(植物类)中禁用农药残留物的准确定量测定。 关键词：三重四极杆气相色谱质谱联用仪陈皮禁用农药残留 《中国药典》是国家保证药品质量可控、确保人民用药安全制定的药品法典，是药品研制、生产、经营、使用和管理都必须严格遵守的法定依据。自1953年第一部《中国药典》发行以来，《中国药典》不断推陈出新，收载品种的安全性、有效性及质量控制水平不断提高。2020年版的修订工作正在进行中，中国药典委员会官网发布的《0212药材和饮片检定通则》公式稿(以下简称0212通则公示稿)，与《中国药典》2015版相比，最显著的变化是加入了药材及饮片(植物类)33种禁用农药的定量限，规定了禁用农药不得检出(不得过定量限)。33种禁用农药在中药材(植物类)中以母体或代谢物形式存在，需要同时检测的母体和代谢物共53个。通则《2341农药残留量测定法》第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》的公 实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8050 NX 三重四气杆气相色谱质谱联用仪 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rxi-17Sil MS， 30 m×0.25mm×0.25um 柱温程序： 柱温程序：60℃(1min) _ 10℃ /min _160℃_ 2℃ /min _230℃_15℃/min _ 300℃ (6 min) 进样口温度：250℃ 进样方式：不分流进样 进样时间：1min 示稿(以下简称2341通则第五法公示稿)针对0212通则公示稿中禁用农药残留物种类，给出具体的测定方法，其中 GCMSMS检测33个禁用农药残留物。 2341通则第五法公示稿中给出多种前处理方法，针对不同中药基质，，可选用不同方法。陈皮是一种常见中药，为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮，基质较为复杂，因此，本文采用2341通则第五法公示稿的4.3固相萃取法的方式一作为前处理方法，采用岛津GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气相色谱质谱联用仪，建立了陈皮中33个禁用农药残留物测定的 MRM 方法。该方法灵敏度高，重复性好，完全满足0212 通则公示稿的限量值的要求。 进样量：1pL 离子化方式：El 离子源温度：250℃ 接口温度：250℃ 载气控制方式：恒压力，146 KPa 检测器电压：调谐电压+0.7 kV 表133个禁用农药残留物、内标的保留时间及 MRM 条件设置 GCMSMS-182 23 狄氏剂 Dieldrin 36.581 60-57-1 263.0>193.0 35 276.8>240.7 10 24 p，p'-DDE p，p'-DDE 36.619 72-55-9 246.0>176.0 30 316.0>246.0 25 25 苯线磷 Fenamiphos 38.346 22224-92-6 303.1>122.0 20 303.1>154.0 30 26 甲基硫环磷 phosfolan- 39.225 5120-23-0 168.0>109.0 15 methyl 227.0>92.0 10 235.0>165.0 235.0>199.0 25 15 27 o，p'-DDT 0，p'-DDT 41.082 789-02-6 201.8>138.7 28 28 除草醚 Nitrofen 41.113 1836-75-5 282.8>253.0 10 235.0>165.0 25 29 p，p'-DDD p，p'-DDD 42.114 72-54-8 237.0>165.0 25 30 beta-硫丹 beta- 42.189 33213-65-9 206.8>171.8 15 Endosulfan 194.8>124.7 30 235.0>165.0 25 31 p，p'-DDT p，p'-DDT 44.474 50-29-3 235.0>199.0 15 32 硫丹硫酸酯 Endosulfan sulfate 46.416 1031-07-8 271.8>236.7 15 271.8>141.0 40 33 磷酸三苯酯 Triphenyl 48.498 115-86-6 326.0>233.0 10 (内标) phosphate 326.0>215.0 25 361.8>109.0 16 34 蝇毒磷 Coumaphos 52.287 56-72-4 361.8>81.0 32 样品前处理 样品处理流程见下图1。 图1样品前处理流程 结果与讨论 3.1基质混合对照溶液谱图和质量色谱图 使用陈皮空白基质配制浓度为 4~10 mg/L的33个农药残留物的基质混合对照溶液，谱图如图2所示，各物质出峰时间详见表1。 图2陈皮基质混合对照溶液全扫描总离子流图(4~10 mg/L) 使用陈皮空白基质配置浓度为1~2.5 ug/L (以对硫磷计)的基质混合对照溶液： (相当于陈皮中禁用农药含量为 0.002~0.005 mg/kg)，其中部分农药组分的 MRM 质量色谱图如图3所示。 图33陈皮基质混合对照溶液中部分禁用农药残留物的质量色谱图(浓度1~2.5 ug/L) 注：由于篇幅所限，只列出了部分禁用农药残留物的质量色谱图 3.2标准曲线 使用陈皮空白基质配制基质混合对照溶液，浓度分别为 1/2.5~20/50 ug/L (各农药组分浓度不同)，每1mL标准溶液加入0.3 mL浓度为0.1 ug/mL磷酸三苯酯作为内标(参照2341通则第五法公示稿)，取1uL进样。以目标农药与内标的浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标，制作内标曲线。因篇幅所限，部分禁用农药组分内标曲线如图4所示，各组分内标曲线线性相关系数见表2。 图4部分禁用农药标准曲线((1-2.5)~(20-50)ug/L) 3.3检出限及重复性 根据1~2.5 ug/L(以对硫磷计)基质混合对照溶液数据，计算方法检出限(3倍噪声计算，噪声计算方式为峰至峰)，并以6次测定的数据考察仪器重复性。各禁用农药残留物检出限及重复性见表2。 表2陈皮基质中33个禁用农药残留物线性相关系数、检出限及重复性数据 3.4加标回收率 在陈皮空白样品中添加浓度为 20~50 ug/kg (0212通则公示稿规定的定量限)，按照样品前处理流程分别处理3份，陈皮中禁用农药残留物的加标平均回收率结果见表3. 表3加标回收率结果 结论 采用岛津 GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气质联用仪测定了2341通则第五法公示稿中规定的药材中33个禁用农药残留物，中药材陈皮采用固相萃取法方式一作为前处理方法，净化效果明显。在1~20 pg/L(以对硫磷计)浓度范围内，禁用农药残留物线性良好，校准曲线线性相关系数均大于0.999；浓度为1~2.5 ug/L的33个禁用农药残留物的基质对照混合溶液重复进样6次，各组分峰面积 RSD 均小于 4.96%，该方法重复性良好；对样品进行加标回收实验，在20~50 ug/kg 加标浓度下 ((0212通则公示稿规定的定量限)，禁用农药残留物回收率分布在60%~130%之间。该方法完全满足《中国药典》通则0212公示稿对药材及饮片(植物类)中33种禁用农药限量值的要求。 岛津应用云 使用岛津公司GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气质联用仪测定陈皮中33种农药残留物，前处理采用岛津（上海）实验器材公司的耗材包，方法简单、重复性好（RSD均小于4.96%），灵敏度高。在0.02 mg/kg的加标浓度下，回收率在60%~130%。实验表明，本方法能够有效地减小基质干扰，提高检测灵敏度及分析的选择性，适合陈皮中33个农药残留物的检测。