血液、血浆中生物检测方案(液相色谱仪)

安捷伦为复杂的生物分析提供全面的消耗品支持 安捷伦 1001101001om mmo 安捷伦生物分析样品前处理及液相分析解决方案 BondElut o Poroshel1220 oroshell 120 靴 Agilent Technologies 安捷伦是全球分析测量行业的领导者，致力于帮助各种机构提升基础研究能力，解开疑难疾病的根本原因，加速新药的发现和研制，提供全面的针对生物分析的样品前处理、液相色谱柱以及液相和质谱仪器系统。安捷伦先进的前处理和色谱柱技术帮助生物分析工作者最大化地减少分析中的困难，更快、更高效地完成分析任务。 生物分析的基质： 生物分析的目标化合物： ·血浆、血清、全血、 ·尿液、唾液等 生物分析的特点： ·样品基质复杂 ·药物浓度低 ·样品量少 ·个体差异大 QQ 助您为生物样品选择合适的样品前处理技术 0p 当我们选择样品前处理时，我们必须考虑什么? 样品基质 ·实验基质越复杂，就需要越强净化能力的前处理技术去除掉干扰基质 ·如果干扰基质去除能力差，会带来严重的残留效应、磷脂堆积、离子抑制以及较差的信号相应 ·如果前处理效果差，会增加样品分析和仪器维护的成本，影响实验的重现性以及色谱柱的柱寿命 目标化合物的特点 ·目标化合物独特的化学特点(如：极性、pKa、溶解性等) ·目标化合物是否有稳定性的局限 检测限的要求 ·根据所用的检测器灵敏度，考虑是否需要在前处理中对样品进行农缩 生物样品前处理技术比较 样品前处理 技术 稀释进样 过滤 常规液液萃取 固相支持 液液萃取(SLE) 蛋白质沉淀 QuEChERS 脂类去除过滤 固相萃取 去除 的干扰物 脂类 否 否 否 一些 否 是 是 是 低聚物 表面活性剂 否 否 否 否 否 否 是 是 颗粒 否 是 否 一些 是 是 是 是 色素 否 否 否 一些 否 是 否 是 极性有机酸 否 否 是 是 否 是 否 蛋白质 否 否 是 是 是 是 是 是 盐 否 否 是 是 否 否 否 是 安捷伦推荐产品 进样瓶/96孔收集盘 Captiva 针筒过滤头 Chem Elut Captiva ND Bond ElutQuEChERS Captiva NDLIPIDS Bond ElutSilica 和PolymericSPE 自动化蛋白质沉淀样品制备实现高通量分析 上 Agilent Captiva ND 无滴落过滤板 Agilent Captiva ND Lipids 无滴落过滤板 对于生物基质中药物的液质分析，样品前处理的蛋白质去除步骤是必不可少的。蛋白质沉淀及离心是最常见的蛋白质去除技术之一。然而，由于涉及多个手工操作步骤，它不适合高通量分析。基于96孔板的全自动蛋白质沉淀系统 Captiva ND， 适用于用有机溶剂沉淀蛋白，能够显著减少高通量分析实验室进行样品制备所需的时间、成本和人力资源。 左图：(Captiva ND Lipids 套件包括 · CaptiVac 真空夹 · Captiva NDLipids 过滤板 ·96孔深孔收集盘 ·可扎透的收集板硅胶盖 右图：1单独显示 CaptiVac 真空夹 ·自动化的简便操作一可在96孔板内进行有机溶剂蛋白质沉淀，不抽真空时不滴落 ·独特的过滤性能一双层双孔径过滤，防止堵塞及样品丢失 ·高效快速的蛋白沉淀和磷脂去除一在几分钟内就可以得到不含颗粒、不含蛋白质的样品，比传统的离心方法快5倍 ·优异的脂类去除能力- Captiva ND Lipids 可去除样品中99%以上的脂类和蛋白，确保痕量分析的精确度和重复性，特别适用于对样品洁净程度及回收率要求高的样品分析 ·延长柱寿命/缩短仪器停机时间一最大程度减小色谱柱污染和系统压力问题，节省仪器维护时间和成本 ·全面的产品形式满足您的需求-96孔板帮您实现高通量和自动化，3mL针筒式助力较大体积样品需求 Captiva ND -优异的蛋白质去除能力(基于Captiva ND 96 孔板的研究数据)：采用图中蛋白质沉淀产品或技术处理100uL 人血浆样品(n=24)后的蛋白质含量测定。 Captiva ND & Captiva ND Lipids为生物分析提供持久稳定的性能 ●一 op Captiva ND 96 孔板均匀的孔间重现性即便采用真空泵形式，也可得到快速一致的样品处理结果，无需正压系统。 安捷伦 Captiva ND 及 Captiva ND Lipids 处理血浆样品的速度适中，无明显堵塞。 100 uL 血浆+300pL 乙腈， 约15cm汞柱平均处理时间(抽真空步骤) Captiva ND 样品前处理的长期稳定性实验中的系统背压数据： 进样数 样品经 Captiva ND 净化之后，5000次连续进样的保留时间数据： 含β阻断剂的人血浆样品经 Captiva ND 净化之后的峰面积稳定性数据： Captiva ND Lipids 处理后的血浆样品，明显减少了脂类造成的离子抑制： 无 Captiva ND Lipids 处理的血浆，柱后注射沙丁胺醇的液质响应(上图)及脂类的液夜响应(下图)。 Captiva ND Lipids 处理后的血浆，柱后注射沙丁胺醇的液质响应(上图)及脂类的液质响应(下图)。 0 0 增强型脂质去除产品 Captiva EMR-Lipid 与其它样品前处理方法不同，它是一种能够选择性去除复杂基质中脂质并挑战血浆等高脂肪含量样品的独特吸附剂，因此您可以在不损失分析物的前提下去除脂质。 ·氧化硅支持基质上的 EMR吸附剂提供高效基质脂质去除 ·1mL填充小柱和96孔板 ·样品通过式的基质清除，与 PPT样品处理流程的完美结合 ·防渗透设计与深层过滤确保柱内 PPT 及沉积物过滤的高效可行性 仅使用蛋白沉淀对血清样品前处理的方法验证数据 血浆中常规药物不同前处理方法验证数据，及定量的准确度和精密度对比。 (QC 添加浓度： LLOQ= 0.5 ng/mL； Low QC= 2 ng/mL， Mid QC=50 ng/mL， High QC= 150 ng/mL，HLOQ=200 ng/mL) 固相支持液液萃取 Chem Elut简单高效自动化 QQ Chem Elut 是一种经济型、用途广泛的吸附剂，可以用于诸如血浆、血清、全血和尿等生物样品的快速样品前处理。具有如下特点： ·高纯度惰性硅藻土吸附剂 Hydromatrix ·强极性表面 ·高比表面积吸水模式 ·适于生物体液中的小分子药物的萃取 ·超净的聚丙烯管 ·快速处理 ·简易操作 ·与自动化操作兼容 ·可批量处理样品 ·提高分析结果重复性 ·避免发生乳化现象 无需活化和淋洗 Agilent Chem Elut""-pre-assembledcartridges Agilent Combilut M-96-well plate ●一0 安捷伦拥有包括最常用的 C18、C8在内的将近50种不同吸附功能的填料、不同形式的柱形和不同规格的96孔板，为生物分析中多样化的药物种类提供最优的选择性。 在下表中，我们列出了适合于生物流体中药物分析的 Agilent Bond Elut 固相萃取(SPE)系列产品选择指南。 方法 Bond Elut 填充吸附剂 分析物 活化溶剂 洗脱溶剂 应用举例 反相非极性萃取 C18、C8、C2、CH-环己基、PH-苯基、CN-封端 疏水基团：芳香环、脂肪烃 甲醇、水或缓冲液 甲醇、乙腈、酸性甲醇、非极性溶剂(乙酸乙酯、氯仿、正己烷) 弱极性或非极性药物 阳离子交换 SCX- (强)、PRS-丙磺酸(强)、CBA-羧酸 (弱) 阳离子：氨基、嘧啶 低于分析物 pKa 值1-2个 pH 单位的缓冲液 碱性缓冲液(高于分析五pKa 值1-2个pH单位)或者高离子强度缓冲液 儿茶酚胺、碱性药物 阴离子交换 SAX-季胺(强) PSA-伯胺/仲胺(弱) NH，-胺丙基(弱))、 DEA-二乙基胺丙基( 弱) 阴离子：羧酸、磺酸、磷酸 高于分析物 pKa 值1-2个 pH位位的缓冲液 酸性缓冲液(低于分析物 pKa 值1-2个pH单位的 缓冲液 有机酸、维他命、脂肪酸、磷酸 共价萃取 PBA-苯硼酸 带有顺式邻二醇官能团的化合物 甲醇、水或缓冲液 酸性缓冲液、酸性甲醇 核苷酸、糖类、儿茶 酚胺 专业固定相 Certify -(C8+SCX) 阳离子药物 甲醇、水或缓冲液 强酸、强碱、含有酸或碱的有机混合物 碱性药物、中性药物 Certify lI - (C8+SAX) 阴离子药物 甲醇、水或缓冲液 强酸、强碱、含有酸或碱的有机混合物 酸性药物 AccuCAT - (SCX+ SAX) 阳离子阴离子 缓冲液 酸性或碱性缓冲液、高离子强度的缓冲液 有机酸、儿茶酚胺、碱性药物 TCA-三环抗抑郁药 疏水基团(芳香环、脂肪烃) 甲醇和水 甲醇、碱性甲醇 三环抗抑郁药苯(并)二氮 高级聚合物 Plexa 疏水基团 甲醇和水 甲醇 酸性、碱性和中性药物| Plexa PCX 疏水基团、阳离子 化合物 甲醇和水 甲醇、乙腈、酸性和碱性的甲醇/乙腈混合溶剂 碱性化合物 Plexa PAX 疏水基团、阴离子化合物 甲醇和水 甲醇、乙腈、酸性和碱性的甲醇/乙腈混合溶剂 酸性化合物 0一0 优异的填料颗粒完整性，节省您的分析时间，减轻您的工作负荷 Agilent Bond Elut Plexa 产品显示出优异的填料颗粒完整性，不存在粒径过大、填料颗粒破损或细小的颗粒，这些特点可有效避免筛板堵塞及样品损失。 填料粒径分布窄，能够提高流畅性，减少堵塞的发生 Agilent Bond Elut Plexa 与 Waters Oasis 填料粒径分布和流速比较如图2和3所示，两种产品粒径均值相近，然而， Bond Elut Plexa填料的粒径分布符合高斯分布，显示了更好的流畅性和更佳的重复性。而Waters 聚合物填料粒径分布范围宽，并含有破损及粒径低于 10 pm的细小填料颗粒。宽粒径分布的填料会降低流速，提高柱堵塞风险，降低分析精密度(降低柱间及及间的重现性)。 Agilent Bond Elut Plexa SPE 产品具有独特的羟基化表层、疏水性内层和优良的聚合物结构，为复杂的生物分析提供稳定可靠的分析结果。 ·更佳的流畅性：填料粒径均匀、分布窄，确保在固相萃取操作过程中保持更佳的流畅性 ·优异的柱间重现性： Plexa 吸附剂填料利用专利聚合技术生产，粒径分布极窄，并且可以消除细小填料颗粒的产生 ·更少的时间和样品消耗：无细小颗粒，有效减少了 SPE 及筛板堵塞的风险，并减少样品损失 ·更加可靠的数据：专利的自动化筛板安装和实时生产流程质量监控，使填充吸附剂柱床中的沟槽(或死体积)最小化，有效防止分析物穿漏及回收率波动 羟基化表面(而非氨基官能团表面)排除了蛋白质结合，可最大限度减小离子抑制，有效阻止基质干扰。 两种聚合物填料选择可涵盖广泛种类和性质的被测物： · Agilent Bond Elut Plexa(非极性聚合物)是从不同基质中广泛萃取酸性、中性和碱性被测物的理想选择。 ·Agilent Bond Elut Plexa PCX 是一种强阳离子交换剂，具有复合吸附特性，它适合萃取和纯化生物体液中的碱性和非极性被测物。Bond Elut Plexa PCX 具有和 BondElut Plexa 同样优异的粒径分布和出众的填料颗粒完整性。 根据目标化合物的性质，我们推荐用以下流程做为起始方法，再根据实际情况对方法进行优化和调整。 第一步 制造实心内核 Poroshell 120 填料内核具有非常光滑的表面和均一的粒径，整体粒径分布集中。因此可以获得填充更紧实的柱床以及比全多孔填料更高的效率。 第二步 包覆多孔外壳 安捷伦采用单步法(即采用与制造传统ZORBAX 色谱柱相似的凝聚技术)制造多孔外壳这种独特的单步法工艺提高了产量，使柱间重现性优于其他供应商的产品。 第三步键和固定相 Poroshell 120 固定相系列已扩展至能够匹配 ZORBAX 系列固定相，在方法开发方面具备更强的灵活性和可扩展性。 专利制作技术，造就均匀的填料粒径 全多孔填料和 Poroshell 120 填料的粒分分布对比：这幅图表明Poroshell 120 色谱柱最终填料粒径的分布最集中，这是内核填料粒径集中分布的直观结果。 单步法的简单工艺，造就出色的批次重现性 制造工艺越简单，色谱柱一致性越出色： 从五个批次之间的对比结果可以得出，单步孔层工艺创造出了高重现性的色谱柱。Poroshell 120 颗粒采用安捷伦发明的专利性多孔颗粒制作工艺制成。不同于传统的多层制造工艺， Poroshell120色谱柱采用单步式凝聚工艺制造，保证最终获得的颗粒更加均匀、色谱结果更加可靠。 Poroshell120 EC-C18，3.0×100 mm， 2.7 um(部件号695975-902)，来自5个不同批次 ●一0 0 Q op 样品检测任务重? Poroshell 120 多孔外层和实心内核限制了扩散距离并提高了分析速度，而窄粒径分布同时提高了柱效，更好地分离邻近洗脱峰，提高 LC/MS准确度与鉴定性能。分析速度和分离度可媲美亚2um， 而背压可降低约40%。 简单样品前处理后，样品仍然比较脏? Poroshell 120 2.7 pm 粒径色谱柱配有2 pm 筛比，因此不易发生堵塞，保证较长的色谱柱寿命，这在生物分析应用中分析脏的生物样品时尤其重要。适用于 UHPLC 的快速保护柱也可进一步延长色谱柱寿命，同时不会降低 UHPLC的性能。 样品浓度低，需要提高灵敏度? Poroshell 120 由于其特殊的核壳设计提高了柱效，减小了峰宽，使得色谱峰的响应灵敏度比常规5 um 色谱柱提高了2到5倍。高柱效同时可改善色谱分离，帮助减小复杂生物样品的基质效应。 需要多种键合相、多种规格便于方法开发及不同仪器的需求?目前12种键和相供您灵活选择，帮您实现完美的分离 三种粒径选择(4pm /2.7 pm /1.9 pm)， 使您实验室的液相仪器物尽其用 要求稳定的质量和优异的批次间重现性? Poroshell 120色谱怕由专利性单步多孔壳层工艺制造而成，这极大地减少了色谱柱之间和批次之间的细微差异。 Poroshell 120 液相色谱柱多种固定相更适合于生物分析中的方法应用 OP Poroshell 120 EC-C18 和 C8： ·小分子药物开发和筛选的通用色谱柱 -CH ·专利技术造就更长的色谱柱寿命和稳定性 Poroshell 120 HPH-C18 和 C8 ·方法开发和筛选的合适选择 ·为碱性药物提供更强的保留及完美峰形 ·较宽的 pH耐受范围，尤其高 pH条件下具有极佳的稳定耐用性(pH2~11) ACN ACN ACN ACNH，0 ·高纯硅胶基质的亲水作用色谱固定相 ·适合强虽性药物的 HILIC模式分析 Poroshell 120 SB-C18 和 C8 ·低pH条件应用的绝佳选择 ·为酸性液质分析条件提供稳定的柱寿命 Poroshell 120 SB-Ag专利固定相是极性化合物和高水性条件分析的理想选择。 Poroshell 120 PFP Poroshell 120 Bonus-RP极性嵌入式的 Bonus-RP改善了峰形，尤其适合于低和中等 pH条件下极性化合物及碱性化合物的分离。 Poroshell 120 Phenyl-Hexyl该固定相可替代苯基官能团的选择性，为苯基结构化合物提供良好的选择。 为卤代化合物、苯环上的位置异构体及极性分析物的分离提供了另一种选择性。 Poroshell 120 EC-CN与 ZORBAXEclipse XDB-CN 类似，为极性化合物提供另一种选择性。 -0Q op 生物分析样品 样品制备 样品分析 ·血液 · Captiva ND 系列蛋白质沉淀板 ·血浆 ·Poroshell 120 EC 系列双重封端良好峰型 ·Chem Elut 固相支持液液萃取板 ·血清 ·尿液 · Bond Elut Plexa 系列固相萃取 ·Poroshell 120 HPH系列高pH流动相稳定耐用 ·组织 小柱和96孔板 ·Poroshell 120 SB 系列低pH流动相稳定耐用 ·生物液体 ·Poroshell 120 HILIC 高纯硅胶亲水应用 安捷伦生物分析推荐方法包 Captiva 自动化蛋白质沉淀板 Agilent Chem Elut Captiva ND 96 孔板，5/包 A5960002 Captiva ND Lipids 96 孔板，5/包 A59640002V Captiva EMR-Lipid 96孔板，5/包 5190-1001 Combilute 96 孔板 65401507 Bond Elut Plexa 聚合物 SPE 规格 Plexa Plexa PCX Plexa PAX 30mg，2mL，96孔板，1/包 A3969030 A3968030 A3967030 Poroshell 120 2.7pm液相色谱柱 规格(mm) Poroshell 120EC-C18 Poroshell 120SB-C18 Poroshell 120HPH-C18 Poroshell 120Bonus-RP Poroshell 120SB-Aq Poroshell 120PFP Poroshell 120HILIC 2.1x50 699775-902 689775-902 689775-906 699768-901 689775-914 699775-408 699775-901 2.1x100 695775-902 685775-902 695775-702 695768-901 685775-914 695775-408 695775-901 3.0x50 699975-302 689975-302 699975-502 699968-301 689975-314 699975-308 699975-301 3.0x100 695975-302 685975-302 695975-502 695968-301 685975-314 695975-308 695975-301 此手册只包含了安捷伦适用于生物分析的主要前处理和色谱柱产品，并未包含所有适用的产品。更多产品信息，请联系安捷伦消耗品销售或安捷伦客户服务中心。 了解更多信息 www.agilent.com 查找当地的安捷伦客户中心 www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278 400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn ( 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 ) ( ◎安捷伦伦技(中国)有限公司，2017 ) ( 2017年9月12日，中国出版 ) 5991-7928CHCN Agilent Technologies 为复杂的生物分析提供全面的消耗品支持安捷伦是全球分析测量行业的领导者，致力于帮助各种机构提升基础研究能力，解开疑难疾病的根本原因，加速新药的发现和研制，提供全面的针对生物分析的样品前处理、液相色谱柱以及液相和质谱仪器系统。安捷伦先进的前处理和色谱柱技术帮助生物分析工作者最大化地减少分析中的困难，更快、更高效地完成分析任务。