美西律片中美西律检测方案(毛细管电泳仪)

应用化学CHNESE JOURNAL OF APPL IED CHEM ISTRY第25卷第11期2008年11月Vol 25No 11Nov 2008 第11期黄宝美等：高效毛细管电泳安培法测定美西律片剂中美西律的含量1331 高效毛细管电泳安培法测定美西律片剂中美西律的含量 黄宝美“ 姚程炜" 边清泉“3王志国“ 莫金垣 (“绵阳师范学院化学系 绵阳；中国空气动力研究与发展中心设备设计及测试技术研究所 绵阳；中山大学化学与化学工程学院 广州 510275) 摘 要 建立了片剂中美西律含量的高效毛细管电泳安培检测方法。探讨了缓冲溶液种类、浓度、酸碱度及操作电压、进样时间等对检测的影响。以NaB0，NaoH (NaB4O，浓度为 30 mmol/L)为电泳介质，在15kV高压，pH=8.5的弱碱性条件下，采用柱端安培法检测了美西律的含量。线性范围为5×105~5 X102g/L，Y=856.2+123.3c， r=0.999 4，检出限为0.01mg/L。 关键词 毛细管电泳，美西律，安培检测 中图分类号：0657.8 文献标识码：A 文章编号：1000-0518(2008)11-1330-04 美西律 (Mexiletine Hydrochloride)属Ib类抗心律失常药(化学名：1-(2，6二甲基苯氧基)-2两胺盐酸盐，结构式如 Scheme 1所示)，主要用于急、慢性室性心律失常。目前，有关美西律含量的测定方法有Nafion修饰玻碳电极法，高效液相色谱法2~5]，，固定 pH滴定法16.71：，毛细管电泳紫外检则法，光度法.高效毛细管电泳法是近年来发展较快的一种新型分析方法，其继承和发展了高效液相色谱的优点，是根据带电质点的有效迁移率差异而将其分离。紫外检测法的缺点是光程短，灵敏度低，仪器比较昂贵，而毛细管电泳安培检测法(CE-AD)对具有电化学活性的药物成分分析具有明显的优越性，比紫外检测法灵敏度高、分离效率高、设备可以自己组装，便宜等特点，本文建立了毛细管电泳安培检测法(CE-AD)测定美西律的含量，测定结果令人满意，该方法尚未见文献报道。 Scheme 1 Structure of mexiletine hydrochloride 1 实验部分 1. 1 仪器和试剂 毛细管电泳安培检测系统(CE-AD)为自组装；CZE30PN10/MCN22型高压电源(American SpelmanHigh Voltage Electronics Comoration)；CES98-AD-B型安培检测器(北京彩陆公司)；三电极体系：Pt片辅助电极、碳纤维电极和饱和甘汞电极。毛细管电泳数据站(中山大学电分析室研制)；pH S-3C型精密酸度计(上海电光器件厂)，石英毛细管柱(45 cm ×75 um)。美西律对照品(中国药品质检所)，美西律片剂(上海朝晖制药厂)。 磷酸二氢钾，磷酸氢二钠，三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)，硼酸 (H，BO)，硼砂，甲醇，邻苯二甲酸氢钾(KHP)，NaOH，以上试剂均为分析纯；所用水为二次蒸馏水。 1. 2 对照品溶液、样品溶液和缓冲溶液的制备 称取美西律对照品0.1000g，用适量二次蒸馏水溶解，置100mL容量瓶中，加二次蒸馏水稀释至刻度，得1.000×10g/mL的对照品溶液。 取盐酸美西律片研细，精密称取细粉适量加二次蒸馏水溶解，超声震荡 30 min，置 100 mL容量瓶 ( 2008-01-10收稿，2008-05-10修回 ) ( 通讯联系人：莫金垣，男，教授，博士生导师； Email： hbm790117@yahoo. com. cn； 研究方向：毛细管电泳分析 ) 中，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀，用前用醋酸纤维膜过滤得样品溶液。 分别制备100 mmol/L的硼砂，币酸，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠，Tris的储备液，各取适量配成不同浓度比的体系。 1.3 实验方法 进样前，毛细管依次用0.1mol/L的 NaOH、二次蒸馏水和缓冲溶液各冲洗约5min，每2次进样之间用缓冲液冲洗 2min，以保证其重现性。本实验用碳纤维电极，饱和甘汞电极，Pt对电极为三电极体系。采用重力进样方式，进样高度20 cm，时间 10 s，分离毛细管长度45 cm，内径 75 um，分离电压15 kV 2 结果与讨论 2.1 工作电极及其电位的选择 分别用Pt电极、Au电极和碳纤维电极作循环伏安图发现，美西律只在碳纤维电极上有响应。美西律的循环伏安图如图1所示。从图中可看出，美西律在0.4V左右出现1个不可逆氧化峰。在毛细管电泳仪上考察了美西律的动态伏安曲线如图2所示。结果发现，从0.2~+0.6V峰电流不断增加，+0.6V达到最大，电位向正移，峰电流有所减小，所以本文选择+0.6V为最佳检测电位。 图1 美西律的循环伏安图 图2 美西律的动态伏安图 Fig1Cyclic voltammogram of mexiletine hydrochloridebuffer solution：NazB4O，NaOH， pH=8. 5 concentration of mexiletine hydrochloride： 5 mg/L Fig2 Hydrodynam ic voltammogram ofmexiletine hydiochloridebuffer solution： NazB40，NaOH， pH=8. 5 separation voltage：15 kV； inject hight 20 cm；inject tie： 10 s 22 缓冲溶液的选择 分别考察了 KHP、NaOHNaB4O、Tris-H，BO，磷酸盐4种不同缓冲溶液体系对分离的影响。发现其中磷酸盐缓冲溶液基线噪音和基线偏移都较大；KHP体系和 Tris-H BO中峰电流较小，峰拖尾严重，灵敏度较低；而NaOHNaB4O，缓冲溶液中峰形较理想，灵敏度较高。因此，本文选择 NaOHNaB4O，缓冲溶液体系。缓冲溶液浓度不仅影响分离时间也会影响安培响应。因此，选择合适浓度的缓冲溶液对毛细管电泳安培检测非常重要。实验发现，随着 B4O，浓度增大，迁移时间延长。这是因为离子强度大，压缩了双电层，导致 Zeta电位降低，电渗流减小，从而迁移速度减小。当浓度大于30mmol/L时，焦耳热明显增大，区带展宽严重，基线噪音也增大，综合考虑分离时间对峰形的影响，本文选择30mmol/L的硼酸盐为缓冲溶液。 2.3 溶液 pH的选择 对于石英毛细管，溶液 pH值增高时，表面电离多，电荷密度增加，管壁 zeta电势增大，电渗流增大；考察了缓冲溶液pH值分别为8.0、8.5、9.0、9.5、10.0时，对电泳迁移时间和峰形的影响，发现现着 pH值增大，迁移时间减小，综合考虑峰形、迁移时间、柱效的影响，本文选择溶液的 pH=8.5. 2.4 有机改性剂的选择 有机改性剂对于改善峰形和提高分离度都很重要。实验发现，在缓冲液中加入甲醇可以使峰形变得尖锐，有助于提高分离度，但是甲醇的含量太高，会因甲醇挥发引起缓冲溶液组成变化，从而引起基线漂移。因此，选择甲醇浓度为2%作为有机改性剂。 2.5 分离高压及进样时间对分离的影响 分离高压是毛细管电泳的驱动力。电压越高，组分迁移越快，分析时间越短，但是电压升高，使柱内焦耳热增加，易发生气泡割断现象，对工作电极也有一定影响。在一定范围内，柱效随着电压增大而增大，过了极点，随着电压升高，焦耳热的影响更大，柱效反而降低。实验采用瞬间加压的恒电压工作方式，考察了(10~30kV)高压对迁移时间和柱效的影响(如图3)，结果选择电压为15kV. 图3 分离高压对迁移时间(a)和理论塔板数(b)的影响 Fig 3 Effect of separation voltage on (a)migration time and (b) theoretical plate 采用虹吸进样，在一定进样高度下，进样时间决定进样量的多少，我们选择进样高度为20 cm，考察了进样时间对分离检测的影响。发现进样时间太短，达不到检测器的灵敏度，若进样时间超过10 s，进 样量增大，引起样品扩散，导致峰形扩宽拖尾，故选择进样时间为10s. 2.6 方法的精密度和线性范围 在上述实验条件下，将美西律标准品进样6次，迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为2.1%和3.5%。美西律在 0.05~50mg/L范围内峰高(Y)与质量浓度(c)之间呈现良好的线性关系，回归方程为：Y=856.2 +123.3c， r=0.999 4，检出限为0.01 mg/L. 2.7 样品测定及加标回收实验 图4 美西律标准品(a)和片剂(b)的毛细管电泳图 在最佳条件下，样品的毛细管电泳图如图4所示。图中主峰为美西律的峰，次峰为杂峰，标准品和样品中美西律的峰型和出峰时间基本一致，定性的说明了片剂中的主峰为美西律的峰。按照本文1.3节方法制备样品，用外标法定量，测定平均回收率为99.4%，结果见表111。 Fig4 Electropherogram of mexiletine hydrochloride(a)standard and (b) sample buffer solution：NaOHNazB407，NazB407=30 mmol/L； pH=8. 5； separation voltage=15 kV； injection height=20 cm； injection time=10 s 表1样品的回收率结果 Table 1 Sam ple recovery results Backgmund/(mg·L) Added/(mg·L) Found/(mg·L) Recovery rate/% 2.5 1.0 3.48 98.0 2.5 5.0 7.46 99.2 2.5 10.0 12.6 101.0 ( 参 考.5文 献 ) ( LENG Zong-Zhou(冷宗周)，HU Xiao-Ya(胡效亚)， YU S u -Hua(于素华). J Y a n gzhou Teachers College(扬州师院学报)[J]，1 9 94，14(4)：36 ) ( 2 LV JunLong(吕俊隆)，HUANGDeBao(黄德葆)， YAN Xiao-Feng(颜小锋)，ZHAO Yi(赵奕) ，RUAN Zou-Rong(阮邹荣).M odem ApplM edi(现代应用药学)[J]，1988，5(3)：28 ) ( XIJing-Ying(奚菁颖)， SONG Zhong-Juan(宋钟娟)， CHEN Yan(陈焰)， TONG Ru-Jing(童如镜). S h anghaiM edi(上海医药)[J]，1999，20(7)：20 ) ( L AO Xin-L in (廖新麟)，HE HuiQing(何慧青)， FENG Yi-Ping(冯艺萍). ) . Pham J Chinese PLA (解放军药学学报) [J]，2004，20(5)：381 ) ( 5 Kaushik S，Alexander K J L iquid Chrom atogr & Relate d Tech[J]，2003，26(8)：1 2 87 ) ( 6 XU Gang(徐刚). Chinese JAnalLab(分析试验室)，1997，16(5)：17 ) ( 7 WANG Yun-Fei(王允飞)，LIJi-Hong(李继红). Chen Eng(化学工程师)[J]，20 0 5，116(5)：21 ) ( LU Chang-Hai(刘长海)，ZHANG GuoQing(张国庆)，WANG Chun-Yan(王春燕)， ZHU XiuMei(朱秀美)，LANGDong-Sheng(梁东升)，JISong-Gang(纪松岗)，CHAI Yi-Feng(柴逸峰). C h inese J AnalLab(分析试验室)[J]，2005， 24 (12)：34 ) ( C Aydogmus Z， Cetin SM， Tosunoglu S 1 T urkish J Chem [J]，2002，26(6)：839 ) Determ ination ofM exiletine Hydrochlor ide by CapillaryElectrophoresis with Am perom etric Detection HUANGBaoMef， YAO ChengWer， B AN QingQuan， WANG Zhi-Guo"， MO Jin-Yuan (Chen ical D eparm ent ofM ianYang N om al University， M ianyang；Facility Design and Instrum entation Institute ofCARDC， M ianyang； School of Chen istry and Chen ical Engineering， Zhongshan University， Guangzhou 510275) AbstractMexiletine hydrochloride was detemm ined by cap illary electrop horesis with ampermetric detection(CE-AD). The pH， type， concentration of buffer， applied voltage and sample injection tme were selected asthe investigation variables Under the op tim ized condition： a running buffer composed of30 mmol/L NazB4O，at a pH value of 8.5， separation voltage 15 kV， injection time 10 seconds and detection potential at 0.6V，a linearity exists between peak height(Y) and mass concentration ofMexiletine hydrochloride(c) in a range of0.05~50 mg/L， r=0.999 4， and the detemm ination limit is 0.01 mg/L. Keywords cap illary electrophoresis， mexiletine hydrochloride， amperometric detection ◎China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net