乙酞氨基苯酚（扑热息痛）中主要成分含量检测方案(毛细管电泳仪)

2005年12月Dec. 2005第21卷第6期Vol.21· No.6分析科学学报JOURNAL OF ANALYTICAL SCIENCE 第6期分析科学学报第21卷 文章编号：1006-6144(2005)06-0658-03 非水体系毛细管电泳-紫外检测法测定对乙酰氨基苯酚的研究 李利军*1，黄文艺2，程 昊?，孔红星1，吴健玲? (1.广西工学院生物与化学工程系，广西柳州545006；2.广西大学化学与化学工程学院，广西南宁530005) 摘 要：本文报道了用非水相体系高效毛细管电泳-紫外检测法测定对乙酰氨基苯酚的新方法；考察了运行电压、非水相介质和电解质等因素的影响。在25℃下，以50mmol/L NaOH 的乙醇溶液为电泳缓冲介质，30 mmol/L乙酸钠的乙醇溶液为样品溶剂；选择重力进样30 s，运行电压-25 kV，及检测波长250 nm。测定对乙酰氨基苯酚的线性范围为5.2~52 pg/mL；检出限为 2.88 _g/mL；RSD 为 2.34%。本法应用于维C银翘片中对乙酰氨基苯酚的测定，结果满意。 关键词：对乙酰氨基苯酚；维C银翘片；非水相体系；毛细管电泳；紫外检测 中图分类号：O657.8；R971+.1 文献标识码：A 对乙酰氨基苯酚(APAP)，药物名扑热息痛。它具有解热、镇痛的功效，在中西药及其制剂中使用广泛，适用于感冒引起的发热、头痛、关节痛、风湿病的骨骼肌疼痛以及各种神经痛、偏头痛、痛经等症。其含量测定对于研究药物的药理作用、临床疗效、合理用药、开发资源、质量控制等具有重要意义。对乙酰氨基苯酚的含量的测定方法有分光光度法、薄层层描法2、气相色谱法3、液相色谱法4等。分光光度法操作简单，但样品的前处理要求严格。薄层扫描法、气相色谱法、液相色谱法等亦存在各自的不足之处5。 毛细管电泳因具有高效、快速、分离模式多样等诸多优点，是近年来发展最快的分离分析方法之一。非水相体系毛细管电泳除具有毛细管电泳的一般优点外，还可拓拓分析领域、增加可优化参数、提高选择性。它尤其适合于在水相介质中溶解度小、难以分离离析和干扰严重的物质的分离分析。本文以50mmol/LNaOH 的乙醇溶液为缓冲介质，30 mmol/L NaAc 的乙醇溶液为样品的溶剂，用非水体系毛细管电泳紫外检测对对乙酰氨基苯酚进行分离测定。方法有样品处理简单、基线稳定、噪音小、峰型好的优点，用于维C银翘片中对乙酰氨基苯酚含量的测定，结果满意。 实验部分 1.1 仪器和试剂 ACS2000 型毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司)，负电源：0~30kV可调，毛细管：75um，总长45 cm，有效长度 30 cm；UV-2102PC型紫外-可见分光光度计(UNICO instruments Co.，LTD)；DL-60D超声波清洗器(上海之信仪器有限公司)。 对乙酰氨基苯酚标准品(中国药品生物制品检定所科技开发处)；无水乙醇(广东新宁化工厂)；乙酸钠(温州试剂化工厂)；氢氧化钠(广州市新港化工有限公司)。以上所有试剂均为分析纯。 维C银翘片(广西医药研究所制药厂、宜昌民康药业有限公司)。 1.2 电泳条件及操作步骤 电压：-25kV；进样方式：重力进样；进样高度：12.5 cm；进样时间：30s；检测波长250 nm；环境温 ( 收稿日期：2005-03-08 通讯联系人：李利军 ) ( 基金项目：广西教育厅科研基金(No.2000392)；广西自然科学基金(No.0481019) ) 度：25℃。 毛细管的处理：每天实验前依次用1 mol/LNaOH 水溶液、二次蒸馏水、无水乙醇分别冲冼5min，每次进样前用缓冲液冲洗5 min，实验4h后更换缓冲液。实验结束后，依次用无水乙醇、二次蒸馏水冲洗，并用二次蒸馏水浸泡过夜。实验所用的溶液进柱前均用0.45 pm 的滤膜过滤，并经超声波脱气处理。 2 结果与讨论 2.1 分离条件的忧化 2.1.1 电泳介质的选择 分别试验了甲醇、丙酮、吡啶、乙醇等有机溶剂。结果表明，乙醇作乍电电介质，效果较好。但乙醇的导电能力弱，因此需添加电解质使电泳介质有一定的导电能力。对乙酰氨基苯酚为弱弱性分子，难以电离，因此，强碱或强酸条件下更利于电泳分离。有文献7.8报道，以50~80 mmo/LNaOH溶液作为电泳介质，都能得到令人满意的实验结果。本实验考察了 10~60 mmol/L 不同浓度 NaOH 乙醇溶液，结果表明，浓度为 50 mmol/L时效果最为理想。实验选择以50 mmol/LNaOH乙醇溶液为缓冲介质。 2.1.2样品溶液中电解质的选择 实验发现，若对乙酰氨基苯酚以纯无水乙醇溶解，电泳分析时会出现无电流的状态，而加入电解质后不再出现这种情况。试验考察了氢氧化钠、乙酸铵和乙酸钠三种电解质。结果表明，以乙酸钠为电解质，样品峰形好，且无拖尾现象。因此选用乙酸钠作为样品溶液的电解质。同时，乙酸钠浓度试验发现，以30 mg/L 乙酸钠时最佳。因此以30 mg/L乙酸钠为样品的电解质。 2.1.3 检测波长的选择 以 30 mg/L 乙酸钠的乙醇溶液作参比液，对10 mg/L 对乙酰氨基苯酚+30mg/L 乙酸钠的乙醇溶液在200~400 nm 波长之间进行扫描，可知，对乙酰氨基苯酚在30 mg/L乙酸钠的乙醇溶液中的最大吸收波长为250 nm，实验选用 250 nm 为检测波长。 2.1.4 分离电压的选择 考察了电压为一15~30kV时的影响。试验发现：电压低时，基线稳定，但样品的分析时间长，峰形宽；随着电压的增加，样品的保留时间缩短，峰形窄，分离效果好，但基线噪音增大。为保证较短的分离时间和较好基线，实验选用一25kV作为分离电压。 2.2 线性范围与检出限 准确称取0.026g对乙酰氨基苯酚标准品，用乙醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，制成520 ug/mL的标准贮备液。分别取标准贮备液0.1、0.2、0.3、0.5、0.8、1.0 mL于10 mL容量瓶中，用30 mg/L乙酸钠的乙醇溶液定容，配成不同浓度的对乙酰氨基苯酚溶液。按上述的试验方法，测定不同浓度的峰面积，由峰面积(Y)与浓度(X，pg/mL)得线性方程：Y=677.18X-1618.3，其线性范围：5.2~52 pg/mL，R=0.998，按信噪比S/N=3计算，检出限为2.88 pg/mL。对 10.4 pg/mL对乙酰氨基苯酚的30 mg/L乙酸钠乙醇溶液平行测定5次，RSD 为 2.34%。 2.3 样品分析 取维C银翘片5片，去糖衣后研磨成粉，混匀后，精确称取0.3克，用30mL无水乙醇浸泡24h，超声波振荡30 min，砂芯漏斗过滤，残渣加人适量的无水乙醇再用超声波振荡 30 min 后过滤，合并滤液，然后用无水乙醇定容至50mL，得提取液。 分别移取提取液0.1 mL 置于10 mL容容量瓶中，用30 mg/L乙酸钠的乙醇溶液定容，制成样品溶液。在上述条件下测定样品中对乙酰氨基苯酚的含量，测得广西、宜昌两厂家的维C银翘片中对乙酰氨基苯酚的含量分别为 0.296 g/g和0.284g/g。标准样品电泳图(见图1(a))。维C银翘片提取液电泳图(见图1(b)，1(c))。 2.4 回收率的测定 往0.1 mL的维C银翘片提取液中分别加人不同量的对乙酰氨基苯酚，用30 mg/L 乙酸钠的乙醇定容后，用本法进行回收率试验。结果见表1。 由表1可知，对广西医药研究所制药厂和宜昌民康药业有限公司两个厂家的维C银翘片中对乙酰氨基苯酚测定的RSD分别为1.01%和4.1%；加标回收率分别在97.2%~101.7%和97.4%~101.1%之间，RSD 均低于5%。结果表明，该方法具有较理想的重现性和准确度，可应用于维C银翘片中对乙酰氨基苯酚的测定。 Fig. 1 Electropherograms (a) the standard sample of parecetamol，(b) the extraction of parecetamol (Yichang)， (c) the extraction of parec-etamol (Guangxi)； peak identity： 1 parecetamol，2 impurity TableI The result of recovery experiments Analyte Added(pg/mL) Found(pg/mL) RSD(%) Recovery(%) 5.20 5.29 4.9 101.7 The extraction of parecetamol 10.40 10.33 0.8 99.3 (Guangxi) 15.60 15.16 1.9 97.2 5.20 5.26 4.4 101.1 The extraction of parecetamol 10.40 10.45 1.3 100.5 (Yichang) 15.60 15.20 3.3 97.4 ( 参考文献： ) ( [1 ] 3 王 萍，崔 崇.中国药品标准[J]，2002，3(5)：24. ) ( 张丽明，王彩侠，白 鸥，等.中国药学杂志[J]，2002，37(12)：96 0. ) ( 张雅青，王 栋，李 平，等，药物分析杂志[J]，1991，11(6)：355 . ) ( 刘 怡，李瑞明，陈君远，等.中国临床医药研究杂志[J]，2003，(97 )：101. ) 简淑娟.中国药师[J]，2002，5(5)：298. 据数方万ANODATSalimimoosavi H，Gassidy R M. 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Linear calibration was obtained in the range 5.2~52 gmL- for parecetamol，and thecorrelation coefficient was 0.998. The detection limit was 2.88 pg*mL-1. The recoveries of parecetamolranged from 97.2% to 101.7% Key words： Parecetamol； Non-aqueous； Capillary electrophoresis； UV detection