芬布芬中主要成分含量检测方案(毛细管电泳仪)

分析科学学报JOURNAL OF ANAL YTICAL SCIENCE第23卷第5期Vol.23 No.52007年10月Oct. 2007 第5期李利军等：非水毛细管电泳法测定芬布芬含量的研究第23卷 文章编号：1006-6144(2007)05-0551-04 非水毛细管电泳法测定芬布芬含量的研究 李利军*，吴峰敏，冯 军.，喻来波，吴健玲 (1.广西工学院生物与化学工程系，广西柳州545006；2.广西大学化学化工学院，南宁530005；3.河南科技大学化工与制药学院，河南洛阳471003) 摘 要：本文建立了非水体系高效毛细管电泳法测定芬布芬的新方法。考察了运行电压、非水介介和电解质等因素的影响。选择15 mmol/LNaAc-25 mmol/L十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)为电泳介质，甲醇为溶剂，紫外检测波长281 nm，分离电压-25 kV ，13 min 内可以实现芬布芬的分离检测。在优化条件下，药物中辅料不干扰芬布芬的测定，加标回收率为98.2%~103.1%。方法简便、快速，可用于芬布芬片中芬布芬含量的测定。 关键词：毛细管电泳；芬布芬；非水相体系 中图分类号：0657.8 文献标识码：A 芬布芬为一种长效的非甾体抗炎止痛药，能抑制环氧酶的活性，使前列腺素的合成减少，适用于类风湿性关节炎、风湿性关节炎、骨关节炎、脊柱性关节病、痛风性关节病的治疗，还可用于牙痛、手术后疼痛及外伤性疼痛。芬布芬含量的测定方法有酸碱滴定法、高效液相色谱法[2.3]和紫外分光光度法[4.5] 毛细管电泳法因具有高效、快速、多模式、低成本、污染少等诸多优点，是近年来发展最快的分离分析方法之一。非水毛细管电泳法作为毛细管电泳的一个分支，是目前研究比较活跃的领域。非水体系毛细管电泳除具有毛细管电泳法的一般优点外，还具有拓宽分析领域、增加可优化参数、提高选择性等潜在的优点16-10]，并越来越引起了人们的重视。与水相体系相比，有机溶剂由于具有不同物理和化学性质，使其在选择性、分离效果、分离速度、分离度和稳定性等方面具有优势，，尤其适合于在水相介质中溶解度小、难以分离分析和干扰严重物质的分离分析。目前尚未见非水毛细管电泳法测定芬布芬含量的报道。 本研究采用非水毛细管电泳法对芬布芬进行测定。由于芬布芬在水中几乎不溶解，所以本实验选择甲醇作为非水溶剂，在紫外检测波长281 nm处进行测定。方法具有样品处理简单，工作电流低，基线稳定，噪音小，峰形好，结果准确度、精密度高等特点。该方法应用于芬布芬片剂中芬布芬含量的测定，并与中国药典方法对照，结果满意。 实验部分 1.1 仪器与试剂 ACS2000 型高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司)；毛细管：内径75 um，总长 45cm，有效长度30 cm；UV-2102PC型紫外-可见分光光度计(UNICO Instruments Co.，L TD)；DL-60D 超声波清洗器(上海之信仪器有限公司)。 芬布芬对照品(中国药品生物制品检定所)溶液：称取芬布芬对照品0.0456 g，加甲醇定容于10.00mL容量瓶中，得浓度 4.56 mg/mL的对照品溶液。甲醇，乙酸钠，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)，BR，乙酸铵，柠檬酸(Cit)，磷酸，磷酸二氢钠均为分析纯试剂。 ( 收稿日期：2006-11-13 修回日期：2007-05-14 ) ( 基金项目：广西自然科学基金(桂科自No.0146001)；广西教育厅科学研究基金(桂教科[2000]392) ) ( 通讯联系人：李利军，男，博士，教授，主要从事分析化学研究. ) 芬布芬片为长春大政国际经贸(集团)制药有限责任公司产品。 1.2 仪器工作条件 电压：-25kV；进样方式：重力进样；进样高度：12.5cm；进样时间：30s；检测波长：281nm；环境温度：25℃ 1.3 实验方法 每天实验前毛细管依次用1 mol/L NaOH溶液、重蒸水、甲醇分别冲洗5 min ，每次进样前用缓冲液冲洗 5 min ，每实验4h后更换缓冲液。实验结束后毛细管依次用甲醇、重蒸水、NaOH溶液冲洗，并用重蒸水浸泡过夜。实验所用溶液进柱前均用0.45um 的滤膜过滤，并经超声波脱气。 2 结果与讨论 2.1 检测波长的选择 检测波长的选择对灵敏度有较大的影响。本试验以甲醇溶液作参比液，对10 mg/L芬布芬的甲醇溶液在200~400 nm波长之间进行扫描，得到紫外光谱图如图1.由图1可知，芬布芬的甲醇溶液的最大吸收波长为281nm，因此本实验选用281nm为检测波长. 2.2 非水溶剂的选择 有机溶剂的种类对电泳淌度、电渗流等参数有很大的影响12]。要想获得较好的分离，所选用的有机溶剂的紫外吸收要小。一般情况下在短波长能获得较低的检出限。在众多有机溶剂中，甲酰胺及 Fig.1 UV spectra of fenbufen 其衍生物是少有的几种介电常数与粘度之比较高的有机溶剂，但是这类有机溶剂易水解、在紫外区有吸收且毒性比较大。甲醇的紫外吸收小，其介电常数与粘度之比为59.4，且具有适中的电渗流，能满足电泳的要求，同时甲醇具有强的形成氢键的能力，对分析物和电解质具有较强的溶解性，因此本实验选择甲醇为溶剂。 2.3 支持电解质的选择 大多数电解质为无机盐，其在有机溶剂中的溶解度很小，这就使得非水介质体系支持电解质的选择受到限制131。本实验中，试验了 Cit-Tris、Hs PO4-Tris、NaAc、NHAc体系，经过实验比较，Cit-Tris、Hs PO4-TrisN H4Ac 作支持电解质，峰形较差，出峰时间延长。而用NaAc 作电解质，基线平稳，噪声小，峰形好，出峰时间较短，所以本试验选择NaAc 为支持电解质。 实验同时还考察了不同浓度的 NaAc 对电泳的影响。从图2可以看出，随着电解质NaAc 浓度的增加，芬布芬出峰时间先减小再增加，15 mmol/L时迁移时间最短。而且随着 NaAc 浓度的增加，峰宽增加，同时噪声增大，基线稳定性下降。综合考虑，选择15mmol/LNaAc 为支持电解质。 2.4 表面活性剂的选择 添加适当的表面活性剂可以改善电渗流，提高分离效果和检测灵敏度。本实验选择十六烷基三甲基刊化铵(CTAB)作为表面活性剂，考察了CTAB 的加入量对体系分离检测效果的影响。 Fig.2 Effect of the concentration Na Acon the migration time 从图3可以看出，随着CTAB的加入量的增加，出峰时间提前，峰形明显改善，灵敏度提高，但是较高浓度的 CTAB会增加电流，使基线噪音增大。综合比较，选择CTAB的浓度为25 mmol/L。 BGS：10~30 mmol/L NaAc of methyl alco-hol solution containing 25 mmol/LCTAB；applied voltage， - 20 kV；detection ：281 nm；temperature ：25℃. 2.5 分离电压的选择 实验分别考察了-25~-30 kV分离电压下芬布芬的迁移速度。实验结果表明，迁移时间随着分离电压的升高而缩短，同时峰形变窄；但是过高分离电压下，电泳体系产生的热量增加，引起峰展宽，基线噪音变大等负面影响；如果分离电压过小，则会延长分析时间，达不到快速分离的目的。为获得较高的分离 Fig. 3 Effect of the concentration ofCTAB on migration time BGS：20 mmol/L NaAc of methyl alcohol so-lution containing 5~30 mmol/LCTAB；ap-plied voltage， - 20 kV； detection ware-length：281 nm；temperature：25℃. Fig.4 Electropherograms of fenbufen standard(a) and fenbufen tablet(b) 2.7 样品分析和加标回收实验 取芬布芬片10片，精确称量，研磨成粉，精确称取 0.2681 g(相当于一片的含量)，置于250 mL 容量瓶中，加适量甲醇超声提取1h，残渣加入适量的甲醇并用超声波提取1h后过滤，合并滤液，甲醇定容至250mL。 在选定的实验条件下，取芬布芬片提取液进行适当稀释后进行测定，根据线性回归方程计算出芬布芬片的含量为0.1494 g/tablet(标示量为0.15 g/tablet)。将对照品溶液与适当稀释的样品溶液按不同比例混合，测定标准加入回收率，测得回收率为98.2%~103.2%，结果如表1所示， Table 1 Results of recovery tests Analyte Analyte quantity/(mmol/L) Detected quantity/(mmol/L) RSD(%，n=6) Recovery(%) Fenbufen 1.14 1.12 0.9 98.2 2.28 2.29 0.6 100.3 4.56 4.71 0.4 103.2 ( 参考文献： ) ( [1] 1 Stat e Pharmacopoeia Commission of China(国家药典委员会).Ch. P(2005) Vo1.2(中华人民共和国药典.2005年版.二 部)[M].Beijing(北京)：Chemical Industry Press(化学工业出版社)，2005：226. ) QIAN Zhongyi(钱忠义).Jiangsu Pharmaceutical and Clinical Research(江苏药学与临床研究)[]，2006，14(3)：178.34 ( Yoshihiro K，KohjiN，Nobuhiro L ，et al. Byoin Yakkugaku[J]，1989 ，15(4)：292. ) ( GE Wenlong(葛文龙)，Heilongjiang Medicine(黑龙江医药)[J]，2005，18(5)：316. ) ( WU H ong mei(吴洪梅)，WANGJing(王 静) ，LI Bing (李 冰). Chemistry and Adhesion(化学与粘合)[J] ， 1998， (2)：121. ) ( [6] S Salimimoosavi H ， Gassidy R M. Anal. Chem.[J]，1996，68(2)：293. ) 1Leung GN W，Tang H PO，Tso T S C，et al.J. Chromatogr. A[J]，1996 ，738：141.图例 ( Fujiwaro S，Horda S. Anal. Chem. [J ] ，1987 ，59：487. ) ( B alchunus A T ， Sepaniak MJ. A nal. Chem. [J ]，1988 ，60：617. ) ( [10] S park A D T ， Lisi P，Huynh D T， e t al . J. Chromatogr. A[J]，1991，542：459. ) ( [ 1 1] Marja-Liisa Riekkola ，Matti Jussila，Porras Simo P，Valko I s tvan E . J. Chromatogr.A[ J ] ， 2000，892：155. ) ( [12] HAN Surqin(韩素琴).Journal of Shanxi Teachers University(山西师范大学学报)[J]，2 0 0 5 ，19(3)：61. ) ( [13] K enadler E，Gassner B. Anal. Chem.[J]，1 9 90，62：431. ) Determination of Fenbufen in Tablets bvNon-aqueous Capillary Electrophoresis LILi jun*'， WU Feng min3， FENGJun’， YU Lai-bo'， WU Jian-ling’ (1. Deptartment of Biological and Chemical Engineering， Guangxi University of Technology，Liuzhou， Guangxi 545006；2. College of Chemistry and Chemical Engineering， GuangxiUniversity， Nanning 530005；3. Deptartment of Chemical Engineering and Pharmacy，Henan University of Science and Technology， Luoyang， Henan 471003) Abstract： The new method for the determination of Fenbufen in Fenbufen tablets by non-aqueouscapillary electrophoresis ((NACE) was developed.1.lThe determination conditions were as follows：Methanol buffer medium containing 15 mmol/L sodium acetate-25mmol/L hexadecyltrimethylammonium(CTAB)3)was used as runing buffer； the applied voltage was--25.0 kV， and the detectionwavelength was 281 nm. Under these NACE conditions， Fenbufen could be separated within 13 min.Linear calibration curve was obtained in the range of 0.912~18.24 ug/mL for parecetamol with acorrelation coefficient of 0.9995. Detection limit was 0.18 ug/ mL. The developed method was applied tothe determination of parecetamol in tablet with recoveries ranging from 98.2%~103.1%. Key words： Fenbufen；Non aqueous system； Capillary electrophoresis China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net