通窍鼻炎片中欧前胡素和异欧前胡素检测方案(毛细管电泳仪)

藥材Journal of ChineseMedicinalMaterials 第31卷第7期2008年7月·1081• 毛细管电泳法测定通窍鼻炎片中欧前胡素和异欧前胡素的含量 刘基柱，刘 丹，龚红全，毋福海 (广东药学院，广东广州510224) 摘要 目的：建立毛细管电泳法同时测定通窍鼻炎片中欧前胡素和异欧前胡素含量的方法。方法：采用未涂层弹性融硅石英毛细管柱 55 cm X75pm D，有效长度47 cm；以 20 mmol/LNaH， PO4 +100 mmol/L SDS+80%甲酰胺溶液(pH7.12)为运行缓冲液；分离电压15 kV；重力进样5s(高度15 cm)；检测波长254 nm。结果：以盐酸小檗碱为内标，欧前胡素、异欧前胡素的线性范围分别为8.0~40.0 pg/ml(r=0.9987)、4.0~20.0pg/ml(r=0.9990)，平均回收率分别为101.0%、101.8%。结论：该法简便、快速、准确可靠，可用于通窍鼻炎片的质量控制研究。 关键词 毛细管电泳；通窍鼻炎片；欧前胡素；异欧前胡素 中图分类号：R286.02 文献标识码：A 文章编号：1001-4454(2008)07-1081-02 通窍鼻炎片是由苍耳子、防风、黄芪、白芷等7味中药材组成的复方制剂，具有散风固表、宣肺通窍的功效。临床主要用于治疗风热蕴肺、表虚不固所致鼻塞、慢性鼻炎、过敏性鼻炎、鼻窦炎等病症。该产品现行标准只收载了定性鉴别方法。白芷是本方的主要组分，含有欧前胡素、异欧前胡素等，有文献报道2.31测定通窍鼻炎片中欧前胡素含量，但同时测定欧前胡素和异欧前胡素两种成分含量尚未见报道。为进一步控制该制剂质量，本文采用毛细管电泳法同时测定了其中欧前胡素和异欧前胡素的含量。 仪器和试药 CL1030型高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司)；德国 KNAUER K-2501紫外可见检测器；HW-2000色谱工作站2.17版(南京千谱软件有限公司)；OR DN MODEL 828型pH计(美国)；DL-360超声波清洗器(宁波石浦海天电子仪器厂)；未涂层弹性融硅石英毛细管柱(河北锐年永沣色谱器件有限公司)。 欧前胡素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110826-200511)；异欧前胡素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110827-200407，供鉴牙用，经HPLC面积归一化法测定，纯度为98.8%)：盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110713-200609)。通窍鼻炎片(中山市中智制药有限公司，每片0.36g)。磷酸二氢钠、十二烷基磺酸钠、甲酰胺、NaOH、甲醇等均为分析纯，水为重蒸水。 2 方法与结果 2.1 溶液的制备 2.1.1 内标贮备液：精密称取盐酸小檗碱一定量，加甲醇制成 200 ug/ml的内标贮备液。 2.1.2 对照品贮备液：精密称取欧前胡素对照品16.0mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密称取异欧前胡素对照品 16.2mg置 200ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。 2.1.3 供试品溶液：取本品20片，精密称定，研碎，取粉末约1.5 g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声提取1h，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。取续滤液4.0ml至5.0ml量瓶中，加标贮备液0.5ml，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45um滤膜过滤，作为供试品溶液。 2.1.4 阴性对照液：取处方组成中除白芷外的其余成分制成不含白芷的阴性对照品，按2.1.3项下的制备方法处理得阴性对照液。 2.2 电泳条件 未涂层弹性融硅石英毛细管管，75um D，总长 55 cm，有效长度47 cm；以 20 mmol/L NaH， PO4 +100 mmol/L SDS+80%甲酰胺溶液(pH7.12)为电泳介质；室温下15kV恒压电泳分离，254 nm紫外检测；重力方式进样，进样时间为5s.毛细管柱在使用前依次用0.1 mol/LNaOH溶液、水、电泳介质各冲洗约5min。每两次进样间用电泳介质冲柱2min。当基线不稳，出小杂峰时更换缓冲液，换液后电平衡5min左右。在此条件下，对照品、样品色谱图如图1所示. ( 基金项目：广东省自然科学基金资助项目(5002841) ) ( 作者简介：刘基柱(1964-)，男，讲师，专业方向：中药鉴定与中药质量控制研究； Tel： 13610328291， Email： liujzhg d @126. com。 ) ( 通讯作者：毋福海(1961-)，男，教授，主要从事现代分析方法在中药质量控制中的应用研究。 ) 图1 对照品、样品及阴性的毛细管电泳色谱图A.对照品 B.样品 C.阴性 1.内标 2.欧前胡素 3.异欧前胡素 2.3 方法学考察 2.3.1 标准曲线制备：分别吸取一定量的欧前胡素、异欧前胡素、盐酸小檗碱对照品贮备液，加甲醇稀释成含欧前胡素浓度为8.0、16.0、24.0、32.0、40.0ug/ml，异欧前胡素浓度为 4.0、8.0、12.0、16.0、20.0pg/ml与内标溶液浓度为 20pg/ml的溶液。依次重力进样5s，每个浓度测定3次以上。以对照品与内标峰面积的比值为纵坐标(Y)，对照品溶液浓度(C)为横坐标进行线性回归，分别得回归方程YI=0.0606C +0.0983(r=0.9987)；Yn=0.0573C +0.0297(r=0.9990)。表明欧前胡素浓度在8.0~40.0ug/ml异欧前胡素浓度在4.0~20.0ug/ml范围内与峰面积的线性关系良好。 2.3.2 精密度试验：取浓度分别为24.0、12.0ug/ml的欧前胡素与异欧前胡素对照品溶液，重力进样5s，连续测定5次，记录峰面积。结果欧前胡素Y的RSD=2.20%，异欧前胡素Y的RSD=2.65%。表明仪器精密度良好。 2.3.3 稳定性试验：取供试品溶液(批号：20070133)在0、2、4、6、8、10、12 h，分别重力进样5s，记录峰面积。结果欧前胡素 Y的 RSD=2.06%，异欧前胡素Y的RSD=3.41%。表明供试品溶液在12h内基本稳定。 2.3.4 重复性试验：取同一批号(批号：20070133) 样品6份，按2.1.3项下方法处理并测定。结果欧 前胡素的平均含量为 0.597 mg/g，RSD=2.89%(n=6)；异欧前胡素的平均含量为0.234mg/g，RSD=2.76%(n=6)。表明分析方法精密度良好。2.3.5 加样回收率试验：精密称取通窍鼻炎片(批号：20070133)共6份，加入相应量的欧前胡素和异欧前胡素对照品，按2.1.3项下方法处理并测定，计算回收率。欧前胡素的平均回收率为 101.0%，RSD=3.45%；异欧前胡素的平均回收率为101.8%.RSD=3.58%。结果表明方法准确、可靠。2.4 样品测定 取通窍鼻炎片样品3批，按2.1.3项下方法处理后测定，记录峰面积，代入回归方程计 算样品中欧前胡素与异欧前胡素的含量。结果见表 1。 表1 样品测定结果(n=3) 批号 欧前胡素 RSD 异欧前胡素 RSD 含量 (mg/片) (%) 含量(mg/片) (%) 20070133 0.203 2.88 0.081 2.81 20070132 0.221 3.07 0.063 2.12 20070134 0.221 3.12 0.065 2.72 3 讨论 因为香豆素类成分难溶于水，且为中性，无法用毛细管区带电泳法进行分离检测，因此本文采用非水胶束电动毛细管色谱法，以20 mmol/L NaHPO，+100 mmo1/L SDS+80%甲酰胺溶液(pH7.12)为电泳介质，室温下15 kV恒压电泳分离，同时测定通窍鼻炎片中欧前胡素和异欧前胡素的含量。该法具有分离效果好、快速、简便、价廉等优点，可用于该产品的质量控制。 ( 参 考 文 献 ) ( [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部.北京： 化学工业出版社，2005：589. ) ( [2]李立荣，雷玉萍，帅帅.高效液相色谱法测定通窍鼻炎 片中欧前胡素的含量.中南药学，2006，4(6)：434-436. ) ( [3]梁春华，哈永红，张莉，等.反相高效液相色谱法测定通窍鼻炎片中欧前胡素的含量.中国药业，2005，14(3)： 42. ) ( [4]贾敏如，王梦月，金曲摸，等.HPLC测定13种白芷中欧 前胡素和异欧前胡素的含量.华西药学杂志，2003，18 (5)： 3 61-362. ) ◎China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved http：//www.cnki.net