大黄中有效成分检测方案(毛细管电泳仪)

·691·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 2001年第32卷第8 期 胶束电动毛细管色谱分离大黄中有效成分的研究 尚小玉，袁倬斌* (中国科学院研究生院，北京 100039) 要：目的 分离出大黄中4种有效成分：大黄酚、大黄素、土大黄苷和大黄酸。方法 采用胶束电动毛细管色谱法(MECC)、缓冲溶液为 50 mmol/L H：BO，-NaOH 含 20 mmol/L SDC， pH 值为10，分析电压17kV.结果 4种成分在 5 min 内全部分离。结论 本法简便、快速、结果令人满意。 关键词：胶束电动毛细管色谱；大黄；蒽醌类 中图分类号：R294.1 文献标识码：B 文章编号：0253-2670(2001)08-0691-02 Isolation of active constituents in rhubarb by micellarelectrokinetic capillary chromatography SHANG Xiao-yu， YUAN Zhuo-bin (Graduate School， Chines Academy of Sciences， Beijing 100039， China) Abstract： Object To isolate and identify the four active constituents， chrysophanol， emodin，rhaponticin and rhein in rhubarb. Methods Micellar electrokinetic capillary chromatography (MECC)with a buffer solution of 5 mmol/L HBO，-NaOH containing 20 mmol/L of sodium deoxycholate (SDC)(pH=10) was used for their separation at a voltage of 17 kv. Results The four active constituents werecompletely separated within 5 min. Conclusion This method was found to be simple and rapid and gavesatisfactory results. Key words： micellar electrokinetic capillary chromatography (MECC)； rhubarb； anthraquinones 大黄是我国常用中药，具有泻下、抗菌等作用。近年来，高效毛细管电泳在中药有效成分的分离分析中发挥着重要的作用。有用胶束电动色谱法采用不同的缓冲溶液体系分分出大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素和大黄素甲醚5种成分1~。对于土大黄苷分离仅限于薄层层析法，土大黄苷为二苯乙烯的衍生物，存在于劣质大黄中，常以土大黄苷的存在与否作为大黄质量的定性鉴别的手段。本文采用胶束电动毛细管色谱法对大黄素、大黄酚、大黄酸和土大黄苷进行了分离，通过对缓冲溶液浓度、pH、表面活性剂浓度和外加电压的优化，得出了比较满意的分离条件。在此条件下，对生大黄样品进行了分离，且可简便地检验出优劣品质的大黄。 i实验部分 2.1 材料和试剂：大黄素、大黄酚、大黄酸和土大黄苷标准品购自中国药品生物制品检定所。生大黄样品购于河北安国，生大黄样品蒽醌衍生物的提取方 法照文献+进行。脱氧胆酸钠(SDC)购自北京市海淀区微生物培养基制品厂，硼酸、磷酸二氢钠和氢氧化钠均为分析纯。 2.2 食品和分析条件：北京新技术所1229 型HPCE Analyser 和中科院研究生院应化所ACS2000型毛细管电泳仪，空心熔融石英毛细管柱(40cm×50 pm)，购于河北永年光纤厂，柱上紫外检测(254nm)，恒压17kV，电进样5s。分离用缓冲溶液为 50 mmol/L H，BO，-NaOH(pH 10)含20mmol/L SDC。标准品用无水乙醇和磷酸二氢钠配制。 2 结果与讨论 2.1 缓冲溶液 pH影响：缓冲溶液pH是影响毛细管电泳分离的关键因素，pH的改变，将引起电渗流(EOF)、峰形及分辨率的变化。本文在pH为 9.5~11.5的范围内考察了缓冲溶液pH 值对分离情况的影响，4种成分在 pH 10 条件下，峰形较好，而且 ( 收稿日期：2000-11-13 金项目：国家自然科学基金(29675022，29875027)，国家“九·五”科技攻关项目(96-A23-01-06)和中科院长春应用化学研究所电分析化学开放研究实验室基金(OC 2000001)资助项目。 ) ( 作者简介：尚小玉(1974-)，女，河南省河涧人，毕业于河北工业大学化学工艺专业，现在中国科科学院研究生院攻读博士学位，从事分析 化学专业。 ) 全部分开。如图1所示。 1-大黄酚 2-大黄素 3-土大黄苷 4-大黄酸 81大黄中4种成分的电泳图 2.2 缓冲溶液浓度的选择：在恒定pH下，增加缓冲溶液浓度，可以降低电渗流(EOF)，在恒电压下，迁移时间随缓冲溶液浓度增加而加长，从而改善分离度；而且，缓冲溶液浓度大，缓冲容量也大。但是，浓度太大，会产生焦耳热效应，引起区带增宽。因此，在25~75 mmol/L 浓度范围内，选择了在最佳pH条件下能分离4种成分的最大浓度为 50 mmol/L。 2.3 表面活性剂浓度的选择：表面活性剂 SDC 的加人可以控制 EOF 大小与方向，达到增强分离选择性，缩短分析时间，提高分离度的目的。图2给出了在pH10 条件下，SDC 浓度的不同对迁移时间的影响。由图中可以看出，迁移时间随着 SDC 浓度增大而增长。在 SDC 浓度为 20 mmol/L 4种成分能够得到完全分离。SDC浓度过大，缓冲溶液粘度增大，易使毛细管堵塞。 A-大黄酸B-土大黄苷CC-大黄素 D-大黄酚 图2 SDC 浓度对迁移时间的影响 2.4 外加电压的优化：外加电压增大，迁移时间变短，减少了分析时间。本文考察了 pH 10， 缓冲溶液 50 mmol/L (SDC 20 mmol/L)，13~17kV范围内电压变化对迁移时间的影响，如图3所示。在17kV电压下，4种成分能够完全分开。电压太大，会产生大量的焦耳热，导致分离效率下降。因此，我们选择17kV为操作电压。 A、B、C、D-同图2 图3 分析电压对迁移时间的影响 3 结论 本文用胶束电动毛细管色谱法分离了大黄中的4种有效成分：大黄酚、大黄素、土大黄苷和大黄酸，并对分离条件进行了优化。筛选出的分离条件如下：缓冲溶液为 50 mmol/L HBO：-NaOH(pH 10)含20mmol/L SDC，分析电压 17kV。在上述条件下，4种成分完全分开，且峰形较好。生大黄样品中土大黄苷峰型不明显，在非正品大黄中大部分均含土大黄苷，而正品大黄中不含土大黄苷。该法简便、快速，为中药大黄的质量控制提供了新方法。 ( 参考文献： ) ( [1] 宗玉英，余清堂，朱志强，等·胶束电动毛细管色谱分离和测定几种大黄含量[J].药学学报，1995，30(8)：495-598. ) ( [2] Sheu S j . C hen HR. De t ermination of f i ve major an- thraquinoids i n Chines herbal p r eparations b y micellar elec-trokinetic capillary electrophoresis [J ] . Ana l Chim Acta， 1995，309：361-367. ) ( [3] Chai YF， J i S G， W u Y T， et al. Th e sep a ration of an- thraquinone dervativea of r h ubarb by mic e llar ele c trokineticcapillary choromatograpby [ J]. B iomedical Chromatography， 1998，12：193-195. ) ( [4] Ji S G， Chai Y F， WuYT， e t al. Se p aration and determina- tion of anthraquinone d erivatives i n rhubarb and i t s prepara-tions by micellar electrokinetic capilary chromatography [ J ].Biomedical Chromatography， 1998， 12：335-337. ) ( [5] 肖颖华，李文清，郭丽娜，等.中成药中土大黄苷的几种鉴别法 比较[J].中成药，1999，21(11)：605-606. ) ( [6] 何丽一，罗淑荣，中草药中蒽衍生物分析方法的研究中国 大黄属植物成分的含量及含量测定[J].药学学报，1980，15 (9)：555-562. ) 数据