LabSolutions MD自动筛选pH值实现分析方法的高效开发

目标化合物在不同流动相pH值下的保留行为反映了其pKa值。在方法开发的初始阶段进行流动相pH筛选，以评估pH对分离度的影响。然而，pH筛选需要配制多个不同pH值的流动相，该过程的自动化可以提高方法开发的效率并避免配制错误。由于LabSolutions MD有pH筛选的专用数据库和流动相混合功能，因此可以通过在线配制任何pH浓值的流动相来实现整个pH筛选过程的自动化。本文介绍了如何使用LabSolutions MD自动化pH筛选功能以分离12种小分子药物，从而更有效地评估最佳pH。C190-E296 Technical ReI Report LabSolutions MD 自动筛选 pH值实现分析 方法的高效开发 由于流动相的 pH值会影响离子化合物的保留时间，因此确定最佳 pH 值是开发 LC 方法的重要组成部分。pH筛选需要制备多种不同 pH 值的流动相。然而，手动配制这些流动相不仅耗时，而且很容易出现错误。自动 pH 筛选过程提高了方法开发的效率和分析的可靠性。本文 介绍了 LabSolutions MD (支持方法开发的专用软件)的使用示例，对流动相pH值 (pH2.5至8.5)自动进行了筛选，评估了分离12种小 分子药物的最佳 pH。 关键词： LabSolutions MD， pH 筛选， AQbD， 分析方法开发，方法建立 1.背景 目标化合物在不同流动相 pH值下的保留行为反映了其pKa 值。在方法开发的初始阶段进行流动相 pH筛选，以评估 pH对 分离度的影响。然而， pH筛选需要配制多个不同 pH 值的流动相，该过程的自动化可以提高方法开发的效率并避免配制错误。由于 LabSolutions MD 有 pH筛选的专用数据库和流动相混合功能，因 此可以通过在线配制任何 pH浓值的流动相来实现整个 pH筛选 过程的自动化。本文介绍了如何使用 LabSolutions MD 自动化 pH 筛选功能以分离12种小分子药物，从而更有效地评估最佳 pH。 2. LabSolutions MD 自动 pH 筛选 LabSolutions MD 通过设置每个参数(例如流动相和色谱柱)自动生成实验设计(图1，步骤①至⑤)。单击即可选择流动相 和色谱柱，且二者均可在分析过程中自动切换。表1显示了分离 12种小分子药物的 pH筛选条件。在 LabSolutions MD 的操作过 程中，点击流动相 pH值(图1)，通过流动相混合功能，使pH 值从2.5每次升高0.5直至8.5，自动制备特定 pH值的13种流 动相(见表1)。该功能可显著减少手动配制不同 pH值流动相 的工作量且有效减少配制错误。此外，这13种不同 pH 值的溶液 均由三种类型的流动相(储备液)制备(见表1中的*1)，与 传统手动配制所有 pH 值的流动相相比，该方法可使用较少的流 动相瓶，减少了液体的浪费。 图1 pH筛选实验设计的创建步骤 表1分析条件 系统： NexeraTM X3 (方法开发系统) 样品：12种小分子药物(见图2) 流动相： 泵A-水溶液 (20 mmol/L 磷酸钠水溶液)*1 A1) pH 2.5 A6) pH 5.0 A11) pH 7.5 A2) pH 3.0 A7) pH 5.5 A12) pH 8.0 A3) pH 3.5 A8) pH 6.0 A13) pH 8.5 A4) pH 4.0 A9) pH 6.5 A5) pH 4.5 A10) pH 7.0 泵B-乙腈 色谱柱： Shim-pack ScepterTM C18-120 (100 mm × 3.0 mml.D.， 1.9 um) 分析条件： B相浓度 ： 5%(0 min)→80% (8.01-11 min)→5%(11.01-15min) 柱温 ： 40℃ 流速 ： 0.7 mL/min 进样体积 ： 1.0uL 检测 ： Max plot 220-400 nm (SPD-M40， UHPLC 流通池) *1 流动相混合功能用于自动混合如下三种类型的流动相(储备液)来 自动制备不同的 pH (A1至A13)。 (1)20 mmol/L 磷酸水溶液 (2) 20 mmol/L 磷酸二氢钠水溶液 (3) 20 mmol/L 磷酸氢二钠水溶液 *2FP/N 227-31013-03 3. pH 筛选结果和汇总 含有12种小分子药物的样品在不同pH值(pH2.5至8.5)下的色谱图如图2所示。由于乙酰水杨酸(峰1)含有一种杂质 (峰2)，所以共计13个色谱峰。结果表明，部分化合物在 pH 2.5时共流出，但所有化合物在 pH 7.0、7.5和8.5时均分离。 LabSolutions MD 可以根据以下公式1对每个pH值的分离模式进 行定量评估和排序，以确定最佳 pH， 而无需依赖用户经验。 (评价值)=P×(Rs+RS+…Rs)..(Eq.1) 评价值的计算方式为检出峰数(P)乘以所有峰的分离度(Rs)之和。图3按从高到低的顺序列出了通过 pH筛选获得的评估值。结果显示 pH 7.5 为最高值。 使用 pH筛选功能进行方法开发不仅能够检查不同 pH值 流动相下每种化合物的保留行为变化，还能够推测未知化合物 的 pKa 值。因此，可以根据每种化合物的估计 pKa 值来设置pH 值，从而开发出耐用性好的分析方法，这也有助于提高流动相 pH筛选阶段后方法开发各个阶段的效率，如优化阶段和耐用性 评估阶段。本文仅展示了方法开发过程中自动流动相 pH 筛选过 程，但 LabSolutions MD 也可用于提高优化阶段和耐用性评估阶 段的的分析效率。如需了解更多详细信息，请参阅技术报告“通 过 LabSolutionsTM Md 软件进行质量源于设计的高效方法开发 (C190-E284)”。 使用此二维码访问技术报告 C190-E284。 图3 各pH 值按评价值的排名(从高到低) min 图2 小分子药物 pH 筛选结果(12种) 岛津企业管理(中国)有限公司 岛津(香港)有限公司 http：//www.shimadzu.com.cn 用户服务热线电话： 800-810-0439 免责声明： *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。如有变动，恕不另行通知。