LC-MS/MS检测人参再造丸中的马兜铃酸Ⅰ

本文使用岛津超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪，建立了人参再造丸中马兜铃酸Ⅰ的检查方法。马兜铃酸Ⅰ在0.4~20 ng/mL浓度范围内线性良好，相关系数r在0.998以上。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可为相关从业人员提供参考。SSL-CA23-249 Excellence in ScienceLCMSMS-798 LC-MS/MS 检测人参再造丸中的马兜铃酸Ⅰ LCMSMS-798 摘要：本文建立了使用岛津超高效液相色谱三重四极杆质谱联用测定人参再造丸中的马兜铃酸Ⅰ的方法。马 兜铃酸Ⅰ在0.4~20 ng/mL 浓度范围内线性良好，相关系数r在0.998以上。在高、中、低三个浓度下，化合 物的保留时间和峰面积的 RSD% 分别在 0.049%~0.082%和2.263%~4.712%之间，仪器精密度良好。加标浓 度为 0.4 ng/mL 的样品，回收率为 94.8%。该方法灵敏度高，，分析时间短，结果准确，可为相关从业人员提 供参考。 关键词：：三重四极杆液质联用仪人参再造丸马兜铃酸Ⅰ 技术特点： 心本方法检测马兜铃酸Ⅰ的灵敏度高、分析时间短。 小本方法前处理简单，回收率高。 人参再造丸具有祛风化痰、活血通络、益气养血 的功效，一般用于治疗中风口眼歪斜、半身不遂、手 足麻木等症，该药由人参、广藿香、檀香、玄参、细 辛等56味中药制成。通常马兜铃属、细辛属中药材中 均含有不同程度的强致癌物马兜铃酸Ⅰ。因此，建立 一种分析检测马兜铃酸Ⅰ的方法，对于药品安全监测 有很大意义。 本文使用岛津高效液相色谱仪和三重四极杆质谱 仪，建立了人参再造丸中马兜铃酸Ⅰ的检查方法。结 果表明，该方法具专属性好，灵敏、稳定、线性范围宽、回收率高的特点，可供相关检测人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 LCMSMS 液质联用系统。具体配置为： 系统控制器：SCL-40自动进样器SIL-40C X3输液泵LC-40D X3质 谱 仪：LCMSMS 柱温箱CTO-40C色谱工作站：LabSolutions Ver. 5.114 在线脱气机： DGU-405 1.2分析条件 液相条件 色谱柱主： Shim-pack Velox C18(100 mm×.2.1 mm l.D， 1.8 um)岛津(上海)实验器材有限公司，P/N： 227-32007-03 流动相 A 相-1 mmol/L乙酸铵0.1%甲酸水溶液 B相-乙腈 柱 流 温 40°℃ 速 0.3 mL/min 进样体积 1uL 洗脱方式： 梯度洗脱，，初始浓度为B相20%，时间程序见表1 表1梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value 8.00 Pumps Pump B Conc. 80 12.00 Pumps Pump B Conc. 80 12.10 Pumps Pump B Conc. 20 15.00 Controller Stop 质谱条件 离子/源：ESI，正离子模式 DL 管 温度：100°℃ 接口电压：4kV 加热模块温度：400°℃ 雾1化气：氮气3.0 L/min 接口温度：300℃ 干燥气：氮气 15 L/min 扫描模模式：多反应监测(MRM) 加热热气：空气5L/min MRM参参数：见表2 碰撞童气：氩气 (270kPa) 表2 MRM 参数 化合物 化学分子式 CAS NO. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bais(V) CE(V) Q3 Pre Bais(V) 298.00* -13.0 -13.0 -21.0 马兜铃酸Ⅰ C17H1NO7 313-67-7 359.10 296.00 -14.0 -15.0 -14.0 *表示定量离子 样品前处理 取人参再造丸适量，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞， 称定重量，超声处理(功率500W，频率40 kHz) 30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 结果与讨论 3.1专属性 空白溶剂(70%甲醇) 和0.4 ng/mL马兜铃酸Ⅰ的 MRM 色谱图如图1所示，色谱峰分离良好，通道无干扰。 Q359.10>298.00(+) 1.02e3 图1 空白溶剂(红色)和0.4ng/mL (蓝色)马兜铃酸Ⅰ的 MRM 色谱图 3.2校准曲线和检出限 用70%甲醇溶液配制 0.4、1、2、4、10、20 ng/mL六个浓度的马兜铃酸Ⅰ标准溶液，按照1.2中的分析 条件进行测定，采用外标法定量。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制外标法校准曲线，结果如图2所示，线性方程、线性范围和相关系数见表3。 图22马兜铃酸Ⅰ标准曲线 表3 马兜铃酸Ⅰ的校准曲线 化合物 校准曲线 相关系数R 准确度% 线性范围 (ng/mL) 马兜铃酸Ⅰ Y=(4089.063)X+(628.8581) 0.9981 90.1~107.3 0.4~20 3.3重复性实验 取 0.4、2和10 ng/mL标准品溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性，色谱图如图3所示，具体测定结 果见表4。 Q 359.10>298.00(+) 9.84e2 图30.4 ng/mL 马兜铃酸Ⅰ标准品重复性色谱图 表44马兜铃酸Ⅰ保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 化合物 RSD% (0.4ng/mL) RSD% (2ng/mL) RSD% (10ng/mL) R.T Area R.T Area R.T Area 马兜铃酸Ⅰ 0.082 4.712 0.077 2.513 0.049 2.263 3.4样品测定和加标回收率 取市售人参再造丸按照2.0中方法处理样品，得到供试品溶液，按1.2中的分析条件上机分析。供试品溶 液检测色谱图如图4所示，供试品中检测到马兜铃酸Ⅰ浓度为 0.4 ng/mL， 含量为 10 ng/g。 向供试品中添加 0.4 ng/mL 浓度的马兜铃酸Ⅰ进行加标回收实验，加标样品色谱图如图5所示，加标样品中马兜铃酸Ⅰ浓度为 0.759 ng/mL， 回收率为94.8%。 Q359.10>298.00(+) 2.10e3 Q359.10>298.00 (+) 2.13e3 图4 供试品色谱图 图5 加标回收色谱图(加标浓度0.4ng/mL) 结论 本文使用岛津超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪，建立了人参再造丸中马兜铃酸Ⅰ的检查方法。马兜铃 酸Ⅰ在0.4~20 ng/mL 浓度范围内线性良好，相关系数r在0.998以上。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准 确，可为相关从业人员提供参考。 岛津应用云