LC-MS/MS法检测和定量厄贝沙坦原料药中的叠氮杂质

在本应用报告中，使用Nexera X3和LCMS-8050系统对厄贝沙坦原料药中的四种叠氮杂质（AZBT、AZBC、AMBBT、AMBBC）进行了同时分析。在线性和回收试验中，系统性能优异。四种叠氮杂质的标准曲线线性良好，在0.5至50 ng/mL范围内r2均在0.99以上。根据化合物的不同，检测限在0.03 ng/mL至0.2 ng/mL之间。回收试验结果显示：在三个浓度水平下，回收率的范围为95%至111%。岛津SHIMADZU 液相色谱质谱仪LCMS-8050 LC-MS/MS 法检测和定量厄贝沙坦原料药 中的叠氮杂质 09-SSK-012-CN Jihyun Lee Shimadzu Scientific Korea 特点描述 ◆使用LCMS-8050，建立了基于高灵敏度 MRM 定量测定厄贝沙坦原料药中叠氮杂质的方法。 ◆从线性、LOD、LOQ、回收率等方面对建立的方法进行评价，得到了可靠的结果。 简介 在沙坦类抗高血压药物中检测到叠氮杂质 ——叠氮甲基联 苯四唑(AZBT)，它是一种致突变杂质。因此，欧洲药品管理 局(EMA)、英国药品与保健品管理局(MHRA) 和加拿大卫 生部等监管机构要求进行了药品召回。韩国食品和药品安全部 (MFDS)相应发布了测定沙坦原料药中AZB T 的 LC -MS/MS 方 法作为测定指南“，努力确保药品安全。 叠氮杂质可以在含有四唑环的沙坦原料药(API) 的合成过 程中形成。在沙坦中，四唑环通过适当的腈和叠氮基之间的反 应形成，这可能同时产生作为副产物的痕量 叠 氮杂质。除了国 内管制成分 AZBT之外，还有各种类型的叠氮杂质。因此，本应 用报告旨在介绍对厄贝沙坦原料药中4种叠氮杂质的LC-MS/MS分析方法的评价(图1)。 图 1目标化合物叠氮杂质的化学结构 测定条件 参照 OMCL (官方药品控制实验室)方法条件执行分析。每种化合物的仪器条件和 MRM 条件如表1和表2所示。 表1仪器条件 液相色谱仪 NexeraTM X3 色谱柱 ： Shim-packTM GIST C18 (3.0 mmI.D.×100 mm L.， 3 um) 流速 ： 0.4 mL/min (A)0.1%甲酸水溶液 (B)0.1%甲酸的95%乙腈溶液 流动相 梯度 B 35% (0 min) -B 40% (5.5 min) -100% (12-14min) -B 35%(14.01-18 min) 分流阀 ： 0-7.6 min(废液)， 7.6-18 min (MS) 柱温 ： 40°C 进样量 5uL 检测器 ： UV 254 nm 质谱仪 LCMS-8050 离子源 ： ESI MS模式 ： 正离子模式 接口温度 ： 300°C DL 温度 ： 250°C 加热模块温度： 400°C 雾化气流量 ： 氮气， 3.0 L/min 干燥气流量 ： 氮气， 10.0L/min 加热气流量 ： 零级空气， 10.0L/min 表2多反应监测(MRM)条件 名称 前体离子m/z 产物离子m/z (1)产物离子 m/z (2) AZBT 278 235 207 AZBC 207 179 151 AMBBT 448 405 207 AMBBC 405 192 165 样品前处理 样品前处理程序参照 MFDS 方法进行。厄贝沙坦原料药 经过简单的溶解和离心预处理，如图2所示。 表2样品制备方案 结果和讨论 厄贝沙坦原料药和叠氮杂质的分离 为了消除基质的干扰和 高 浓度原料药可能造成的质谱仪污 染，使用了合适的液相色谱法和分流阀功能。 对厄贝沙坦原料药和四种叠氮杂质的分离进行了优化，如 图3所示。 图3四种叠氮杂质的质谱图(上图)和厄贝沙坦的紫外色谱图(下图) 标准曲线、LOD 和 LOQ 通过溶解在80%乙腈中制备用于标准曲线的含四种叠氮杂 质的标准溶液。在0.5 ng/mL 至50 n g/m L 的标准曲线范围内获 得了良好的线性，每种化合物的相关系数(r)为0.99或更高，如图4所示。 使用 LabSo l utions TM 软件将检测限(L OD) 和定量限(L OQ)计算为 S/N=3 和 S/N=10。获得的检测限范围为0.03 n g/mL 至0.2ng /mL， 具体取决于化合物(表3)。 图4四种叠氮杂质的标准曲线 表3叠氮杂质的 L OD 和 L OQ 浓度 (ng/mL) AZBT AZBC AMBBT AMBBC LOD 0.03 0.2 0.03 0.01 LOQ 0.1 0.5 0.1 0.03 加标和回收试验 使用厄贝沙坦原料药样品进行加标和回收试验。每个样品 中的加标浓度分为三个水平；1 ug/g(低水平)和20 ug/g (中 水平)和40 ug/g (高水平)。表4显 示，不同浓度加标回收率 范围为为95%至111%。结果为每种浓度的3个样品的计算的 平均浓度。 表4加标 叠 氮杂质的厄贝沙坦原料药的回收率(%)，n =3 回收试验样品 AZBT AZBC AMBBT AMBBC 低水平(1ug/g) 103 111 102 101 中水平(20ug/g) 105 104 100 97 高水平 (40ug/g) 108 105 101 95 平均值 105 107 101 98 结论 在本应用报告中，使用 Nexera X3 和 L CMS-8050 系统对 厄贝沙坦原料药中的四种叠氮杂质 (AZBT、AZBC、AMBBT、AMBBC) 进行了同时分析。在线性和回收试验中，系统性能犹 异。四种叠氮杂质的标准曲线线性良好，在0.5至50 ng/mL 范 围内 r 均在0.99以上。根据化合物的不同，检测限在 0.03 ng/m L 至 0.2 n g/mL 之间。回收试验结果显示：在三个浓度水平下，回收率的范围为95%至111%。 <参考文献> [1]M F D S 方 法 (2021年)， ht tps：//www.m f d s.go.k r/brd/m_218/v i ew. do?seq=33406 [2] Ge n o t oxi c s u b s ta n ces in sar t ans， OMCL Swissmed i c (2021) Sh i m-p a c k 、Nexera 和 La b Sol u tion 是岛津制作所或其附属公司在日 本和其他国家的商标。 岛津应用云 岛津企业管理(中国)有限公司 岛津(香港)有限公司 免责声明： *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 如有变动，恕不另行通知。