顶空-GC-MS/MS法测定动物类中药中三甲胺含量

本方法采用岛津GCMS-TQ8050 NX结合AOC-6000顶空进样方式，建立了动物类中药中三甲胺含量测定方法，并测定3种动物类中药中的三甲胺含量。在0.1~10 µg/mL浓度范围内，三甲胺标准曲线线性相关系数0.9999；根据0.1 µg/mL三甲胺标样数据，以3倍信噪比(峰至峰)计算仪器检出限为0.63 μg/L；在重复性实验中，浓度为0.1 µg/mL三甲胺标准溶液连续进样6针，峰面积RSD%为6.40%；在50 mg/kg和500 mg/kg加标水平下，平均加标回收率为98.43%和95.64%。实验结果表明：该方法采用GC-MS/MS的多反应监测模式结合独特的样品前处理方式，灵敏度高，结果准确，能够有效的监测动物类中药中三甲胺的含量。SSL-CA23-033 Excellence in ScienceGCMSMS-265 Excellence in Science 顶空 -GC-MS/MS 法测定动物类中药中三甲 胺含量 GCMSMS-265 摘要：本文利用岛津三重四极杆气相色谱质谱联用仪 GCMS-TQ8050 NX 结合顶空进样方式，建立了动物类中 药中 三 甲胺的定量方法。在0.1~10 ug/mL浓度范围内三甲胺标准曲线线性关系良好，线性相关系数 0.9999.0.1ug/mL标准溶液连续进样6针，峰面积 RSD%为6.40%。加标回收实验中，加标浓度为50和 500 mg/kg，平均加标回收率为98.43%和95.64%，对应 RSD%分别为9.10%和2.06%。此方法可为动物类中药中三甲胺 定量分析提供参考，同时也为动物类中药中“腥臭气”的研究提供了方法 借 鉴。 关键词：：气相色谱-三 重 四极杆质谱联用仪 动物类中药 三甲胺 技术特点： *创新性的样品制备方法，有效消除由三甲胺的易挥发性对实验结果准确度的影响。 必顶 空 进样结合 GC-MS/MS 测 定，有效抑制了基质化学干扰，保证结果可靠性。 三甲胺 (T r imethylamine，TMA) 是一种具有腥臭 气味的挥发 性 有机化合物，广泛存在 于 肉类和海鲜等动 物源性食品中。其主要来源于动物体内的一种蛋白质稳 定剂 氧 化三 甲 胺 (Trimethyamine Ox i de，TMAO) 的酶 促反应，是判断动物源性食物新鲜度的重要指标。 动物类中药源自动物的全体、器官或组织、加工制 品，其主要成分为蛋白、多肽类，在临床应用 中 疗效确切。但药物的腥臭气突出，例如，中医临床常用的地龙、水蛭、美洲大蟅、鸡内金等均有明显的腥 臭 气。。TMA 已被证 实是动物类 中 药腥臭气味的共同关键气味物质之一，患 者服药的顺应性对药物中三甲胺含量提出了要求，因此 实验部分 1.1仪器 需要开发用于确定动物类中药中三甲胺含量的方法 。 目前，食品中三甲胺含量的检测方法较成熟，并建 立了国家标准 GB5009.179-2016《食品安全国家标准食 品 中 三甲胺的测定》，但该方法 检 测结果易受到三甲胺 的易挥发性和高吸附性特点影响。 本文利用 GC-MS/MS 结合顶空进样技术，采用独 特的样品制备方法，建立了动物类中药中三甲胺含量检 测方法，并测定地龙、水蛭和美洲大蟅中三甲胺含量。该方法灵敏度高，结果可靠，可为动物类中药中三甲胺 检 测 提供参考。 GCMS-TQ8050 NX 三重四极杆气相色谱质谱联用仪 AOC-6000 自动进样器 1.2分析条件 顶空参数： 恒温炉温度： 80°℃ 平衡时间： 30 min 顶空针温度： 100°℃ 进 样 量 量： 1mL GCMSMS 参数： 色 谱 柱：SH-Volatile Amine (30 m×0.32 mm×5um) 柱 温程序： 40℃ (0.5 min)_20℃ /min_200℃ (5 min) 进样口 温 度： 200℃ 离子化 式： EI 离子源 方 载气控制方式： 恒流 温 度： 200°℃ 柱 流 量 量 ： 2 mL/min 色谱质谱接口温度： 230°℃ 进样方 方式 式 分流进样 调谐电压+0.5kV 分 流 比： 10：1 检 测器电 压 ：采 集 模 式： MRM，离子对信息见表1 样品前处理 精密量取上述样品提取液2mL置于石蜡层上部 ，压盖密封，待测 ■结果与讨论 3.1三甲胺标准溶液谱图 (x1，000.000) 图1三 甲胺标 准 溶液谱图(5ug/L) 表1三 甲胺化合物信息 NO. 中文名称 英文名称 CAS 号 保留时间 定量离子对 CE 定性离子对 CE 1 三甲胺 Trimethylamine 75-50-3 2.317 58.0>42.0 20 58.0>30.0 7 3.2标准曲线和质量色谱图 使用5%三氯乙酸溶液配制三 甲 胺盐酸盐标准溶液系列，浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0 ug/mL(以 三甲胺计)，精密量取各浓 度 标准溶液2mL分别置于预 制 好的顶空瓶石蜡层上部，压盖密封后，进GC-MS/MS分析 。以三甲胺浓度为横坐标，三甲胺定量离子对峰面积为纵坐标作标准曲线，标准曲线如图2所示，线性 相关系数如表2所示，三甲胺质量色谱图见图3。 图 2三甲胺标准曲线 图3 三甲胺 标 准溶液质 量 色谱图(0.1 ug/L) 表2 三甲胺标准曲线线 性 范 围 、相关系数及仪器 检 出限 NO. 组分名称 相关系数(R) 检出限(ug/L) 1 三甲胺 0.9999 0.63 3.3重复性实验及检出限 取三甲胺盐酸盐标准溶液 友 (以三甲胺计， 0.1 ug/mL) 2 mL 置于预制好的顶空瓶石蜡层上部，平行制备样 品6份并连续进样，用于考察三甲胺峰面积的重复性，测 定 结果见表3。以3倍信噪比(峰至 峰 )计算检出限，三甲胺仪器检出限见表2。 表3 三甲胺峰面积重复性结果 No. 化合物名称 峰面积1 峰面积2 峰面积3 峰面积4 峰面积5 峰面积6 RSD((%) 1 三甲胺 214293 231384 207159 197803 204750 194344 6.40 3.4加标回收率 三甲胺是动物类中药中内源性化合物，同时由于三甲胺的易挥发性，在本实验中，选择三甲胺盐 酸 盐标准 溶液进行加标回收实验。美洲大蟅中加标浓度分别为 50和500 mg/kg，按照前述样品制备方法，每个加标浓 度 平行制备3份加标样品，考察回收率和回收率 RSD%。50 mg/kg 加标水平下，加标回收率分布在 88.08%-103.63% 之间， RSD% 为9.10%；500 mg/kg 加标水平下，加标回收率分布在 93.39%-97.08%之间， RSD%为2.06%；详细结果见表4。 表4中药美洲大蟅中三甲胺加标回 收 率结果 NO. 化合物 加标浓度 (50mg/kg) 加标浓度 (500 mg/kg) 回收率(%) 平均回收率_(%) RSD(%)((rn=3) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)(n=3) 三甲胺 88.08 93.39 2.06 1 103.63 98.43 9.10 97.08 95.64 103.57 96.44 3.5实际样品分析结果 选取产地不同的地龙、美洲大夫和水蛭为样品，按前述样品处理流程进行样品制备，并采用上述仪器条件测 定，三甲胺检 测 结果如表5所示。 表553种动物类中药中 三 甲胺含量测定结果 No. 样品名称 含量 (mg/kg) 1 地龙1 88.11 2 地龙2 137.34 3 美洲大蝶1 18.63 4 美洲大蟅2 40.50 5 水蛭1 271.63 6 水蛭2 69.73 ■结论 本方法采用岛津GCMS-TQ8050 NX结合AOC-6000顶空进样方式，建立了动物类中药中三甲胺含量测定方法，并测定3种动物类中药中的三甲胺含量。在0.1~10 ug/mL 浓度范围内，三甲胺标准曲线线性相关系数 0.9999；根据0.1 ug/mL 三 甲胺标样数据，以3倍信噪比(峰 至峰)计算仪器检出限为 0.63 ug/L；在重复性实验中，浓 度为 0.1 ug/mL 三甲胺标准溶液连续进样6针 ，峰面积 RSD% 为 6.40%；在50 mg/kg 和 500 mg/kg 加标水平 下，平均加标回收率为98.43%和95.64%。实验结果表明：该方法采用GC-MS/MS 的多反应监测模式结合独 特的样品前处理方式，灵敏度高，结果准确，能够有效的监 测 动物类中药中三甲胺的含量。 岛津应用云