茶叶中草甘膦及其代谢物的测定 SPE-UPLC-MS/MS 法

1、范围本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限0.1mg/kg。2、标准溶液单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 ug/mL 的单标标准储备液。混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 ug/mL、10 ug/mL和50 ug/mL 的混标标准中间液。3、提取取1 g 茶叶于50 mL 离心管中，准确加入10 mL 水、10 mL 二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm 离心5 min，取5 mL 上清液，待净化。4、净化Anavo GLY 6mL (货号：AN60F023）依次加入5 mL 甲醇、5 mL 水，进行活化；将待净化液加入柱中，弃去前3 mL 流出液，收集后2 mL 流出液，混匀，滤液过0.22 um 尼龙滤膜，上机分析。注：同方法制备基质匹配标准溶液。5、测定5.1 UPLC 条件：色谱柱：Asahipak NH2P-50 2D，150×2.0 mm，5 μm (货号：F7630006)流速：0.2 mL/min 进样量：10 μL 柱温：35 ℃流动相： A：乙腈B：5 mM 乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11梯度设置：5.2 质谱条件：电离模式：ESI              扫描方式：负离子扫描检测方式：多反应监测  电喷雾电压：-4500 V雾化气压力：60 psi      辅助气压力：60 psi气帘气压力：35 psi      离子源温度：550 ℃定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表6、回收率茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS 检测添加回收结果：7、谱图ANAVO 茶叶中草甘膦及其代谢物的测定SPE-UPLC-MS/MS 法 1、范围 本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限 0.1mg/kg。 2、标准溶液 单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 ug/mL 的单标标准储备液。混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成 1.0 ug/mL、10 ug/mL和 50 ug/mL 的混标标准中间液。 3、提取 取 1g茶叶于50mL 离心管中，准确加入 10 mL 水、10 mL二氯甲烷，振荡 10 min，超声 10 min， 8000 rpm 离心5 min， 取 5 mL上清液，待净化。 4、净化 Anavo GLY 6mL (货号： AN60F023) 依次加入5 mL 甲醇、5mL水，进行活化；将待净化液加入柱中，弃去前3mL流出液，收集后2mL流出液，混匀，滤液过0.22 um 尼龙滤膜，，上机分析。 注：同方法制备基质匹配标准溶液。 5、测定 5.1 UPLC 条件： 色谱柱： Asahipak NH2P-50 2D，，1150×2.0mm， 5umn(货号：F7630006)流速：0.2mL/min 进样量：：10 pL 柱温：35℃ 流动相： A：：乙腈 B： 5mM乙酸铵溶液，氨水调节至 pH=11 梯度设置： Time(min) 0 2 2.1 8 8.1 15 A(%) 80 80 20 20 80 80 B(%) 20 20 80 80 20 20 5.2质谱条件： 电离模式：ESI扫描方式：负离子扫描检测方式：多反应监测电喷雾电压：-4500V雾化气压力：60 psi辅助气压力：60 psi气帘气压力：35 psi离子源温度：550℃ 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表 目标化合物 定性离子对(m/z) (母离子/子离子) 定量离子对(m/z) (母离子/子离子) 碰撞气能量/eV 去簇电压/V 氨甲基膦酸 109.9/62.8 109.9/62.8 -23 -53 109.9/78.9 -35 -51 草甘膦 167.8/62.8 167.8/62.8 -30 -50 167.8/81.0 -21 -31 6、回收率 茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的 LC-MS/MS 检测添加回收结果： 样品基质 回收率(%) 添加水平： 0.1 mg/kg 添加水平：1mg/kg 添加水平： 5mg/kg 加标量：1.0ug/mL， 加 100uL 加标量：10ug/mL， 加 100uL 加标量：50 ug/mL，加 100uL 氨甲基膦酸 草甘膦 氨甲基膦酸 草甘膦 氨甲基膦酸 草甘膦 绿茶 101 92 93 99 95 96 花茶 96 195 99 88 94 98 铁观音 88 85 93 97 85 90 红茶 90 91 88 88 82 93 普洱茶 88 91 86 92 86 97 7、谱图 氨甲基膦酸 10 ngml标准品 XIC 图 氨甲基膦酸 50 ng/ml标准品 XIC 图 VV 一 氨甲基膦酸 100 ng/ml标准品 XIC 图 氨甲基膦酸 250 ng/ml标准品 XIC 图+ 氨甲基膦酸 500 ng/ml标准品 XIC 图+ 氨甲基膦酸的标准曲线图 R^2=0.9990+ 标准曲线浓度分别为： 10 ng/ml、50 ngiml、100 ngml、250 ng/ml、500 ng/ml 草甘膦 10 ngml标准品 XIC 图 草甘膦 50 ng/ml标准品 XIC图 十 草甘膦 100 ngml标准品 XIC 图 L XICof -MRM (S pary：167.80062.800Da D： csqgannztrom Sampe42(2. 25-22400 2220- 2000 1300 bs5400 ' Q It ae兰 7000-口20 MX.25423cms 475 草甘膦 250 ng/ml标准品 XIC图 十 草甘膦 500 ng/ml标准品 XIC 图 草甘膦的标准曲线图+ R^2=0.9990+ 标准曲线浓度分别为： 10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、2250 ng/ml、500 ngml