茶叶中草甘膦及其代谢物检测方案(液相色谱柱)

DiMAA reliabie partner for your lab 茶叶中草甘膦及其代谢物的测定 SPE-UPLC-MS/MS法解决方案 草甘膦(Glyphosate， Gly)是广泛使用的一类广谱非选择性除草剂，以其高效、廉价等特性被运用于全球各个农业和非农业领域。其在环境和生物体中富集并通过食品进入人体，会对人体健康造成危害。随着其在茶叶上的广泛使用，草甘膦及其主要代谢产物氨甲基膦酸残留问题也越来越受关注。目前前用的检测方法为离子交换净化、七氟丁醇(HFB)和三氟乙酸酐(TFAA)衍生后 GC-MS检测，或9-芴基甲基三氯甲烷衍生后 LC-MS/MS检测，这些方法通常存在操作时间长、需要衍生等问题，因此建立一种简便、快捷、有效的草甘膦及其代谢物残留的检测方法具有重要的意义。 迪马科技在参考各种标准及文献的基础上，建立了 SPE-UPLC-MS/MS 法测定茶叶中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的检测方法：采用水提取， ProElut GLY 固相萃取专用柱净化样品，收集流出液， Dikma Polyamino HILIC 色谱柱分离检测，该方法特点： 1)前处理步骤少，提取液直接通过净化柱接收流出液即可； 2)有机溶剂消耗量小，前处理过程中也无需使用酸碱试剂； 3)仪器分析简单，样品无需衍生直接分析，可提高结果稳定性及减少实验成本； 4)方法定量限 0.1 mg/kg. 以下为详细解决方案，敬请参考! 茶叶中草甘膦及其代谢物的测定 SPE-UPLC-MS/MS法 1、适用范围 本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测，定量限0.1 mg/kg. 2、标准品配制 单标标准储备液：准确确取各标准品，用水配制成1000 pg/mL 的单标标准储备液。 混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成 1.0 pg/mL、10 pg/mL 和50 pg/mL的混标标准中间液。 北京：400-608-7719上海：021-61263966天津：400-633-6606广州：020-85593520成都：028-86612625沈阳：024-22943513青岛：0532-83725230石家庄：0311-66686220重庆：023-62568657西安：158-0293-5126哈尔滨：：180-4537-3042 3、提取 取 1g茶叶于50mL离心管中，准确加入10 mL 水、10 mL二氯甲烷，振荡10 min， 超声 10 min， 8000 rpm离心5 min， 取5mL上清液，待净化。 4、净化——ProElut GLY 6 mL (Cat.#： 65938) (1)活化依次加入5mL 甲醇、5mL水，弃去流出液；样 (2)上 将待净化液加入柱中，弃去前3mL流出液，收集后2mL流出液，混匀，滤液过 0.22 pm 尼龙滤膜，上机分析。 注：同方法制备基质匹配标准溶液。 5、UPLC-MS/MS 条件 5.1 UPLC 条件 色谱柱： Dikma Polyamino HILIC， 150×2.0 mm， 5 pm (Cat.#： 99302) 流速：0.2 mL/min进样量：10pL 柱 温：35℃流动相： 1：乙腈B：5mM乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11 A：梯度设置： Time (min) 0 2 2.1 8 8.1 15 A(%) 80 80 20 20 80 80 B(%) 20 20 80 80 20 20 5.2质谱条件 电离模式：ESI扫描方式：负离子扫描检测方式：多反应监测电喷雾电压：-4500V雾化气压力：60psi辅助气压力：60 psi气帘气压力： 35 psi离子源温度：550C 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表 目标化合物 定性离子对(m/z) (母离子/子离子) 定量离子对(m/z) (母离子/子离子) 碰撞气能量/eV 去簇电压/V 氨甲基膦酸 109.9/62.8 109.9/62.8 -23 -53 109.9/78.9 -35 -51 草甘膦 167.8/62.8 167.8/62.8 -30 -50 167.8/81.0 -21 -31 6、添加回收结果 茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的 LC-MS/MS 检测添加回收结果： 样品基质 回收率(%) 添加水平：0.1 mg/kg 添加水平：1mg/kg 添加水平：5mg/kg 加标量：1.0pg/mL，加100 uL 加标量： 10g/mL， 加100 uL 加标量：50pg/mL，加100pL 氨甲基膦酸 草甘膦 氨甲基膦酸 草甘膦 氨甲基膦酸 草甘膦 绿茶 103 91 99 109 92 101 花茶 95 105 109 85 93 99 铁观音 84 81 83 94 80 100 红茶 100 101 86 85 89 98 普洱茶 80 95 89 95 88 102 氨甲基膦酸 10 ng/mL标准品 XIC图 氨甲基膦酸 50 ng/mL 标准品 XIC 图 Max. 903.7 cps. 4.60 2506240100 -2200 2000- 1800- 1600-sdo 1400 'ys1200ueu1000 800-600-400-200- Max.2505.9cps. 4.60 氨甲基膦酸100 ng/mL 标准品 XIC 图 氨甲基膦酸250 ng/mL标准品 XIC图 天津：400-633-6606广州：020-85593520青岛：0532-83725230石家庄：0311-66686220西安：158-0293-5126哈尔滨：：180-4537-3042 XIC of -MRM(6 pairs)： 109.900/62.800 DalD： anjiajilinsuan1 from Sample 4... Max. 5398.6 cps. 4.61 氨甲基膦酸 500 ng/mL 标准品 XIC 图 20181127-3.rdb (anjiajilinsuan1)： "Linear"Regression ("No" weighting)： y=55.6x+-371(r=0.9995) 氨甲基膦酸的标准曲线图 R^2=0.9990 标准曲线浓度分别为：10ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL 草甘膦 10 ng/mL标示品 XIC 图 草甘膦50 ng/mL 标准品 XIC图 天津：400-633-6606广州：020-85593520青岛：0532-83725230石家庄：0311-66686220西安：158-0293-5126哈尔滨：：180-4537-3042 草甘膦 100 ng/mL标准品 XIC图 草甘膦250 ng/mL标准品 XIC图 草甘膦500 ng/mL 标准品 XIC 图 20181127-3.rdb(caoganlin2)："Linear"Regression ("No" weighting)： y=59.6x+281(r=0.9995) 20181127-3.rdb(caoganlin2)："Linear"Regression ("No" weighting)： y=59.6x+281(r=0.9995) 3.1e4： 3.0e4 2.8e4 2.6e4 2.4e44- 2.2e4 2.0e4 1.8e4 1.6e4 1.4e4 1.2e4- 草甘膦的标准曲线图 R^2=0.9990 标准曲线浓度分别为：10 ng/mL、50ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL 北京：400-608-7719上海：021-61263966天津：400-633-6606广州：020-85593520成都：028-86612625沈阳：024-22943513青岛：0532-83725230石家庄：0311-66686220济南：1：0531-83681355重庆：023-62568657西安：158-0293-5126哈尔滨：：180-4537-3042 茶叶中草甘膦及其代谢物的测定 SPE-UPLC-MS/MS 法相关产品信息： 货号 名称 规格 样品前处理 65938 草甘膦检测专用固相萃取柱ProElut GLY 6mL， 30/pk 244358 12管防交叉污染真空 SPE 萃取装置 12位 4803 1，3，6 mL柱管通用连接器 15/pk 4806 考克(控制流量) 15/pk 99011 真空/正压两用泵，无油 1/pk 99013 抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米，2L抽滤瓶及橡胶塞) 1/pk 30039 FitMax针头式过滤器 Nylon 13 mm， 0.22 um 100/pk 标准品 12-MET-12133A-100MG 氨甲基膦酸[1066-51-9] 100 mg 46010 草甘膦[1071-83-6] 100 mg 色谱柱及保护柱 99302 Dikma Polyamino HILIC 150x2.0 mm，5pm HPLC溶剂•缓冲盐·离子对试剂 50101 乙腈 HPLC级 4L 50102 甲醇享 HPLC级 4L 50117 二氯甲烷HPLC 级 4L 50138 乙酸铵 HPLC级 100g 通用色谱产品 52401B 瓶架/蓝色(现货) 50孔 52401A 瓶架/白色(现货) 50孔 1034 样品瓶(棕色/螺纹) 2 mL， 100/pk 1035 样品瓶盖/含垫(已经组装) 100/pk H80465 HPLC 进样针 25 uL 红色产品货号#30039、#1034、#1035火热促销中 天津：400-633-6606 广州：020-85593520 石家庄：0311-66686220 西安：158-0293-5126 哈尔滨：：180-4537-3042 济南：： 上海：阳：庆：京：都：南：：岛： 1、标准品配制单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 ug/mL的单标标准储备液。混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 ug/mL、10 ug/mL和50 ug/mL的混标标准中间液。2、提取取1 g茶叶于50 mL离心管中，准确加入10 mL水、10 mL二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm离心5 min，取5 mL上清液，待净化。3、净化ProElut  GLY 6mL (Cat#:65938）(1)活    化：依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；(2)上    样：将待净化液加入柱中，弃去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混匀，滤液过0.22 um尼龙滤膜，上机分析。注：同方法制备基质匹配标准溶液。