LC-MS/MS检测猪肉中酰胺醇类药物及其代谢物残留

依据国家标准《GB 31658.20-2021 食品安全国家标准 动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪测定猪肉中酰胺醇类药物及代谢物残留的方法。4种化合物在0.2 μg/L~40.0 μg/L浓度范围内线性良好，相关系数r均在0.998以上。加标浓度为0.2、1和10 μg/kg的样品，回收率在87.0~116.3%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的准确检测。岛津SHIMADZUSSL-CA22-601Excellence in Science 岛津SHIMADZUExcellence in ScienceLCMSMS-742 LC-MS/MS检测猪肉中酰胺醇类药物及其代谢物残留 LCMSMS-742 摘要：本文建立了使用岛津超高效液相色谱三重四极杆质谱联用测定猪肉中酰胺醇类药物及其代谢物残留的方法。4种化合物在 0.2 ug/L~40.0 ug/L浓度范围内线性良好，相关系数r均在0.998以上。在高、中、低三个浓度下，化合物的保留时间和峰面积的RSD%分别在 0.06%~0.26%和1.10%~10.27%之间，仪器精密度良好。加标浓度为0.2、1和10 ug/kg的样品，回收率在87.0~116.3%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于猪肉中酰胺醇类药物及其代谢物残留的准确定量检测。 关键词：三重四极杆液质联用仪猪肉 酰胺醇类 代谢物 技术特点： ※甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺的灵敏度远高于标准要求。 酰胺醇类药物又称氯霉素类抗生素，属于广谱抗生素，对革兰氏阳性菌和阴性菌均有抑制作用，常见的该类药物主要包括氯霉素、、甲砜霉素、氟苯尼考等。由于氯霉素会严重干扰动物造血功能，弓起粒细胞及血小板生成减少，导致不可逆性再生障碍性贫血等，中华人民共和国农业农村部公告第250号已明确将其列入《食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单》。 甲砜霉素为氯霉素类衍生物， GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》规定了甲砜霉素在牛、羊和猪的肌肉、肝、肾等组织的最大残 留限量量(MRLs) 为 50 ug/kg；而氟苯尼考是新一代氯霉素类抗生素，氟苯尼考胺是其主要代谢产物， 《GB31650-2019》规定残留标志物是氟苯尼考和和氟苯尼考胺之和，在猪不同组织中的 MRLs 为 300~2000 ug/kg。 为了保障人们的食品安全，农业农村部首次发布了《GB 31658.20-2021食品安全国家标准动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，本文参考标准，建立了猪肉中酰胺醇类药物残留的检测方法。 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40 X3与三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 联用系统。具体配置为： 泵 LC-40B 系统控制器： SCL-40 自动进样器 SIL-40C X3输液质 谱 x 柱温箱： CTO-40S 色谱工作站： LabSolutions Ver. 5.114 仪： LCMS-8045 在线脱气机： DGU-405 1.2分析条件 液相条件 色谱柱：Shim-pack Scepter C18-120 (100 mm×2.1 mm l.D， 1.9 um) 岛津((上海)实验器材有限公司， P/N： 227-31012-05 动 ：A相-10mM甲酸铵水溶液，B相-乙腈 流相 柱温35℃流 速：0.3mL/min洗脱方式：梯度洗脱，初始浓度为B 相5%，进样体积：5pL 时间程序见表1 表1 梯度洗脱程序 Time Module Command Value 0.50 Pumps Pump B Conc. 5 3.50 Pumps Pump B Conc. 60 4.50 Pumps Pump B Conc. 60 4.51 Pumps Pump B Conc. 5 6.50 Controller Stop 质谱条件 离子源源：：ESI，正+负离子模式 DL管温度：250°℃ 接口电压：0.5kV 加热模块温度：400℃ 雾1化气：氮气 3.0 L/min 接口温度：300°℃ 干燥气：氮气 10 L/min 扫描模式：多反应监测(MRM) 加热热气：空气 10 L/min MRM参 数：见表2 碰撞气：氩气(230kPa) 表2 MRM 参数 编号 名称 化学分子式 CAS NO. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bais(V) CE(V) Q3 Pre Bais(V) 1 氯霉素 C1H12CI2N205 56-75-7 321.0 152.1* 20.0 16.0 15.0 257.0 19.0 10.0 17.0 2 甲砜霉素 C12H15CINO，S 15318-45-3 354.0 185.1* 22.0 21.0 18.0 290.0 12.0 12.0 20.0 3 氟苯尼考 C12H14CI2FNOS 73231-34-2 356.0 185.1 12.0 18.0 12.0 336.0* 12.0 10.0 23.0 4 氟苯尼考胺 CgH10DgN3O3 76639-93-5 248.1 130.2 -18.0 -19.0 -12.0 230.1 -18.0 -12.0 -25.0 5 氯霉素D号 C11H-D5CLN2O5 / 326.0 157.0* 20.0 17.0 29.0 6 甲砜霉素D C12H12D；CINO，S / 359.0 295.0* 25.0 12.0 14.0 7 氟苯尼考 D3 C12H1D3CIFNOAS / 361.0 341.0* 18.0 10.0 25.0 8 氟苯尼考胺 D3 C10H1DFNOS / 251.1 233.1* -16.0 -12.0 -30.0 *表示定量离子 样品前处理 参考《GB31658.20-2021食品安全国家标准动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》中7.1和7.2样品提取与净化的方法。 ■结果与讨论 3.1酰胺醇类标准溶液谱图 图1为0.2 ng/mL4种酰胺醇类药物及代谢物的 MRM色谱图，色谱峰分离良好，通道无干扰。 图14种酰胺醇类药物及代谢物标准品溶液质量色谱图(0.2ug/L) 3.2校准曲线和检出限 使用20%甲醇溶液稀释混合标准溶液，配制成四种目标物浓度为0.2、0.4、1、2、4、10、20和40 ug/L的系列标准溶液，其中同位素内标的浓度均为 5 ug/L， 以定量离子峰面积比为纵坐标，浓度比为横坐标，绘制校准曲线如图2所示。根据0.2 ug/L标样数据，以3倍信噪比计算4种酰胺醇类药物的方法检出限，各化合物检出限以及线性相关系数如表3所示。 图2 酰胺醇类药物及代谢物标准曲线 表34种酰胺醇类药物及代谢物校准曲线及检出限 编号 组分名称 校准曲线 相关系数 R 准确度% 检测限 定量限 1 氯霉素 Y=(0.1578599)X+(0.007725093) 0.9998 92.4~109.7 0.01 0.02 2 甲砜霉素 Y=(0.4666059)X+(0.09803261) 0.9985 85.4~118.2 0.01 0.03 3 氟苯尼考 Y=(0.2071672)X+(0.1201553) 0.9981 88.5~117.3 0.01 0.02 4 氟苯尼考胺 Y=(0.6360922)X-(0.03051022) 0.9998 83.0~112.5 0.04 0.13 3.3重复性实验 取 0.2、2和40 ug/L标准品溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果见表4。 表4 酰胺醇类药物及代谢物保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 编号 化合物 RSD% (0.2 ug/L) RSD% (2 ug/L) RSD% (40 ug/L) R.T Area R.T Area R.T Area 1 氯霉素 0.08 7.97 0.06 5.00 0.09 1.18 2 甲砜霉素 0.16 9.76 0.09 5.88 0.13 1.10 3 氟苯尼考 0.08 8.45 0.07 2.75 0.09 2.21 4 氟苯尼考胺 0.18 10.27 0.20 4.75 0.26 2.15 3.4加标回收率 取空白猪肉2g，加入混标工作液，使加标浓度为0.2、1和10 pg/kg， 样品经提取及净化后，按照1.2中的分析条件测定4种酰胺醇类药物及代谢物的加标回收率，平行测定3次。4个化合物的回收率在87.0~116.3%之间，具体结果见表5。 表54种酰胺醇类药物及代谢物回收率结果(n=3) 编号 化合物 加标浓度 0.2 ug/kg 加标浓度 1 ug/kg 加标浓度 10 ug/kg 回收率% RSD% 回收率% RSD% 回收率% RSD% 1 氯霉素 87.0 10.8 96.6 7.3 96.2 6.4 2 甲砜霉素 101.0 12.2 116.3 1.26 106.4 10.8 3 氟苯尼考 113.5 4.3 110.4 4.0 115.8 2.1 4 氟苯尼考胺 102.5 12.5 94.3 4.5 98.5 4.8 结论 依据国家标准《GB 31658.20-2021 食品安全国家标准动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，建立了使用岛津三重四极杆液质联用仪测定猪肉中酰胺醇类药物及代谢物残留的方法。4种化合物在 0.2 ug/L~40.0 ug/L 浓度范围内线性良好，相关系数r均在0.998以上。加标浓度为0.2、1和10ug/kg的样品，回收率在87.0~116.3%之间。该方法灵敏度高，分析时间短，结果准确，可用于动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的准确检测。