动物源食品中13种β-受体激动检测方案(液质联用仪)

提取 瘦肉精是一类药物的统统，任何能够抑制动物脂肪生长，促进瘦肉生长的物质都可以称为“瘦肉精”。 动物源食品中十三种β-受体激动剂前言LC-MS/MS分析方法 此类功能的物质主要是一类叫做β-受体激动剂(也称β-兴奋剂)的药物，这类药物进入动物体内后能够改变养分的代谢途径，促进动物肌肉生长，尤其是促进骨骼肌蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解，提高瘦肉率。自2011年以来，因食用被“瘦肉精”污染的食物导致中毒事件屡有发生，且后果极其严重，引起了世界各国的高度重视。为了保证畜产品质量安全，保护人类健康，许多国家都禁止在食源性动物的生产中使用盐酸克伦特罗等瘦肉精，本文建立了QSight210LC-MS/MS系统应用于动物源食品中13种β-受体激动剂残留的检测方法。 净化 禾取2.0g(精确到0.01g)经捣碎的样品于50mL离心管中，加入8mL乙酸钠缓冲液，充分混匀，再加50uLβ-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶，混匀后，37℃水浴水解12h。添加100pL 10ng/mL的内标工作液于待测样品中，加盖置于水平振荡器振荡15min，离心10min (5000r/min)，取4mL上清液加入0.1mol/L高氯酸溶液5mL，混合均匀，用高氯酸调节pH值到1±0.3.5000r/min离心10min后，将全部上清液(约10mL)转移到50mL离心管中，用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11。加入10mL饱和氯化钠溶液和10mL异丙醇-乙酸乙酯(6+4)混合溶液，充分提取，在5000r/min下离心10min。转移全部有机相，在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液，超声混匀，使残渣充分溶解后备用。 将阳离子交换小柱连接到真空过柱装置。将上述残渣溶液上柱，依次用2mL水、2mL2%甲酸水溶液和2mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干，最后用2mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。流速控制在0.5mL/min。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入200pL0.1%甲酸水溶液/水-甲醇溶液(95+5)，超声混匀，将溶液转移到1.5mL离心管中，15000r/min离心10min。上清液待LC-MS/MS测定。 LC-MS/MS仪器方法 液相色谱和质谱参数分别参见表1、2和3 液相色谱仪 PerkinElmer LX 50TM系统 色谱柱 PerkinElmer Brownlee C18， 100×2.1 mm，2.7m (货号：N9308404) 流动相 A：0.1%甲酸水溶液 B：0.1%甲酸乙腈溶液 梯度洗脱程序 Step Time Flow Rate(mL/min) %A %B Curve (min) 1 Initial 0.4 99 1 2 0.50 0.4 99 1 Linear 3 2.00 0.4 90 10 Linear 4 4.50 0.4 80 20 Linear 5 6.50 0.4 70 30 Linear 6 7.00 0.4 50 50 Linear 7 8.00 0.4 30 70 Linear 8 8.50 0.4 1 99 Linear 9 8.60 0.4 99 1 Linear 10 11.00 0.4 99 1 Linear 运行时间 8.5 min； Re-equilibration time： 2.5 min 柱温 40°C 进样量 20uL 表1液相色谱参数 Parameter Setting Value lonization Mode ESI positive Drying Gas Setting 75 HSID Temperature (℃) 320 Nebulizer Gas Setting 220 Electrospray Voltage(℃) 5500 Source Temperature (C) 500 表2质谱参数 化合物 母离子(m/z) 子离子(m/z) 入口电压(V) CCL2(V) 碰撞能量(eV) 克伦特罗 277.1 203.0* 11 -72 -25 277.1 259.1 11 -56 -14 班布特罗 368.2 72.1 24 -104 -59 368.2 294.1* 26 -112 -26 马布特罗 311.1 237.0* 22 -68 -24 311.1 293.1 19 -76 -16 齐帕特罗 262.2 185.0 18 -100 -37 262.2 244.1* 16 -68 -17 沙丁胺醇 240.2 148.1* 20 -64 -27 240.2 222.1 20 -48 -13 特布他林 226.2 152.1* 20 -52 -22 226.2 170.1 20 -60 -14 妥布特罗 228.2 154.0* 18 -52 -25 228.2 172.1 18 -52 -16 西布特罗 234.2 160.1* 15 -64 -20 234.2 216.0 15 -52 -12 西马特罗 220.2 160.1 15 -92 -27 220.2 202.1* 15 -48 -13 西布特罗 367.0 292.9* 21 -96 -28 367.0 349.0 20 -112 -17 莱克多巴胺 302.2 164.1 9 -100 -22 302.2 284.1* 9 -76 -17 氯丙那林 214.1 154.0* 20 -64 -26 214.1 196.1 22 -68 -16 克伦普罗 263.1 203.0 15 -100 -27 263.1 245.1* 15 -60 -17 克伦特寺-D、 286.1 204.0* 11 -72 -25 沙丁胺醇L-D， 243.1 151.1* 20 -64 -27 莱克多巴胺-D。 307.2 289.1* 9 -100 -22 表3十三种β-受体激动剂及其MRM参数 实验结果 在上述实验条件下得到的十三种β-受体激动剂的典型MRM色谱图见图1。十三种β-受体激动剂的药物可以实现色谱分离且峰形良好，经过优化的梯度可以和基质干扰分开。 图1 5 ug/L十三种β-受体激动剂的典型MRM色谱图 十三种β-受体激动剂在0.05 ug/L-5 ug/L浓度范围内均呈现良好的线性关系，相关系数≥0.995，典型代表化合物克伦特罗，沙丁胺醇和莱克多巴胺的标准曲线(内标法)见图2. 图2克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的标准曲线(内标法) 珀金埃尔默 QSight 210系统完全可以遵从法规满足实验室对于动物源食品中13种β-受体激动剂的日常检测工作。QSight 210系统具有优异的自清洁性能设计，可以大大提高仪器的抗污染能力，为实验室面对复杂基质样品时带来巨大方便。 ( 参考文献 ) ( [1].前处理方法参考 GB/T22286-2008动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法。 ) 珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司 地址：上海张江高科技园区张衡路1670号 邮编：201203 电话：021-60645888 传真：021-60645999 ww.perkinelmer.com.cn 要获取我们位于全球的各个办公室的完整列表，请访问 http：//www.perkinElmer.com.cn/AboutUs/ContactUs/ContactUs/ ( 版权 所有 ◎ 2 019，Perk i nElm e r， Inc. 保 留 所 有 权 利。Pe r ki n Elme r 是 Perki n Elmer ， Inc. 的注册商 标 。其它所有商标均 为其 各自 持 有 者 或所有者的财 产 。 ) ( 本资 料 中的信息、 说 明 和技 术指 标 如 有 变更，恕不另行 通知。 ) 本文建立了QSight® 210 LC-MS/MS系统应用于动物源食品中13种β-受体激动剂残留的检测方法，可以大大提高仪器的抗污染能力，为实验室面对复杂基质样品时带来巨大方便。