药材及饮片中黄曲霉毒素检测方案(液质联用仪)

样品前处理方法要获取我们位于全球的各个办公室的完整列表，请访问 http：//www.perkinElmer.com.cn/AboutUs/ContactUs/ContactUs/ 药材及饮片中黄曲霉毒素的解决方案 PerkinElmer LX50 UHPLC-QSight 系列 三重四级杆液质联用仪 背景 黄曲霉毒素(Aflatoxin)是由黄曲霉，寄生曲霉等真菌产生的一类分子结构相似的次级代谢产物，是一类毒性和致癌性很强的化合物，为第一类致癌物，是人类原发性肝癌的主要致病因素之一。中药材在生长和储存过程中，环境条件不当便会滋生霉菌从而产生黄曲霉毒素。 2015版《中国药典》对柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、远志、薏苡仁、大枣、地龙、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味药材及其饮片品种项下增加“黄曲霉毒素”检查项目，限度为“黄曲霉毒素B1不得过5ug/kg；黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2总量不得过10ug/kg". 药典中已经确定LC-MS/MS分析方法为黄曲霉毒素的仲裁检测方法。珀金埃尔默公司采用QSight LC-MS/MS液质联用系统，建立了药材及饮片中黄曲霉毒素残留分析的整体解决方案。 提取： 取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，加入70%甲醇溶液75mL，高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000转/分)，离心5分钟(离心速度2500转/分)，精密量取上清液15mL，置于50mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.22um)滤过，待净化。 净化： ·上样：将准确移取15.0mL样品提取液注入免疫亲和柱，调节空气压力泵的压力使溶液以约6mL/min 流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2mL~3mL空气通过柱体，随后调节开关，使液体以1~2d/s的速度流出； 淋洗：以10mL水淋洗免疫亲和柱两次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过免疫亲和柱，流速为2~3d/s； 洗脱：准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1mL/min~2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。 LC-MS/MS仪器方法 1.PerkinElmer LX50 UHPLC参数： 色谱柱：Brownlee SPP C18，100mm*2.1mm，2.7um柱温：40℃ 流速：0.3mL/min 进样量：10uL Time/min A/% B/% 0.1%甲酸水 乙腈 0.0 80 20 1.0 80 20 3.0 65 35 5.0 65 35 5.5 20 80 6.5 20 80 6.8 80 20 8.0 80 20 表1四种黄曲霉毒素液相色谱梯度洗脱表 2.质谱参数： 以下参数以珀金埃尔默 QSight 210三重四极杆质谱仪为例，目标化合物质谱参数见表2和表3。 化合物 母离子(m/z) 子离子(m/z) CE(V) EV(V) CCL2(V) 黄曲霉毒素B1 313.0 285.0* -38 54 -176 313.0 241.2 -12 54 -201 黄曲霉毒素B2 315.0 259.0 -28 57 -172 315.0 287.1* -21 62 -216 黄曲霉毒素G1 329.0 243.2* -27 55 -108 329.0 311.2 -13 52 -188 黄曲霉毒素G2 331.1 285.0 -37 40 -128 331.1 245.1* -38 40 -128 表24种黄曲霉毒化合物质谱参数表(*为定量离子对) 离子源 ESI+ 喷雾电压 5500V 反吹气 90 雾化气 180 离子源温度 400°C 表3质谱离子源参数 结果与讨论 图1中展示了采用4种黄曲霉毒素的提取离子流色谱图，经色谱条件优化，各个化合物的峰型对称，获得优异的色谱分离效果，图2为4种黄曲霉毒素标准曲线，表4为相关系数和检出下限及重复性。 化合物 线性范围(ug/L) 相关系数R2 检出下限 0.5ug/L LOQ(ug/kg) RSD/%n=6 AFB1 0.12~18.0 0.9975 0.03 3.21 AFB2 0.03~4.9 0.9939 0.03 4.25 AFG1 0.11~17.2 0.9982 0.05 4.77 AFG2 0.14~5.37 0.9979 0.05 3.90 图2 4种黄曲霉毒素线性和相关系数 结论 本文采用QSight LX50 UHPLC-QSightTM 210三重四极杆液质联用系统建立了快速，高灵敏度和可靠的LC-MS/MS实验方法测定中药材及饮片中黄曲霉毒素。本方法具有分析速度快、灵敏度高等特点，适用于中药质检部门对中药材及饮片中黄曲霉毒素的定性定量分析。 ( 参考文献 ) ( [1].2351黄曲霉毒素测定法公示稿中国药典，国家药典委员会。 ) 珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司 地址：上海张江高科技园区张衡路1670号 邮编：201203 电话：021-60645888 传真：021-60645999 ww.perkinelmer.com.cn ( 版权 所有 ◎ 2 019，Perk i nElm e r， Inc. 保 留 所 有 权 利。Pe r ki n Elme r 是 Perki n Elmer ， Inc. 的注册商 标 。其它所有商标均 为其 各自 持 有 者 或所有者的财 产 。 ) 本资料中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 本文采用QSight LC-MS/MS液质联用系统，建立了药材及饮片中黄曲霉毒素残留分析的整体解决方案。本方法具有分析速度快、灵敏度高等特点，适用于中药质检部门对中药材及饮片中黄曲霉毒素的定性定量分析。