人参中人参皂苷Rg1，人参皂苷Re和人参皂苷Rb1检测方案(液相色谱仪)

【仪电分析】人参中三种有效成分的测定-高效液相色谱法 本品为五加科植物人参 Panax ginseng C. A. Mey. 的干燥根和根茎。多于秋季采挖，洗净经晒干或烘干。栽培的俗称“园参”，播种在山林野生状态下自然生长的称“林下山参”，习称“籽海”。 一、方法原理 人参有效成分为人参皂苷Rgi，人参皂苷 Re 和人参皂苷Rbi，其在203nm 处有较强的紫外吸收。处理后的样品通过色谱柱后各组分得到分离，用紫外检测器检测，用保留时间定性，峰面积外标法定量，理论板数按人参皂苷 Rg1 峰计算应不低于6000. 二、主要仪器及试剂 a.高效液相色谱仪： LC220， 配备紫外检测器； b.万分之一天平； c.超声波清洗机； d.索式提取器； e.甲醇：色谱纯； f.乙腈：色谱纯； g.三氯甲烷：色谱纯。 三、实验方法 3.1色谱参考条件 色谱谱：C18， 4.6×250mm； 柱温：30℃； 流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B； 检测波长：203 nm； 梯度： (阴影部分为药典梯度后加上的回复初始条件的梯度) 时间/min 0~35 35~55 55~70 70~100 100~105 105~120 流动相A% 19 19→29 29 29→40 40→19 19 流动相B% 81 81→71 71 71→60 60→81 81 3.2对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rgi对照品、人参皂苷 Re 对照品及人参皂苷Rbi对照品，加甲醇制成每1ml各含 0.2mg的混合溶液，摇匀，即得。 3.3供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶溶，连同滤纸筒移人100ml 锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理(功率250W，频率50kHz) 30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 四、实验结果 4.1对照品高效液相色谱图 对照品溶液的色谱图如图1所示： [mV] 图1人参对照品色谱图 4.2供试品高效液相色谱图 供试品溶液的色谱图如图2所示： [mV] 图2人参供试品色谱图 4.3重复性 对照品连续五针人参皂苷Rgi对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb 对照品的RSD分别为0.53%、0.32%、0.41%； 供试品两个平行样相对标准偏差为1.02%、0.95%。 以普通C18色谱柱做人参时的改良方案 以普通C18色谱柱做人参供试品时，因样品中复杂的残留按常规梯度无法冲洗出来，会引起后续试验过程中冲洗出大量残留的情况，所以需要在实验结束后加-——一个高有机相流动相的清洗梯度： 81 55~70 70~90 90~95 95~105 105~110 110~120 流动相A% 19 19→29 29 29→36 流动相B% 81 81→71 71 71→64 功能 流量[ml] 分段T[m] 累计T[m] 1A%) B(%) 1 0 1.000 35.0 35.0 19 81 2 1 1.000 20.0 55.0 29 71 3 0 1.000 15.0 70.0 29 71 4 1 1.000 20.0 90.0 38 64 5 1 1.000 5.0 95.0 80 20 6 0 1.000 10.0 105.0 80 20 7 1 1.000 5.0 110.0 19 81 8 0 1.000 10.0 120.0 19 81 [ml] 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 U.2 0.1 b.0 12.5 25.0 37.5 50.0 62.5 75.0 87.5 100.0 112.5m (1(2) 505623644 (3) 86.7361 【仪电分析】人参中三种有效成分的测定-高效液相色谱法本品为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey. 的干燥根和根茎。多于秋季采挖，洗净经晒干或烘干。栽培的俗称“园参”，播种在山林野生状态下自然生长的称“林下山参”，习称“籽海”。一、方法原理   人参有效成分为人参皂苷Rg1，人参皂苷Re和人参皂苷Rb1，其在203nm处有较强的紫外吸收。处理后的样品通过色谱柱后各组分得到分离，用紫外检测器检测，用保留时间定性，峰面积外标法定量，理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000。二、主要仪器及试剂 a. 高效液相色谱仪： LC220，配备紫外检测器；b. 万分之一天平；c. 超声波清洗机；d. 索式提取器；e. 甲醇：色谱纯；f. 乙腈：色谱纯；g. 三氯甲烷：色谱纯。三、实验方法3.1 色谱参考条件色谱柱：C18，4.6×250mm；柱温：30℃；流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B；检测波长：203 nm；梯度：（阴影部分为药典梯度后加上的回复初始条件的梯度）时间/min0~3535~5555~7070~100100~105105~120流动相A%1919→292929→4040→1919流动相B%8181→717171→6060→81813.2 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，摇匀，即得。3.3 供试品溶液的制备取本品粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移人100ml 锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。四、实验结果4.1 对照品高效液相色谱图对照品溶液的色谱图如图1所示： 图1 人参对照品色谱图4.2 供试品高效液相色谱图供试品溶液的色谱图如图2所示： 图2 人参供试品色谱图4.3 重复性对照品连续五针人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品的RSD分别为0.53%、0.32%、0.41%；供试品两个平行样相对标准偏差为1.02%、0.95%。以普通C18色谱柱做人参时的改良方案以普通C18色谱柱做人参供试品时，因样品中复杂的残留按常规梯度无法冲洗出来，会引起后续试验过程中冲洗出大量残留的情况，所以需要在实验结束后加一个高有机相流动相的清洗梯度：时间/min0~3535~5555~7070~9090~9595~105105~110110~120流动相A%1919→292929→3636→808080~1919流动相B%8181→717171→6464→202020~8181       如下图所示，连续两针后面一针不再受到残留杂质出峰的干扰：