菊花中绿原酸、木犀草甘和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸检测方案(液相色谱仪)

【仪电分析】菊花中三种有效成分的测定一高效液相色谱法 中药菊花是菊科植物菊 Cheysanthemum morifolium Ramat 的干燥头状花絮。9~11月花盛开时分批采收，阴干或焙干，或熏、蒸后晒干。菊花味苦、甘，性微寒，有散风清热，平肝明目，清热解毒的功效，用于风热感冒，头痛晕眩，，目赤肿痛，眼目昏花，疮痈肿毒。仪电分析参照《中华人民共和国药典》2020版中菊花测定要求，使用带紫外检测器的 LC220高效液相色谱仪对菊花中绿原酸、木犀草甘和3，5-0-双咖啡酰基奎宁酸三种有效成分进行测定。 一、方法原理 菊花有效成分为绿原酸、木犀草甘和3，5-O-双咖啡酰基奎宁酸，其在348nm 处有较强的紫外吸收。衍生后的样品通过色谱柱后各组分得到分离，用紫外检测器检测，用保留时间定性，峰面积外标法定量。 二、主要仪器和试剂 a. LC220 高效液相色谱仪，带紫外检测器； b. 万分之一天平； C. 超声波水浴； d. 甲醇，色谱纯； e. 乙腈，色谱纯； f. 磷酸，色谱纯。 三、实验方法 3.1对照品溶液的制备 取绿原酸对照品、木犀草苷对照品、3，5-0-双咖啡酰基奎宁酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1mL含绿原酸35 ug， 木犀草苷 25 ug，3，5-0-二咖啡酰基奎宁酸80 ug的混合溶液，，1即得(10℃以下保存)。 3.2供试品溶液的制备 取本品粉末(过一号筛)约0.25 g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人70%甲醇25ml，l，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率45 kHz)40分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 3.3高效液相色谱仪参考条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A， 以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为348 nm。理论板数按3，5-0-二咖啡酰基奎宁酸峰计算应不低于8000。梯度洗脱程序如下表1(因菊花样品中一有机杂质较多，所以40→70 min 为冲洗梯度，，以防影响后面样品出峰)： 表1高效液相色谱梯度洗脱程序 时间/min 0~11 11~30 30~40 40~50 50~55 55~70 流动相A% 10→18 18→20 20 20→60 60→10 10 流动相B% 90→82 82→80 80 80→40 40→90 90 四、实验结果 4.1对照品高效液相色谱图 [mV] 图1对照品高效液相色谱图 4.2供试品高效液相色谱图 图2供试品高效液相色谱图 4.3重复性 谱图相叠后重复性很好，目标峰的 RSD 分别为 0.71%、0.69%、0.75%。 图3供试品重复性测试图谱叠放 【仪电分析】菊花中三种有效成分的测定—高效液相色谱法中药菊花是菊科植物菊Cheysanthemum morifolium Ramat的干燥头状花絮。9~11月花盛开时分批采收，阴干或焙干，或熏、蒸后晒干。菊花味苦、甘，性微寒，有散风清热，平肝明目，清热解毒的功效，用于风热感冒，头痛晕眩，目赤肿痛，眼目昏花，疮痈肿毒。仪电分析参照《中华人民共和国药典》2020版中菊花测定要求，使用带紫外检测器的LC220高效液相色谱仪对菊花中绿原酸、木犀草甘和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸三种有效成分进行测定。一、方法原理菊花有效成分为绿原酸、木犀草甘和3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸，其在348nm处有较强的紫外吸收。衍生后的样品通过色谱柱后各组分得到分离，用紫外检测器检测，用保留时间定性，峰面积外标法定量。二、主要仪器和试剂   a. LC220高效液相色谱仪，带紫外检测器；b. 万分之一天平；c. 超声波水浴；d. 甲醇，色谱纯；e. 乙腈，色谱纯；f. 磷酸，色谱纯。三、实验方法3.1 对照品溶液的制备取绿原酸对照品、木犀草苷对照品、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1 mL含绿原酸35 μg，木犀草苷25 μg，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸80 μg的混合溶液，即得（10℃以下保存）。3.2 供试品溶液的制备取本品粉末（过一号筛）约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人70%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300 W，频率45 kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3.3 高效液相色谱仪参考条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为348 nm。理论板数按3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸峰计算应不低于8000。梯度洗脱程序如下表1（因菊花样品中一有机杂质较多，所以40→70 min为冲洗梯度，以防影响后面样品出峰）：表1 高效液相色谱梯度洗脱程序四、实验结果4.1 对照品高效液相色谱图图1对照品高效液相色谱图4.2 供试品高效液相色谱图图2 供试品高效液相色谱图4.3 重复性谱图相叠后重复性很好，目标峰的RSD分别为0.71%、0.69%、0.75%。图3 供试品重复性测试图谱叠放