夏天无中原阿片碱和盐酸巴马汀检测方案(液相色谱仪)

仪电分析 【仪电分析】药典夏天无——高效液相色谱法 夏天无为罂粟科植物伏生紫堇 Corydalis decumbens (Thunb.) Pers 的干燥块茎。春季或初夏出苗后采挖，除去茎、叶及须茎，洗净，干燥。夏天无粉味苦、微辛，性温。归肝经。主要功效为活血止痛，舒经活络，祛风除湿。用于中风偏瘫，头痛，跌扑损伤，风湿痹痛，腰腿疼痛。 1、 方法原理 参照《中华人民共和国药典2020版》中夏天无，原阿片碱和盐酸巴马汀为目标物，其中，原阿片碱的检测波长为289nm，盐酸巴马汀的检测波长为 345nm。以原阿片碱和盐酸巴马汀标准溶液定性，处理后的样品经色谱柱分离，峰面积外标法定量。 a. 高效液相色谱仪：LC220，具变波长功能； b.).万分之一天平； c. 蒸发回流装置及实验室常用玻璃仪器； d. 原阿片碱和盐酸巴马汀标准品。 仪电分析 3.1色普条件 IINESA 流动相：乙腈：三乙胺醋酸溶液(4mL三乙胺+15mL醋酸→500mL)=25：75； 色谱普：C18反相柱，250mm*4.6mm*5pm； 柱温：30℃； 进样量：10pL； 波长：0~10min：289nm， 10~15min ： 345nm， 15~16min：289nm。 3.2对照品溶液制备 准确称取原阿片碱对照品 10mg 于50mL容量瓶中，加1%盐酸溶液5mL溶解，再加甲醇至刻度，摇匀。另准确称取盐酸巴马汀对照品 10mg于100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。准确量取上述两种溶液各5mL于同司25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得40ppm 原阿片碱和 20ppm 盐酸巴马汀标准溶液。 3.3供试品溶液制备 准确称取夏天无粉 0.5g于具塞锥形瓶中， 准确加入甲醇50mL，定定重量。加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 4、 实验结果 仪电分析 4.1仪器稳定性 极小值=0.0000 极差值=0.0000 极小值=13.0069 标题 组分1->时间 组分1->浓度 组分1->面积 组分2-时间 组分2->衣度 组分2->面积 组分总浓度 组分总面积 复性测试OC 7.2403 0.0000 1355237.0000 13.0597 0.0000 1236784.6250 0.000 2592021.500 -重复性-3.. 7.2569 0.0000 1350842.1250 13.0528 0.0000 1244222.6250 0.000 2595064.750 复性测试OC 7.2111 0.0000 1369647.6250 13.0069 0.0000 1248151.3750 0.000 2617799.000 复性测试OC 7.3181 0.0000 1371979.1250 13.2278 0.0000 1247797.0000 0.000 2619776.000 复性测试0C 7.2861 0.0000 1377769.0000 13.1403 0.0000 1239865.3750 0.000 2617634.500 .复性测试OC 7.3111 0.0000 1356680.5000 13.1347 0.0000 1245591.2500 0.000 2602271.750 复性测试OC 7.2819 0.0000 1347025.7500 13.1389 0.0000 1232911.0000 0.000 2579936.750 8 RSD=0.0059 99 均值=2603500.500 10 ：大值=1248151.375 极大值=0.0000 ：大值=2619776.000 11 ：小值=1232911.000 极小值=0.0000 小值=2579936.750 12 极差值=0.0000 图1标样7针重复性测试 原阿片碱7针重复性：RSD=0.86% 盐酸巴马汀7针重复性： RSD=0.47% 4.2标准溶液对照谱图 图2混标谱图 4.3样品谱图 [mV] 图3样品谱图 计算已存档：均值与RSD(注：内标定量，务必选中内标组分序号) 回 标题 组分1-时间 组分1->浓度 组分1->面积 组分2->时间 组分2->浓度 组分2->面积 组分总浓度 组分总面积 I-样品重复 7.2528 0.0000 293004.0625 13.0986 0.0000 349675.5000 0.000 642679.563 I-样品重复 7.3319 0.0000 293676.5313 13.1986 0.0000 347755.5313 0.000 641432.063 3 RSD=0.0077 RSD=0.0000 RSD=0.0016 RSD=0.0054 RSD=0.0000 RSD=0.0039 RSD=0.0000 RSD=0.0014 4 平均值=7.2923 平均值=0.0000 2均值=293340.312 平均值=13.1486 平均值=0.0000 2均值=348715.500 平均值=0.0000 2均值=642055.812 5 极大值=7.3319 极大值=0.0000 大值=293676.531 极大值=13.1986 极大值=0.0000 大值=349675.500 极大值=0.0000 大值=642679.562 6 极小值=7.2528 极小值=0.0000 3小值=293004.062 极小值=13.0986 极小值=0.0000 3小值=347755.531 极小值=0.0000 3小值=641432.062 7 极差值=0.0791 极差值=0.0000 极差值=672.4688 极差值=0.1000 极差值=0.0000 极差值=1919.9688 极差值=0.0000 极差值=1247.5000 0计算已存档：均值与RSD(注：内标定量，务必选中内标组分序号) X 标题 组分1-时间 组分1->浓度 组分1->面积 组分2->时间 组分2->浓度 组分2->面积 组分总浓度 组分总面积 I-样品重复 7.3528 0.0000 293189.4688 13.2611 0.0000 347121.6875 0.000 640311.125 I-样品重复 7.2528 0.0000 293004.0625 13.0986 0.0000 349675.5000 0.000 642679.563 3 RSD=0.0097 RSD=0.0000 RSD=0.0004 RSD=0.0087 RSD=0.0000 RSD=0.0052 RSD=0.0000 RSD=0.0026 4 平均值=7.3028 平均值=0.0000 均值=293096.750 平均值=13.1798 平均值=0.0000 均值=348398.593 平均值=0.0000 均值=641495.375 5 极大值=7.3528 极大值=0.0000 3大值=293189.468 极大值=13.2611 极大值=0.0000 3大值=349675.500 极大值=0.0000 3大值=642679.562 6 极小值=7.2528 极小值=0.0000 3小值=293004.062 极小值=13.0986 极小值=0.0000 3小值=347121.687 极小值=0.0000 3小值=640311.125 7 极差值=0.1000 极差值=0.0000 极差值=185.4063 极差值=0.1625 极差值=0.0000 极差值=2553.8125 极差值=0.0000 极差值=2368.4375 图4双样双针 原阿片碱RD1%=0.11%，RD2%=0.05% 盐酸巴马汀RD1%=0.28%，RD2%=0.37% 4.4标准曲线 原阿片碱 图5原阿片碱标准曲线 盐酸巴马汀 图6盐酸巴马汀标准曲线 4.5计算 a)双样双针法(若与药典算法有出入请以药典为准)： b)标准曲线法 C原=0.0000305×293218.531-0.5637=8.3795mg/LC#=0.0000168×348557.047-0.2934=5.5624mg/L 仪电官网 微信公众号 1、          方法原理参照《中华人民共和国药典 2020版》中夏天无，原阿片碱和盐酸巴马汀为目标物，其中，原阿片碱的检测波长为289nm，盐酸巴马汀的检测波长为345nm。以原阿片碱和盐酸巴马汀标准溶液定性，处理后的样品经色谱柱分离，峰面积外标法定量。2、          主要仪器和试剂高效液相色谱仪：LC220，具变波长功能；万分之一天平；蒸发回流装置及实验室常用玻璃仪器；原阿片碱和盐酸巴马汀标准品。‍3、          实验方法3. 1 色谱条件流动相：乙腈:三乙胺醋酸溶液（4mL三乙胺+15mL醋酸→500mL）=25:75；色谱柱：C18反相柱，250mm*4.6mm*5μm；柱温：30℃；进样量：10μL；波长：0~10min：289nm，10~15min：345nm，15~16min：289nm。3.2 对照品溶液制备准确称取原阿片碱对照品10mg于50mL容量瓶中，加1%盐酸溶液5mL溶解，再加甲醇至刻度，摇匀。另准确称取盐酸巴马汀对照品10mg于100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。准确量取上述两种溶液各5mL于同一25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得40ppm原阿片碱和20ppm盐酸巴马汀标准溶液。3.3 供试品溶液制备准确称取夏天无粉0.5g于具塞锥形瓶中，准确加入甲醇50mL，称定重量。加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。  4、          实验结果4.1 仪器稳定性图1 标样7针重复性测试原阿片碱7针重复性：RSD=0.86%盐酸巴马汀7针重复性：RSD=0.47% 4.2 标准溶液对照谱图图2 混标谱图4.3 样品谱图‍图3 样品谱图图4 双样双针原阿片碱RD1%=0.11%，RD2%=0.05%盐酸巴马汀RD1%=0.28%，RD2%=0.37%4.4 标准曲线图5 原阿片碱标准曲线图6 盐酸巴马汀标准曲线 4.5 计算a) 双样双针法（若与药典算法有出入请以药典为准）：b)  标准曲线法