鼻渊舒口服液及鼻渊舒胶囊中中马兜铃酸Ⅰ检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-492Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-546 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8045 分析鼻渊舒口服液及鼻渊舒胶囊中马兜铃酸| LCMSMS-546 摘要：本文根据国家药典委员会2020年度国家药品标准提高中药补充课题公示中“辛芩系列制剂中马兜铃 酸Ⅰ专项检查”要求，参考2020年版《中国药典》九味羌活丸相关检查标准，建立了一种使用岛津高效液相色谱仪 Nexera X3 和三重四质杆质谱仪 LCMS-8045 联用测定鼻渊舒口服液、鼻渊舒胶囊中马兜铃酸Ⅰ含量的方法。结果表明：空白溶剂对马兜铃酸Ⅰ检测无干扰；马兜铃酸Ⅰ在0.5~100 ng/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数为0.9998，各浓度准确度在93.38~104.88%之间；对0.5 ng/mL的对照品溶液重复进样6针，保留时间和峰面积的 RSD 分别为 0.22%和3.29%；加标回收实验中，马兜铃酸Ⅰ的平均回收率在鼻渊舒口服液和鼻渊舒胶囊中分别为97.43%和98.55%，该方法可为鼻渊舒口服液、鼻渊舒胶囊的质量控制提供参考。 关键词：鼻渊舒口服液 鼻渊舒胶囊 LCMS-8045 马兜铃酸| 鼻渊舒口服液、鼻渊舒胶囊是具有疏风散热、祛湿通窍之功效的中药制剂，其复方组成为苍耳子，辛夷，细辛等。通常马兜铃属、细辛属中药材均不同程度含有强致癌物质及肾毒性物质马兜铃酸Ⅰ，因此本文根据2020年版《中国药典》九味羌活丸检查项下“马兜铃酸Ⅰ检查”及国家药典委员会2020年度国家药品标准提高中药补充课题公示(以下均简称“公示”)中“辛 芩系列制剂中马兜铃酸Ⅰ专项检查”的要求，使用岛津高效效相色谱仪 Nexera X3和三重四极杆质谱仪 LCMS-8045，建立了鼻渊舒口服液、鼻渊舒胶囊中马兜铃酸I的检查方法。 结果表明，该方法具专属性好，灵敏、稳定、线性范围宽、回收率高的特点，可供相关检测人员参考。 1.2分析条件 液相条件 色谱柱： Shim-pack Velox (50 mm×2.1 mml.D.， 1.8 um)，PN： 227-32007-02，岛津(上海)实验器材有限公司 流动相：A相-0.1%FA水溶液，B相-乙腈 流 速：0.3mL/min 柱温：30℃ 进样量：1uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为39%，洗脱程序见表1。 表1 洗脱程序 Time(min) Module Command Value 10 Pumps Pump B Conc. 42 12 Pumps Pump B Conc. 42 12.1 Pumps Pump B Conc. 39 13 Controller Stop 质谱条件 分析仪器： LCMS-8045 加热模块温度：300℃ 离子源： ESI*(4.0 kV) 雾化气流速：3.0 L/min DL 温度：250℃离子源温度：400℃ 加热气流速：10.0 L/min 扫描模式：多反应监测(MRM) 干燥气流速：10.0 L/min MRM参数：见表2 表2 MRM 参数 序号 化合物 CAS No. 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE (V) Q3 Pre Bias (V) 298.00* -13.00 -13.00 -20.00 1 马兜铃酸I 313-67-7 359.00 296.00 -14.00 -15.00 -30.00 *表示定量离子 1.2样品处理 (1)供试品溶液：a.鼻渊舒口服液：分别取6支鼻渊舒口服液样品，涡旋30s，每支精密量取 1.00mL置25mL容量瓶，加70%甲醇15mL，超声处理(功率250W， 频率40 kHz) 30 min，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀即得。b.鼻渊舒胶囊：分别取6粒鼻渊舒胶囊样品，每粒精密称取内容物0.18 g， 置25mL容量瓶，加70%甲醇15mL，超声处理(功率250W，频率频4率04 0k HkzH)z) 30 min， 加70%甲醇稀释至刻度，摇匀即得。 (2)标准工作液：取马兜铃酸Ⅰ对照品适量，精密称定，加70%甲醇溶解，作为标准储备液。精密量取标准储备液适量，加70%甲醇稀释制成0.5、1、2、5、10、20、50、100 n/mL的溶液作为标准工作液。 |结果与讨论 2.1专属性考察及标准样品 MRM 色谱图 图1马兜铃酸Ⅰ标准样品(蓝色，浓度5 ng/mL)与空白溶剂(红色) MRM 色谱图结果显示，空白溶剂对于定量(左图)及定性(右图)离子监测均无干扰。 2.2线性范围 将浓度为0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/mL标准工作液，按1.2中的分析条件上机分析， l，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，外标法建立校准曲线，结果如图2所示。 图2 校准曲线 2.3精密度实验 对浓度为 0.5 ng/mL 的标准溶液连续测定6次，考察精密度，结果如表3所示，保留时间和峰面积的 RSD分别为 0.22%和3.29%，精密度良好。 表3 精密度测试结果 项目 保留时间(min) 峰面积 4.590 265，506 2 4.578 274，293 3 4.571 250，621 4 4.561 253，424 5 4.565 258，762 6 4.568 259，137 RSD(%) 0.22 3.29 2.4样品测定 取鼻渊舒口服液、鼻渊舒胶囊供试品溶液按1.2中的分析条件上机分析；根据国家药典委员会2020年度国家药品标准提高中药补充课题公示中“辛辛系列制剂中马兜铃酸Ⅰ专项检查”的要求，鼻渊舒口服液每1.00mL含马兜铃酸Ⅰ不得过 0.54 ug，鼻渊舒胶囊每粒含马兜铃酸Ⅰ不得过 0.84 ug。 样品检测结果：本实验所测试的鼻渊舒口服液中检出马兜铃酸Ⅰ，以外标法定量计算马兜铃酸Ⅰ的浓度为0.815 ng/mL，含量为 20.375 ng/mL， 低于限量要求；鼻渊舒胶囊中未检出马兜铃酸Ⅰ。检测结果如图3及表4所示。 图3 鼻渊舒口服液(左)、鼻渊舒胶囊(右)供试品及对照品色谱图 (红色：对照品20 ng/mL，蓝色：供试品) 表4 鼻渊舒口服液、鼻渊舒胶囊供试品测试结果 项目/编号 鼻渊舒口服液 鼻渊舒胶囊 含量 (ng/mL) 含量 (ng/粒) 1 20.30 BLQ 2 21.68 BLQ 3 19.80 BLQ 4 20.83 BLQ 5 20.03 BLQ 6 19.58 BLQ 平均值 20.37 / RSD(%) 3.80 / *BLQ表示低于定量限 2.5加标回收率实验 分别取鼻渊舒口服液、鼻渊舒胶囊囊品6份，加入马兜铃酸Ⅰ对照品溶液适量，按1.2方法进行前处理，考察回收率，回收率如表5、6所示。 表5加标回收率考察(鼻渊舒口服液) 序号 样品含量(ng/mL) 加标量(ng/mL) 实测值 (ng/mL) 回收率(%) 平均回收率 0.812 5.0 5.591 96.2 97.43 2 0.867 5.0 5.738 97.8 3 0.792 5.0 5.624 97.1 4 0.833 5.0 5.746 98.5 5 0.801 5.621 96.9 6 0.783 5.673 98.1 表 6 加标回收率考察(鼻渊舒胶囊) 序号 样品含量(ng/mL) 加标量(ng/mL) 实测值 (ng/mL) 回收率(%) 平均回收率 1 BLQ 5.071 101.42 98.55 2 BLQ 4.628 92.56 3 BLQ 5.0 4.773 95.46 4 BLQ 5.0 5.079 101.58 5 BLQ 5.0 4.882 97.64 6 BLQ 5.0 5.133 102.66 * BLQ表示低于定量限，加标回收率考察时，样品中马兜铃酸Ⅰ按“0”值计算。 结论 本文参考2020年版《中国药典》九味羌活丸相关检查标准，建立了一种使用岛津高效液相色谱仪NexeraX3和三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 联用测定鼻渊舒口服液、鼻渊舒胶囊中马兜铃酸Ⅰ含量的方法。该方法具有专属性强、灵敏度高、重复性好的特点，满足国家药典委员会2020年度国家药品标准提高中药补充课题公示中“辛芩系列制剂中马兜铃酸Ⅰ专项检查”的要求，，可供相关检测人员参考。 岛津应用云 鼻渊舒口服液、鼻渊舒胶囊是具有疏风散热、祛湿通窍之功效的中药制剂，其复方组成为苍耳子，辛夷，细辛等。通常马兜铃属、细辛属中药材均不同程度含有强致癌物质及肾毒性物质马兜铃酸Ⅰ，因此本文根据2020年版《中国药典》九味羌活丸检查项下“马兜铃酸Ⅰ检查”及国家药典委员会2020年度国家药品标准提高中药补充课题公示（以下均简称“公示”）中“辛芩系列制剂中马兜铃酸Ⅰ专项检查”的要求，使用岛津高效液相色谱仪Nexera   X3和三重四极杆质谱仪LCMS-8045，建立了鼻渊舒口服液、鼻渊舒胶囊中马兜铃酸Ⅰ的检查方法。     结果表明，该方法具专属性好，灵敏、稳定、线性范围宽、回收率高的特点，可供相关检测人员参考。