超高效液相色谱三重四极杆质谱测定化妆品中丙烯酰胺

超高效液相色谱三重四极杆质谱测定化妆品中丙烯酰胺 摘要：本文使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8040 联用建立一种外标法测定化妆品中丙烯酰胺的方法。借助超高效液相色谱LC-30A在2.5 min 内实现快速分离，三重四极杆质谱仪 LCMS-8040 进行定量分析，因此可以快速、准确地测定丙烯酰胺。丙烯酰胺的线性良好，相关系数0.9999；不同浓度的精密度实验结果表明：其保留时间和峰面积相对标准偏差分别在0.09~0.28%和1.35~1.54%之间，仪器精密度良好；丙烯酰胺的检出限为0.11ug/L， 定量限为 0.42 ug/L；样品加标回收率为75.5~112.2%之间。 关键词：化妆品丙烯酰胺超高效液相色谱仪三重四极杆质谱仪 丙烯酰胺(Acrylamide， CAS 号：：79-06-1)作为常见工业原料聚丙烯酰胺中未聚合单体残留在于化妆品当中。丙烯酰胺经皮吸收进入人体中可转化为环丙酰胺，并与谷胱甘肽、血红蛋白和 DNA结合，各种代谢产物经尿液排出。丙烯酰胺对啮齿类动物具有神经毒性、生殖毒性和致癌作用；职业暴露可引起人体神经毒性，尽管目前流行病学研究仍不能充分证明其是否会增加人类患恶性肿瘤的风险，但是欧盟化妆品法(Regulation(EC)1223/2009)和我国化妆品法规都已将丙烯酰胺列为化妆品中的禁用物质。对于聚丙烯酰胺中残留的丙烯酰胺单体，规定在驻留类护肤品中丙烯酰胺单体最大残留为 0.1 mg/kg， 以及在其他物品中丙烯酰胺单体最大残留量为 0.5 mg/kg。 本文采用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8040联用，建立了化妆品中丙烯酰胺的分析方法，此方法操作简单，分析快速、选择性强和灵敏度高。 1.实验部分 1.1仪器 岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 与三重四极杆质谱仪LCMS-8040 联用系统 1.2分析条件 液湘色谱条件 分析仪器： LC-30A系统 色谱柱： Shimadzu Shim-pack XR-ODS III 2.0mmI.D.x150 mmL.，2.2 um 流动相：：甲醇：甲酸水溶液(30：70，v/v) 流速：0.35mL/min 柱温：40℃ 进样体积：5.0uL 洗脱方式：等度洗脱 质谱条件 分析仪器： LCMS-8040 离子源：ESI，正离子扫描干燥气：氮气15 L/min离子源接口电压：4.5kV碰撞气：氩气 雾化气：氮气3.0L/min 脱溶剂管温度：250℃ 加热模块温度： 4 0 0 ℃ 延迟时间：3ms 扫描模式：多反应监测 (MRM) 驻留时间：：100 ms MRM参数： MRM分组采集，见表1 表1 MRM参数 名称 前体离子 产物离子 Q1 Pre CE(V) Q3 Pre Bias(V) Bias(V) 丙烯酰胺 72.1 55.0 -12 -15 -21 27.1 -12 -22 -29 44.1 -12 -26 -17 *表示定量离子 2.样品前处理 准确称取样品0.20 g， 置5mL塑料离心管中，然后加 0.15 mL 0.02 mol/L 的醋酸铵水溶液，涡旋30 s， 再加2.0mL乙腈，涡旋 60 s 后， 以10000 rpm 转速离心10 min， 取上清液，氮气吹干，残渣加2 mL乙腈：水溶液(10：90，V/V)复溶，涡旋60 s， 以10000 rpm 转速离心5 min， 经0.45 p.m 微孔滤膜过滤后，用液质分析。 3.结果与讨论 3.1标准样品一级质谱图和产物离子扫描质谱图 图1丙烯酰胺的一级质谱图(左图)和产物离子扫描质谱图 (CE 值-35V，右图) 3.2标准样品的 MRM色谱图 图2 丙烯酰胺标准样品的 MRM 色谱图 (5ug/L) 图3丙烯酰胺标准曲线 3.3标准曲线、检出限和定量限 用甲醇配制丙烯酰胺标准储备液。将该储备液用乙腈：水溶液(10：90，， V/V)稀释成0.5、1.0、5.0、20 和 100 ug/L 不同浓度的标准工作液。按1.2中的分析条件进行测定，外标法制作标准曲线，如图3所示。相关系数为0.9999，线性良好。丙烯酰胺的检出钥为 0.11ug/L， 定量限为0.42 ug/L. 3.4仪器精密度实验 配制如表3浓度的标液，平行进样6次。丙烯酰胺的保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.09~0.28%和1.35~1.54%之间，仪器精密度良好。 表3丙烯酰胺的保留时间和峰面积重复性结果(n=6) No RSD%(1.0pg/L) RSD%(5.0 pg/L) RSD% (50 ug/L) R.T Area R.T Area R.T Area 1 1.060 4，790 1.062 23，836 1.057 257，780 2 1.066 4，995 1.061 23，266 1.056 263，987 3 1.058 4，882 1.060 23，555 1.055 255，043 4 1.062 4，878 1.061 24，075 1.056 255，986 5 1.061 4，860 1.059 23，356 1.056 262，643 6 1.058 4，875 1.061 24，117 1.058 254，835 RSD% 0.28 1.35 0.09 1.53 0.09 1.54 3.5加标回收率实验 样品中添加标液，按照前述样品制备方法进行处理，加标浓度如表4，各平行4次。测试结果显示：紧肤水的样品加标回收率在85.1~112.2%之间；面霜的样品加标回收率在75.5~84.0%之间；具体结果如表4。样品基体的色谱图与加标样的色谱图如下图所示。 图4紧肤水样品的色谱图 图5紧肤水加标样(0.05 mg/kg)的色谱图 表4加标样的回收率结果(n=4) 样品名称 样品浓度 加标平均回收率% (mg/kg) 0.01 mg/kg 0.05 mg/kg 0.50 mg/kg 紧肤水 0.002 85.1 112.2 98.1 面霜 0.008 75.5 84.0 79.2 4.结论 使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8030 联用测定化妆品中丙烯酰胺。丙烯酰胺的线性良好，相关系数均大于0.9999；检出限分别为 0.11 ug/L(0.0011 mg/kg)，定量限分别为 0.42 ug/L(0.0042 mg/kg)；加标回收率在75.5~112.2%之间，完全满足检测的要求。