抗体药物中吐温80检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA20-730Excellence in Science Excellence in ScienceLC-263 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel： 86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn 岛津生物兼容液相 Nexera Bio 联合蒸发光散射检测器测定体药物中吐温80的含量 LC-263 摘要：本文采用岛津生物兼容液相 Nexera Bio， 建立了抗体药物中吐温80含量测定的方法。该方法中，吐温80在50~1000 ug/mL范围内线性良好，相关系数为 0.9947。精密度实验中，吐温80的保留时间 RSD%为 0.05%，峰面积RSD% 为2.49%。实验结果表明，该方法能快速准确地测定吐温80的含量。 关键词： Nexera Bio吐温80蒸发光散射检测器 吐温80又称聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯，简称聚山梨酯-80，具有优良的乳化、分散、润湿等性能，在食品、医药等行业应用非常广泛，可用作乳化剂、润湿剂等，也用作某些水中难溶药物的增溶剂，避免少量难溶性成分的析出。 抗体药物中吐温80的加入，能降低搅动、摇晃、冻融等过程中蛋白聚集，也可防止蛋白被吸附到容器表面等。在抗体药物制剂中加入吐温80同时也不能忽视其可能带来的毒副作用。吐温80是亲水性的表面活性剂，具有很强的破裂细胞膜的作用而引起刺激性，溶血性和组胺释放(致敏性)。吐温80作为一个聚合物本身纯度波动极大，高纯度的吐温80是无色透明的， 实验部分 1.1仪器 生物兼容液相系统Nexera Bio，配置信息如下： 而大多数吐温产品则是微黄到棕色，含有大量杂质或降解产品。吐温80中亲脂成分包括不饱和脂肪酸、这些不饱和脂肪酸成分容易降解而产生更多的有毒成分，由此而产生的毒副反应将会超过产品本身带来的益处。因此，使用吐温80是有严格限制条件的，它是一种有潜在不安全性的辅料，使用不当会对人的健康造成很大的影响。因此建立抗体药物中吐温80的含量检测的方法对控制药物辅料安全性具有重要意义。 本实验使用生物兼容液相 Nexera Bio 联合蒸发光散射器(ELSD)建立了抗体药物中吐温80含量测定方法，该方法分析速度快，准确度好。 系统控制器：CBM-20A自动进样器：SIL-20AC XR输液泵： LC-20AD XR脱气机： DGU-20A3R检测器： ELSD-LT II色谱工作站： Labsolutions Ver. 5.98 1.2分析条件 色谱柱：ShimNex S-C18-SAA (150 ×4.6mml.D.， 5um， 岛津(上海)实验器材有限公司岛津，FP/N：380-01247-24) 流动相：A-1%乙酸-水溶液；B-1%乙酸-异丙醇溶液 进样体积：10uL柱温：40℃流速：1.0mL/min检测器： ELSD漂移管温度：80℃雾化气：350MPa 洗脱方式：梯度洗脱，B相起始浓度为10%，时间程序如表1所示。 表1 梯度洗脱时间程序 时间(min) 单元 处理命令 值 1.00 泵 B Conc 20 3.40 泵 B Conc 20 3.50 泵 B Conc 100 6.50 泵 B Conc 100 6.60 泵 B Conc 10 9.00 泵 B Conc 10 1.3流动相和标准品配制 流动相A： 取10mL的乙酸于990 mL水中，混匀，超声脱气即得； 流动相B：取10mL 的乙酸于990 mL 异丙醇中，混匀，超声脱气即得； 对照品储备液制备：称取标准品50.13 mg，用水溶解稀释成10 mg/mL； 利用对照品储备液配制线性标曲，浓度分别为50，100，200，500，1000 ug/mL。 结果与讨论 2.1标准曲线 图1 吐温80对照溶液(50~1000ug/mL)图谱(左)和吐温80标准曲线(右) 按1.2中的分析条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，采用外标法建立指数标准曲线，结果如图1所示，吐温80在50-1000 ug/mL线性浓度范围内，线性相关性良好，相关系数为 0.9947，准确度为91.2~110.3%。 2.2精密度实验 按照1.2分析条件测定，选择浓度为50 ug/mL 的吐温对照品溶液分别连续进样测定6次。吐温80的保留时间 RSD% 为 0.05%；峰面积RSD% 为 2.49%，结果见表2所示。实验结果表明，生物兼容液相系统NexeraBio具有良好的精密度。 表2 吐温对照品溶液精密度实验结果((n=6) 序号 保留时间((min) 峰面积 1 5.22 6，198 2 5.217 5.913 13 5.217 6，063 4 5.214 5，868 5 5.218 5，782 6 5.222 5，983 平均值 5.218 5，968 RSD% 0.05 2.49 2.3样品含量测定 将抗体药物制剂 T-1、、T-2直接进样分析，结果如表4所示。 图2 T-1抗体制剂色普图(左)和T-2抗体制剂色谱图(右) 表4抗体药物制剂T-1和T-2中吐温80含量测定结果 药物 保留时间 峰面积 浓度((ug/mL) T-1 5.216 14147 144.3 T-2 5.221 36012 404.1 结论 本实验使用岛津生物兼容液相系统 Nexera Bio 联合 ELSD检测器，建立了抗体药物中吐温80的含量测定方法。结果表明，吐温80 在50~1000 ug/mL 线性范围内线性良好，相关系数为0.9947。精密度实验中，连续进样6针，吐温80的保留时间 RSD 为0.05%；峰面积 RSD 为2.49%，仪器精密度良好。该实验方法分析速度快，准确性好。 岛津应用云 本实验使用岛津生物兼容液相系统Nexera Bio联合ELSD检测器，建立了抗体药物中吐温80的含量测定方法。结果表明，吐温80在50~1000 μg/mL线性范围内线性良好，相关系数为0.9947。精密度实验中，连续进样6针，吐温80的保留时间RSD为0.05%；峰面积RSD为2.49%，仪器精密度良好。该实验方法分析速度快，准确性好。